Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Основы микроб ГУсЭ.doc
Скачиваний:
34
Добавлен:
11.11.2019
Размер:
916.99 Кб
Скачать

Тема № 3. Физиология, биохимия бактерий. Питательные среды. Этапы выделения и идентификации чистых культур аэробных и анаэробных бактерий

Знание физиологии и биохимических свойств микроорганизмов позволяет провести идентификацию чистых культур бактерий.

Для получения чистых культур микроорганизмов, изучения особенностей их морфологии и физиологии, получения ценных метаболитов, а также для сох-ранения микроорганизмов в виде чистых культур в лабораториях и производ-ственных условиях.

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ

Изучение жизнедеятельности микробных клеток, процессов их питания, дыхания, роста, размножения, а также закономерностей взаимодействия с окружающей средой; ознакомление с типами дыхания и питания микроорга-низмов и техникой приготовления питательных сред, освоение методов выде-ления чистых культур аэробных и анаэробных микроорганизмов, методов иден-тификации чистых культур бактерий.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ

  1. Особенности питания и дыхания бактерий.

  2. Фазы роста и размножения бактерий в жидкой питательной среде.

  3. Основные питательные среды.

  4. Технику приготовления основных питательных сред.

  5. Получение чистых культур аэробных и анаэробных бактерий.

  6. Методы идентификации бактерий.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ

  1. Владеть техникой посевов и пересевов бактериальной петлей, иглой, пипеткой и шпателем.

  2. Приготовить питательные среды и определить рН.

  3. Выделить различными методами чистую культуру аэробных и анаэробных бактерий.

  4. Идентифицировать выделенную бактериальную культуру по культуральным и биохимическим свойствам.

Культивирование микроорганизмов в лабораторных условиях

В природе микроорганизмы существуют в смешанной популяции. Для изучения свойств микроорганизмов и определения их систематического по-ложения необходимо прежде всего изолировать отдельные виды микроорга-низмов и вырастить их в виде так называемых «чистых культур», а затем идентифицировать, то есть установить соответствие выделенных микроорга-низмов видам, описанным в специальных определителях.

Под понятием «чистая культура» подразумевается масса клеток, состоящая из микроорганизмов, принадлежащих одному виду и полученных как потомство одной клетки (см. схему 1).

Штамм — культура бактерий одного вида, выделенная из разных источников в разное время.

Вид — совокупность микроорганизмов, имеющих единое происхождение и генотип, сходных по морфологическим и биологическим свойствам.

Культивировать микроорганизмы можно лишь при создании определенных условий для их жизнедеятельности. Искусственные условия, которые исклю­чили бы загрязнение культуры другими видами, можно создать в пробирке, колбе или чашке Петри.

Вся посуда и питательные среды должны быть простерилизованы и после посева инокулята (микробного материала, используемого для посева) защищены от загрязнения извне, что достигается с помощью пробок или металлических колпачков и крышек.

Посев инокулята

Посев инокулята является первым этапом исследования. В практической работе для получения чистых культур микроорганизмов используют одну из модификаций метода высева на чашки со средой. Эти методы основаны на том, что отдельные микроорганизмы иммобилизуются на поверхности или в глубине питательной среды, в которую добавлен агар или какое-нибудь другое гелеобразующее вещество.

Посев петлей (метод истощающего штриха)

Предполагает высев бактериологической петлей из накопительной культуры на поверхность агаризованной среды в чашках Петри. На первом этапе петлей с культурой наносят ряд параллельных штрихов на агаризованной среде

(рис. 9, А). Петлю стерилизуют, остужают о незасеянную часть агаризованной среды и проводят серию штрихов в направлении, перпендикулярном первым (рис. 9, Б). Затем петлю вновь стерилизуют, остужают и штрихи наносят в направлении В (рис. 9), а после очередной стерилизации – в направлении Г

(рис. 9).

Чашки помещают в термостат и через определенное время учитывают результаты. Обычно на штрихах А и Б вырастает большое число колоний (иногда сплошной рост), тогда как на штрихах В и Г формируются изолированные колонии.

Рисунок 9. Посев материала петлей на плотную питательную среду

Схема 1