Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Основы микроб ГУсЭ.doc
Скачиваний:
34
Добавлен:
11.11.2019
Размер:
916.99 Кб
Скачать

Окраска спор

Некоторые виды бактерий образуют внутриклеточные (эндогенные) споры. В отличие от вегетативной клетки они обладают меньшим количеством свобод-ной воды, а также высоким содержанием липидов и кальция.

Зрелая спора с трудом поддается окрашиванию из-за малой проницаемости оболочки. При окраске по Граму спорообразующей культуры краска воспри-нимается только вегетативной частью микробной клетки, а спора остается бесцветной. Проницаемость ее оболочки резко увеличивается после обработки горячей соляной кислотой или при использовании концентрированного раст-вора краски с подогревом. Восприняв краску, спора при последующей обработ-ке кислотой не обесцвечивается, в то время как вегетативные клетки немед-ленно отдают краску.

Окраска спор по методу Ожешко

  1. Нанести несколько капель 0,5% соляной кислоты на нефиксированный мазок и нагреть до появления паров (2-3 мин).

  2. Слить кислоту, промыть водой, высушить.

  3. Зафиксировать в пламени.

  4. Окрасить по методу Циля − Нильсена. При этом споры окрашиваются в красный цвет, а вегетативные формы − в синий (рис. 6). Часто для окраски спор используют только метод Циля − Нильсена.

Рисунок 6. Споры возбудителя столбняка, окрашенные в красный цвет

Окраска включений волютина

Волютин - производное нуклеиновой кислоты - играет роль запасного питательного вещества. Среди включений запасного характера − жиры, гли-коген, волютин, который занимает особое место. На основании его присутствия и особого расположения в клетке ставят предварительный диагноз методом бактериоскопии при подозрении на дифтерию. Наиболее демонстративные результаты удается получить при окраске зерен волютина по методу Нейссера.

Методика проведения

1.Окрасить мазок уксуснокислой синькой Нейссера (2-3 мин).

2.Промыть.

3.Окрасить раствором Люголя (30 с).

4.Слить раствор Люголя и окрасить везувином (1 мин).

5. Промыть препарат и высушить.

Цитоплазма клетки, имеющая кислую реакцию, воспринимает щелочной краситель везувин и приобретает желтый цвет. Зерна волютина, прочно фиксировавшие ацетат цинка, − темно-синие, почти черные.

Реактивы для окраски по методу Нейссера

1. Уксуснокислая синька Нейссера

метиленового синего 0,1 г

спирта 96% 2 мл

уксусной кислоты крепкой 5 мл

воды дистиллированной 100 мл

2. Везувин

везувина 2 г

воды дистиллированной 300 мл

Прокипятить приготовленный раствор и, охладив, профильтровать.

Обнаружение капсул у бактерий

Некоторые микробы обладают способностью откладывать на поверхности своего тела мощный слизистый слой вокруг клеточной стенки, его называют капсулой. В состав капсул входят, главным образом, полисахариды, но у некоторых они содержат и полипептиды. Капсулы имеют консистенцию геля, поэтому при микроскопии живых бактерий они видны очень плохо. Для их обнаружения применяют негативную окраску. Все перечисленные методы относятся к позитивным, так как при их использовании окрашиваются микроб-ные клетки. При негативных способах краситель заполняет пространство вокруг бактерий, в результате чего они выглядят светлыми частицами на темном фоне.

Методика обнаружения капсул по методу Бурри

1. Смешать на предметном стекле немного капсульной культуры и каплю разведенной (1:9) туши; приготовить тонкий мазок.

2. Высушить на воздухе и бактериоскопировать. На темном фоне хорошо

видны бесцветные капсулы.

Модификация по Бурри − Гинсу включает создание фона краской конгорот, последующую фиксацию в 5% растворе НСl и дополнительную окраску водным фуксином. В результате общий фон − темного цвета, капсулы − бесцветные, а тела бактерий − красные.