Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Основы микроб ГУсЭ.doc
Скачиваний:
34
Добавлен:
11.11.2019
Размер:
916.99 Кб
Скачать

Определение количества дрожжевых клеток в 1 г прессованных хлебопекарных дрожжей с помощью камеры Горяева

Для работы используют 0,1%-ную взвесь прессованных дрожжей (0,1 г/100 мл), которой заполняют камеру с помощью пипетки Пастера, и через несколько минут, когда дрожжи осядут на дно камеры,начинают подсчёт при объективе 8 X или 40 X. Для получения достоверных результатов подсчёт следует вести в трех препаратах в 5 больших (площадь 1/25 мм2) или в 20 малых (площадь 1/400 мм2) квадратах. Затем находят среднее количество дрожжевых клеток в одном квадрате, т.е. фактически в объёме 1/250 мм2 (1/25 мм2X1/10 мм) или 1/4000 мм2 (1/400 мм2 X 1/10 мм ). При умножении найденного среднего числа на знаменатель дроби (250 и 4000) находят количество дрожжевых клеток в 1 мм3, умножая на 1000, - в 1 см3 (мл) взвеси. Далее количество дрожжевых клеток в

1 г прессованных дрожжей можно определить по формуле:

X= ab , [6.2]

в

где a – количество дрожжевых клеток в 1 мл взвеси;

b – объём приготовленной взвеси, мл;

в – навеска прессованных дрожжей, г.

Установлено, что в I г доброкачественных прессованных дрожжей содержится от 8 до 12 млрд. жизнеспособных клеток. Так как прямой подсчет не дает возможность отличить живые клетки от мертвых, то количество последних устанавливается дополнительным ис­следованием.

Для этого каплю взвеси дрожжей помещают на предметное стекло, добав-ляют к ней на кончике спички метиленовой синьки (окраска капли должна быть голубая, а не синяя), накрывают покровный стеклом и через 1-2 минуты микроскопируют при объективе 40х. Подсчи­тывают количество окрашенных и неокрашенных клеток в 10 полях зрения, находят среднеарифметический процент мертвых клеток и уменьшают на это количество сумму дрожжевых клеток в I г.

Определение количества микробных клеток фотометрическим методом

Этот метод широко применяется в микробиологических исследованиях, так как позволяет достаточно точно и сравнительно быстро определить количество клеток в культуральной среде. В основе метода лежит измерение количества света, рассеянного взвесью клеток. Микроорганизмы в большинстве случаев не окрашены и почти прозрачны, поэтому суспензии клеток в видимой области спектра поглощают свет незначительно. Уменьшение интенсивности света после его прохождения через взвесь клеток связано, главным образом, с его рассеиванием. В определенных пределах рассеивание света клетками пропорционально их численности. Следует помнить, что количество рассеянного света пропорционально отношению размера частицы к длине волны падающего света. При постоянной длине волны падающего света, светорассеяние зависит от размеров клетки и будет тем большим, чем крупнее клетки и измерение светорассеяния целесообразно для тех культур микроорганизмов, развитие которых вызывает равномерное помутнение среды и не сопровождается заметным изменением формы и размеров клетки, образованием мицелия, пленок и других скоплений.

Величину светорассеяния измеряют с помощью спектрофотометров или фотоэлектроколориметров. В этих приборах измеряется первичный пучок света, который проходит через пробу и, не отклоняясь, падает на фотоэлемент. Обычно при этом сравнивается интенсивность света, проходящего через суспензию клеток и через среду без клеток. Для измерения светорассеяния выбирают светофильтр, обеспечивающий максимум пропускания света данной взвесью. Питательная среда для культивирования микроорганизмов, в которой предполагается определять количество клеток по рассеиванию, должна быть оптически прозрачной.

Количество клеток определяют по калибровочной кривой, отображающей зависимость между величиной светорассеяния и числом клеток в единице объема исследуемой взвеси. Для построения калибровочной кривой поступают следующим образом. Измеряют величину светорассеяния взвеси с различным содержанием клеток и в каждой из них одним из доступных способов подсчитывают количество клеток в единице объема. Полученную зависимость выражают графически, откладывая на осях: абсцисс – показания спектрофотометра, ординат – количество клеток, содержащихся в 1 мл. Калибровочные кривые индивидуальны для каждой культуры; для определенных условий выращивания культуры (состав среды, температура, аэрация и т. д.).