Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Основы микроб ГУсЭ.doc
Скачиваний:
34
Добавлен:
11.11.2019
Размер:
916.99 Кб
Скачать

Соотношение показаний манометра и температуры

кипения воды

Показания манометра, атм

Температура кипения воды оС

Показания манометра, атм

Температура кипения воды оС

0

100

0,7

116

0,2

105

0,8

117

0,4

110

1,0

121

0,5

112

1,5

127

0,6

114

2,0

134

Основные используемые режимы стерилизации следующие: 15 – 30 мин. при избыточном давлении 0,5 атм (стерилизуют питательные среды с углеводами); 15-45 мин при избыточном давлении 1,0 атм (стерилизуют питательные среды без углеводов, воду, растворы, фильтры, посуду); 10 – 30 мин при избыточном давлении 1,5 атм (обеззараживают условно-патогенный материал).

Контроль режима стерилизации осуществляется с помощью химических тер-мотестов и искусственных биотестов.

Химические термотесты представляют собой вещества, изменяющие свой цвет или физическое состояние при стерилизации, в частности вещества, имеющие различную температуру плавления (табл. 2).

Таблица 2

Показатели температуры плавления порошков-индикаторов

Название химического вещества-индикатора

Температура плавления, оС

Название химического вещества-индикатора

Температура плавления, оС

Бензонафтол

110

Резорцин чистый

118

Антипирин

115

Бензойная кислота

121

На 100 г порошка индикатора прибавляют 0,01г сафранина, 0,005 г фуксина или метиленового синего.

Запаянные ампулы с порошком, смешанным с краской, помещают в стери-лизационную камеру. При достижении в камере определенной температуры порошок плавится, образуя сплав, окрашенный в цвет добавленной краски.

Бактериологический контроль режима стерилизации заключается в том, что в стерилизационную камеру помещают искусственные биотесты – пробирки с полосками марли, фильтрованной бумаги или шелковинками, зараженными микроорганизмами с известной устойчивостью к температурным воздействиям. На чашки с питательным агаром засевают 3-4 различных штамма споровых па-лочек из группы Bacillus mesentericus, выдерживающих кипячение в течение 2 ч. Посевы ставят в термостат на 48 ч., после чего их выдерживают при комнатной температуре в течение 5 суток. Затем культуры смывают с поверхности агара водой с помощью шпателя, сливают в колбочку со стерильными бусами и энер-гично встряхивают в течение 2-3 мин. Полученную взвесь микробов фильтруют через рыхлый ватный фильтр для удаления крупных частиц и разводят по стан-дарту до концентрации 2 млрд микробных клеток в 1 мл.

Кусочки марли или бельевой ветоши площадью около 1 см2 пропитывают микробной взвесью и раскладывают на дно пробирок, закрытых ватно-марле-выми пробками. Пробирки необходимо на несколько часов поставить в умерен-но теплое место (термостат, батарея центрального отопления) для того, чтобы биотесты проросли. После этого их можно хранить в лаборатории в течение года.

Зарубежные фирмы поставляют биотесты, представляющие собой полоски с нанесенными на них спорами одного или двух видов бактерий, со спорами из-вестной численности, со спорами и определенным количеством культуральной среды, суспензиями спор и т. д.

Биотесты закладывают в центральную часть каждого бикса или мешка, содер-жащих белье, перевязочный и другой материал, подлежащий стерилизации. После вскрытия бикса или мешка (во время работы) биотесты направляют в лабораторию.

В лаборатории в пробирку с биотестом заливают 5-10 мл сахарного бульона и посевы инкубируют в течение 48 ч. при 37 0С.

При наличии визуального роста готовят мазки или высевы на мясо-пептонный агар для идентификации культуры.

Стерилизация текучим паром (дробная стерилизация) — это обеспложива-ние объектов, разрушающихся при температуре выше 100 0С (питательные срды с аммиачными солями, молоко, желатин, крахмал некоторые углеводы). Обеспложивание проводят в паровом стерилизаторе при открытом спускном кране и незавинченной крышке или в аппарате Коха по 15-30 мин. в течение 3 дней подряд. При первой стерилизации погибают вегетативные формы микро-бов, некоторые споры при этом сохраняются и прорастают в вегетативные осо-би в процессе хранения питательных сред при комнатной температуре. После-дующая стерилизация обеспечивает достаточно надежное обеспложивание объекта.

Тиндализация — это стерилизация вещест, легко разрушающихся при вы-сокой температуре (витамины, аминокислоты); стерильность достигается пов-торным прогреванием объекта при температуре 60 0С по 1 часу ежедневно в течение 5-6 дней подряд.

Пастеризация — это обеспложивание многих пищевых продуктов (вино, пиво, соки), при этом достигается только частичная стерильность; споры микро-организмов не уничтожаются. Обеспложивание проводят при 65-80 0С в течение 10-60 мин, затем резко охлаждают. Последующее хранение при низкой температуре (4-5 0С) препятствует прорастанию спор и размножению оставшихся в продукте микроорганизмов.

Стерилизация ультрафиолетовыми лучами применяется для обеспложи-вания воздуха в микробиологических лабораториях, кондитерских цехах.

Ультрафиолетовые лучи (250 – 270 нм) используются для стерилизации центрифужных пробирок, наконечников для пипеток, материалов из термолабильной пластмассы. Время облучения определяется мощностью лампы, временем воздействия, степенью и видовым составом микроорганизмов загрязненного материала. Вегетативные формы более чувствительны к облучению, чем споры, которые в 3 – 10 раз более устойчивы. Ограничением при использовании данного метода стерилизации является низкая проникающая способность УФ-лучей и высокая поглощающая способность воды и стекла.

Рентгеновское и -облучение также эффективно для стерилизации пластмасс, пищевых продуктов, но требует строгого соблюдения правил безопасности. Наиболее чувствительны к -облучению вегетативные клетки бактерий, затем идут плесневые грибы, дрожжи, бактериальные споры и вирусы. В большинстве случаев для надежного уничтожения микроорганизмов достаточно дозы облучения 2,5 Мрад. -обучение используется для стерилизации антибиотиков, витаминов, гормонов, стероидов.

Радиационный метод применяют обычно на специальных установках при промышленной стерилизации изделий однократного применения.

Механические методы стерилизации

Фильтрование применяют в тех случаях, когда повышенная температура мо-жет резко повлиять на качество стерилизуемых материалов (питательные среды, сыворотки, антибиотики), а также для очистки бактериальных токсинов, фагов и различных продуктов жизнедеятельности бактерий. Как окончательный про-цесс он менее надежен, чем стерилизация паром, из-за большой вероятности прохождения микроорганизмов через фильтры.

Фильтры задерживают микроорганизмы благодаря поровой структуре их материала. Существуют два основных типа фильтров – глубинные и мембран-ные.

Глубинные фильтры состоят из волокнистых или гранулированных матери-алов, которые спрессованы, свиты или связаны в лабиринт проточных каналов. Частицы задерживаются в них в результате адсорбции и механического захвата в материале фильтра. Фильтры Шамберлана изготовляют из каолина с при-месью песка и кварца. Они имеют вид свечей с различными размерами пор и обозначаются L1, L2, L3 и т.д. Следует запомнить, что фильтры L5-L13 бактерий не пропускают. Для фильтра Беркефельда используют инфузорную землю. Размеры пор в порядке увеличения обозначаются буквами W, N, V.

Мембранные фильтры имеют непрерывную структуру; их получают из нитро-клетчатки, и захват ими частиц определяется, в основном, размером пор. В за-висимости от размера пор мембранные фильтры обозначают номерами 1-5 (диа-метры пор 350-1200 нм).

Фильтрацию материалов производят под вакуумом, который создают ваку-умным или водоструйным насосами. Фильтры Шамберлана и Беркефельда сое-диняют с вакуумной колбой Бунзена резиновыми трубками и перед фильтраци-ей стерилизуют в паровом стерилизаторе при 120 0С. Мембранные фильтры пос-ле предварительной стерилизации кипячением вставляют в аппарат Зейтца, состоящий из асбестовой пластинки, вмонтированной в металлическую ворон-ку, которую через резиновую пробку присоединяют к колбе Бунзена.

Контроль режима стерилизации

Для контроля режима стерилизации используют тест-культуру Bacillus stearothermophilus (споры погибают при 121 °С за 15 мин.).

Для контроля действия автоклава пользуются также физическим методом плавления: например, в автоклав помещают бензонафтол (температура плавления – 110 °С), антипирин (температура плавления – 113 °С), бензойную кислоту (температура плавления – 120 °С). Если температура в автоклаве доста-точна, вещества расплавляются и окрашиваются в цвет, соответствующий взятому красителю.