Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Основы микроб ГУсЭ.doc
Скачиваний:
34
Добавлен:
11.11.2019
Размер:
916.99 Кб
Скачать

Общая характеристика санитарно-показательных микроорганизмов

В качестве СПМО предложено довольно много микроорганизмов, их можно условно разделить на три группы:

  • Индикаторы фекального загрязнения (обитатели кишечника человека и животных);

  • Индикаторы воздушно-капельного загрязнения (обитатели верхних дыхательных путей);

  • Индикаторы процессов самоочищения (обитатели внешней среды).

Первая группа санитарно- показательных микроорганизмов

В действующих нормативно-технических документах по контролю за сани­тарно-бактериологическими показателями воды, пищевых продуктов, почвы пре­дусмотрен учет БГКП.

БГКП — это грамотрицательные, не образующие спор, короткие палочки, сбраживающие глюкозу и лактозу с образованием кислоты и газа при 370,5С в течение 24–48 ч, не обладающие оксидазной активностью.

В настоящее время узаконена энтерококкометрия для молока, котлет с целью выяснения эффективности их термической обработки.

Протей. В настоящее время показано, что протей встречается в 98% случаев в выделениях кишечника человека и животных.

Обнаружение протея в воде и продуктах указывает на загрязнение объектов разлагающимися субстратами и свидетельствует о крайнем санитарном небла­гополучии. При обнаружении протея в пищевых продуктах их бракуют, а воду не разрешают употреблять для питья.

Клостридиум перфрингенс. Клостридиум перфрингенс длительно сохраняется во внешней среде за счет спорообразования, поэтому обнаружение его не свидетельствует о свежем фекальном загрязнении. На эти бактерии губительно действует сопутствующая микрофлора, но их споры устой­чивы к концентрациям активного хлора 1,2–1,7 мг/л воды. Такие дозы губительно действуют на энтеровирусы, поэтому клостридиум перфрингенс мо­жет служить косвенным показателем наличия в воде энтеровирусов.

Термофилы. Это целая группа СПМО, в основном споровых, растущих при температуре 55–60С. Обитают во внешней среде и являются показателем загрязнения навозом и компостом. В России их определяют при исследовании почвы, а также в консервах, как индикатор термической обработки, особенно при хранении их в условиях жаркого климата.

Бактериофаги. В качестве СПМО используют бактериофаги кишеч­ной палочки — колифаги, фаги сальмонелл и шигелл. Они обнаруживаются там, где есть соответствующие бактерии, к которым эти фаги адаптированы. Фаги выжи-вают во внешней среде более 9 месяцев.

Они ценны как показатель фекального загрязнения, особенно энтеро­вирусами, т.к. фаги выделяются из сточных вод с той же частотой, что и энтеровирусы.

Вторая группа санитарно- показательных микроорганизмов

Представители этой группы СПМО опре­деляются в воздухе, в молочных продуктах, в воде. К ним относится –зеленящий стрептококк (стрептококкус саливариус). Другим санитарно-показательным стрептококком является –гемо­ли­тический стрептококк, он обнаруживается в 80% у людей и, в основном, страдающих воспалительными заболеваниями верхних дыхательных путей. Он обладает гемолитическими свойствами.

Показателем санитарного неблагополучия является и золотистый стафилококк.

Санитарно-микробиологическое исследование почвы

Почва является важнейшей средой и природным резервуаром обитания микроорганизмов. Вместе с растениями и животными составляют сложные и многообразные биогеоценозы, состав, плотность, функциональная активность и прочие характеристики которых зависят от типа и структуры почвы, состава минеральных и органических веществ, физико-химического состояния, температуры, рН, влажности, концентрации углекислого газа, других факторов. В слое пахотной почвы толщиной 15 см на площади в 1 га может содержаться от 1 до 5-6 тонн микробной массы. Она максимальна на глубине 10-20 см. На глубине свыше 1-2 м микроорганизмы уже встречаются в незначительном количестве; начиная с глубины 5-6 м почва может быть стерильной.

Патогенные микроорганизмы чаще всего попадают в землю с испражнениями, мочой, гноем, мокротой, слюной и другими выделениями, через трупы людей и животных, погибших от инфекционных заболеваний. Патогенные и условно-патогенные микробы контаминируют почву при сбросе фекально-бытовых и сточных вод различных предприятий.

Сроки переживания патогенных для человека микробов в почве широко варьируют. Неспорообразующие бактерии – возбудители дизентерии, брюшного тифа, холеры, чумы, бруцеллеза, туляремии, туберкулеза – выживают в почве от нескольких дней до нескольких месяцев. Споры возбудителей столбняка, сибирской язвы, газовой гангрены могут сохраняться много лет. Более того, для спорообразующих бактерий рода Clostridium почва является естественной средой обитания.

Санитарно-микробиологическое исследование почвы проводят с целью предупредительного санитарного надзора, текущего санитарного надзора и по эпидемическим показаниям. При проведении текущего санитарного надзора ограничиваются установлением факта и оценкой степени фекального загрязнения почвы. Почвы с преобладанием бактерий, свидетельствующих о фекальном загрязнении, рассматривают как санитарно неблагополучные. Для определения давности фекального загрязнения почвы определяют несколько санитарно-показательных микроорганизмов. Присутствие в почве определенных концентраций кишечной палочки (Е.coli) и фекального стрептококка (Streptoccocus faecalis) указывает на свежее фекальное загрязнение, бактерий родов Citrobacter и Епtеrоbасtеr — на несвежее, а Clostridium perfringens — на давнее фекальное загрязнение.

Санитарно-микробиологическое исследование почвы с целью предупредительного надзора проводят по расширенному перечню показателей. Определяют коли-индекс – количество бактерий группы кишечной палочки (БГКП), обнаруженных в 1 г почвы, перфрингенс-титр – наименьшую массу почвы в граммах, в которой обнаруживаются особи Clostridium perfringens, общую численность сапрофитных, термофильных и нитрифицирующих бактерий в 1 г почвы.

Точечные пробы отбирают на пробной площадке из одного или нескольких слоев или горизонтов методом конверта. Выкапывается шурф 0,3 м x 0,3 м и глубиной 0,2 м. Поверхность одной из стенок шурфа очищают стерильным ножом. Затем из этой стенки вырезают почвенный образец, размер которого обусловлен заданной навеской, так, если необходимо отобрать 200 г почвы, размер образца 20 см x 3 см x 3 см, 500 г - 20 см x 5 см x 3 см. Точечные пробы отбирают ножом, шпателем или почвенным буром.

Объединенную пробу составляют путем смешивания точечных проб, отоб-

ранных на одной пробной площадке. Для бактериологического анализа с одной пробной площадки составляют 10 объединенных проб. Каждую объединенную пробу составляют из трех точечных проб массой от 200 до 250 г каждая, отобранных послойно с глубины от 0 до 5 см, от 5 см до 20 см. Времяот отбора проб до начала их исследования не должно превышать 1 суток.

Для приготовления среднего образца объемом 0,5 кг почву всех образцов одного участка высыпают на стерильный, плотный лист бумаги, тщательно перемешивают стерильным шпателем. Перед посевом почву просевают через сито диаметром 3 мм.

Для учета почвенных микроорганизмов достаточно навески от 1 до 10 г. В навеску почвы добавляют небольшое количество стерильной водопроводной воды до получения пастообразного состояния почвы, растирая ее в течение 5 минут. Из суспензии делают раститровку. Первое разведение навески почвы (1:10) делают в стерильной посуде (колба), добавляя к суспензии стерильную водопроводную воду в соотношении 1: 9 к весу почвы (например: 1 г почвенной суспензии разводят в 9,0 мл стерильной водопроводной воды, 10 г почвы - в 90 мл воды и т.д.). Приготовленые разведения суспензируют на шейкере 10-20 мин. За это время оседают грубые минеральные частицы почвы.Для приготовления последовательно убывающих концентраций почвы, из первого разведения, находящегося во флаконе, с содержанием почвы 0,1 г (10 -1) отбирают стерильной пипеткой 1,0 мл и переносят в про-

бирку с 9,0 мл стерильной водопроводной воды. При этом получают второе

разведение, содержащее 0,01 г/мл (10-2 ) почвы. Повторяя эту операцию, доводят разведение почвы до 0,0001 - 0,00001 г/мл (10-4 - 10 -5). Для приготовления каждого разведения используют отдельные пипетки. Приготовленные разведения используются для посева на различные питательные среды.

Титрационный метод определения индекса БГКП в почве

Из первого разведения почвенной суспензии (1:10), прошедшей предвари-

тельную обработку, стерильной пипеткой берут 10,0 мл, засевают во флаконы с 90,0 мл жидкой лактозо-пептонной среды (ЛПС) или среды Кесслера, что со-ответствует засеву 1 г почвы. Соотношение между навеской почвы или ее эквивалентным разведением и питательной средой 1:9, а для сред двойной концентрации - 1:1.

Посев меньших количеств (0,01 г, 0,001 г, то есть 10-2 , 10-3 и т.д.) делают по 1,0 мл из соответствующих разведений почвенной суспензии в про-бирки с 9,0 мл тех же сред. Титрование проводят до разведения 1:1000000, то есть 10-6 с регулярной сменой пипеток при переходе от одного разведения к другому. Посевы инкубируют в течение 48 ч при 370 C, через 24 ч инкубации проводят предварительную оценку посевов.

Отсутствие газообразования и помутнения через 48 ч инкубации выдают

окончательный отрицательный ответ. При наличии в посевах признаков роста: помутнения и газообразования или только помутнения - производится высев на поверхность среды Эндо.

Чашки с посевами помещают в термостат на 18 - 24 ч при температуре

37 0C. При отсутствии роста на чашках выдают отрицательный ответ. При наличии на поверхности среды Эндо розовых или красных колоний, малиновых с металлическим блеском или без него проводят микроскопию колоний с последующей постановкой оксидазного теста. Оксидазный тест предназначается для дифференциации бактерий семейства Еnterobacteriaceae от бактерий рода Pseudomonoas и других видов сапрофитных бактерий.

При наличии оксидазоотрицательных Гр - палочек по 2 -3 колонии каждого типа засевают параллельно в 2 пробирки в полужидкую или жидкую с поплавком среду с лактозой, разлитую в пробирки в количестве 4,0 - 5,0 мл, для подтверждения ферментации лактозы при температуре 37 0C. Учет производят через 18 ч инкубации. Если за это время происходит образование кислоты и газа, это свидетельствует о наличии бактерий группы кишечных палочек. Признаком газообразования является появление пузырьков газа, об образовании кислоты свидетельствует изменение цвета среды. При появлении только кислоты пробирки оставляют втермостате для окончательного ответа еще на 24 ч, при отсутствии газообразования через этот срок выдают окончательный отрицательный ответ, при появлении газообразования - положительный ответ. После выявления БГКП устанавливают титр, при этом принимается то предельное разведение почвы, в котором обнаруживаются колиформы.

Для перевода титра в индекс необходимо 1000 разделить на число, выража-

ющее титр. Так, при титре 0,01 индекс равен 100, а при титре 0,1 индекс равен 10.

Определение C. perfringens в почве

Метод основан на выращивании посевов в железосульфитном агаре в ус-

ловиях, приближенных к анаэробным, и подсчете числа черных колоний.

Из приготовленных почвенных разведений (до 1:10-6 ), прогретых при темпе-

ратуре 75 0 C в течение 20 минут для исключения вегетативных форм, по 1,0 мл переносится в два параллельных ряда пробирок. Затем во все пробирки на-ливают по 9 – 10 мл горячего железосульфитного агара и прогретого до 70- 80 0C (среду заливают по стенке пробирки, избегая образования пузырьков). Для создания анаэробных условий роста пробирки быстро охлаждают, помещая в емкости с холодной водой. Посевы инкубируют при 44 0C в течение 16 - 18 часов. При росте в среде черных крупных колоний

(грамположительные, каталазоотрицательные) выдают положительный

ответ о присутствии С. perfringens в 1 г почвы.