- •Предисловие
- •Тема № 1. Правила работы и устройство микробиологической лаборатории. Методы микроскопии. Техника приготовления микроскопических препаратов. Простые и сложные методы окраски
- •Организация микробиологической лаборатории
- •Методы микроскопии. Техника приготовления микроскопических препаратов. Простые и сложные методы окраски
- •Исследование микроорганизмов в окрашенном состоянии
- •Окраска по Граму
- •Окраска кислотоустойчивых бактерий
- •Окраска спор
- •Окраска включений волютина
- •Обнаружение капсул у бактерий
- •Окраска по Романовскому – Гимзе
- •Тема № 2. Морфология бактерий. Ультраструктура бактериальной клетки
- •Морфология бактерий
- •Структура бактериальной клетки
- •Тема № 3. Физиология, биохимия бактерий. Питательные среды. Этапы выделения и идентификации чистых культур аэробных и анаэробных бактерий
- •Культивирование микроорганизмов в лабораторных условиях
- •Выделение и идентификация чистых культур аэробных и анаэробных бактерий
- •Особенности культивирования облигатно-анаэробных бактерий
- •Краткая характеристика питательных сред
- •Тема № 4. Асептика, антисептика, стерилизация
- •Стерилизация
- •Соотношение показаний манометра и температуры
- •Дезинфекция
- •Асептика
- •Антисептика
- •Классификация дезинфицирующих и антисептических средств
- •Тема № 5. Влияние факторов внешней среды на микроорганизмы
- •Изучение действия уф-света на микроорганизмы
- •Диско-диффузионный метод
- •Фитонциды
- •Тема № 6. Количественное определение микроорганизмов
- •Количественное определение микроорганизмов методом непосредственного (прямого) подсчёта
- •Определение количества дрожжевых клеток в 1 г прессованных хлебопекарных дрожжей с помощью камеры Горяева
- •Определение количества микробных клеток фотометрическим методом
- •Определение числа клеток высевом на плотные питательные среды (чашечный метод Коха).
- •Определение количества клеток высевом в жидкие среды (метод предельных разведений).
- •Наиболее вероятное количество клеток микроорганизмов в единице объёма исходной суспензии (по Мак-Креди)
- •Тема № 7. Возбудители бактериальных кишечных инфекций
- •Эшерихии
- •Сальмонеллы
- •Тема № 8. Основы санитарной микробиологии
- •Основные понятия и термины санитарной микробиологии
- •Общая характеристика санитарно-показательных микроорганизмов
- •Первая группа санитарно- показательных микроорганизмов
- •Вторая группа санитарно- показательных микроорганизмов
- •Санитарно-микробиологическое исследование почвы
- •Санитарно-микробиологическое исследование воды
- •100 Мл питьевой воды)
- •Санитарно-микробиологическое исследование воздуха
- •Тема № 9. Санитарная микробиология пищевых продуктов. Пищевые токсикоинфекции и интоксикации
- •Санитарная микробиология мясных продуктов
- •Бактериологическое исследование консервов
- •Санитарно-микробиологическое исследование молока и молочных продуктов
- •Санитарно-микробиологическое исследование смывов с объектов внешней среды
- •Пищевые токсикоинфекции и интоксикации
- •Тестовые задания
- •Литература.
- •Оглавление
Тема № 3. Физиология, биохимия бактерий. Питательные среды. Этапы выделения и идентификации чистых культур аэробных и анаэробных бактерий
Знание физиологии и биохимических свойств микроорганизмов позволяет провести идентификацию чистых культур бактерий.
Для получения чистых культур микроорганизмов, изучения особенностей их морфологии и физиологии, получения ценных метаболитов, а также для сох-ранения микроорганизмов в виде чистых культур в лабораториях и производ-ственных условиях.
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ
Изучение жизнедеятельности микробных клеток, процессов их питания, дыхания, роста, размножения, а также закономерностей взаимодействия с окружающей средой; ознакомление с типами дыхания и питания микроорга-низмов и техникой приготовления питательных сред, освоение методов выде-ления чистых культур аэробных и анаэробных микроорганизмов, методов иден-тификации чистых культур бактерий.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ
Особенности питания и дыхания бактерий.
Фазы роста и размножения бактерий в жидкой питательной среде.
Основные питательные среды.
Технику приготовления основных питательных сред.
Получение чистых культур аэробных и анаэробных бактерий.
Методы идентификации бактерий.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ
Владеть техникой посевов и пересевов бактериальной петлей, иглой, пипеткой и шпателем.
Приготовить питательные среды и определить рН.
Выделить различными методами чистую культуру аэробных и анаэробных бактерий.
Идентифицировать выделенную бактериальную культуру по культуральным и биохимическим свойствам.
Культивирование микроорганизмов в лабораторных условиях
В природе микроорганизмы существуют в смешанной популяции. Для изучения свойств микроорганизмов и определения их систематического по-ложения необходимо прежде всего изолировать отдельные виды микроорга-низмов и вырастить их в виде так называемых «чистых культур», а затем идентифицировать, то есть установить соответствие выделенных микроорга-низмов видам, описанным в специальных определителях.
Под понятием «чистая культура» подразумевается масса клеток, состоящая из микроорганизмов, принадлежащих одному виду и полученных как потомство одной клетки (см. схему 1).
Штамм — культура бактерий одного вида, выделенная из разных источников в разное время.
Вид — совокупность микроорганизмов, имеющих единое происхождение и генотип, сходных по морфологическим и биологическим свойствам.
Культивировать микроорганизмы можно лишь при создании определенных условий для их жизнедеятельности. Искусственные условия, которые исключили бы загрязнение культуры другими видами, можно создать в пробирке, колбе или чашке Петри.
Вся посуда и питательные среды должны быть простерилизованы и после посева инокулята (микробного материала, используемого для посева) защищены от загрязнения извне, что достигается с помощью пробок или металлических колпачков и крышек.
Посев инокулята
Посев инокулята является первым этапом исследования. В практической работе для получения чистых культур микроорганизмов используют одну из модификаций метода высева на чашки со средой. Эти методы основаны на том, что отдельные микроорганизмы иммобилизуются на поверхности или в глубине питательной среды, в которую добавлен агар или какое-нибудь другое гелеобразующее вещество.
Посев петлей (метод истощающего штриха)
Предполагает высев бактериологической петлей из накопительной культуры на поверхность агаризованной среды в чашках Петри. На первом этапе петлей с культурой наносят ряд параллельных штрихов на агаризованной среде
(рис. 9, А). Петлю стерилизуют, остужают о незасеянную часть агаризованной среды и проводят серию штрихов в направлении, перпендикулярном первым (рис. 9, Б). Затем петлю вновь стерилизуют, остужают и штрихи наносят в направлении В (рис. 9), а после очередной стерилизации – в направлении Г
(рис. 9).
Чашки помещают в термостат и через определенное время учитывают результаты. Обычно на штрихах А и Б вырастает большое число колоний (иногда сплошной рост), тогда как на штрихах В и Г формируются изолированные колонии.
Рисунок 9. Посев материала петлей на плотную питательную среду
Схема 1