- •Предисловие
- •Тема № 1. Правила работы и устройство микробиологической лаборатории. Методы микроскопии. Техника приготовления микроскопических препаратов. Простые и сложные методы окраски
- •Организация микробиологической лаборатории
- •Методы микроскопии. Техника приготовления микроскопических препаратов. Простые и сложные методы окраски
- •Исследование микроорганизмов в окрашенном состоянии
- •Окраска по Граму
- •Окраска кислотоустойчивых бактерий
- •Окраска спор
- •Окраска включений волютина
- •Обнаружение капсул у бактерий
- •Окраска по Романовскому – Гимзе
- •Тема № 2. Морфология бактерий. Ультраструктура бактериальной клетки
- •Морфология бактерий
- •Структура бактериальной клетки
- •Тема № 3. Физиология, биохимия бактерий. Питательные среды. Этапы выделения и идентификации чистых культур аэробных и анаэробных бактерий
- •Культивирование микроорганизмов в лабораторных условиях
- •Выделение и идентификация чистых культур аэробных и анаэробных бактерий
- •Особенности культивирования облигатно-анаэробных бактерий
- •Краткая характеристика питательных сред
- •Тема № 4. Асептика, антисептика, стерилизация
- •Стерилизация
- •Соотношение показаний манометра и температуры
- •Дезинфекция
- •Асептика
- •Антисептика
- •Классификация дезинфицирующих и антисептических средств
- •Тема № 5. Влияние факторов внешней среды на микроорганизмы
- •Изучение действия уф-света на микроорганизмы
- •Диско-диффузионный метод
- •Фитонциды
- •Тема № 6. Количественное определение микроорганизмов
- •Количественное определение микроорганизмов методом непосредственного (прямого) подсчёта
- •Определение количества дрожжевых клеток в 1 г прессованных хлебопекарных дрожжей с помощью камеры Горяева
- •Определение количества микробных клеток фотометрическим методом
- •Определение числа клеток высевом на плотные питательные среды (чашечный метод Коха).
- •Определение количества клеток высевом в жидкие среды (метод предельных разведений).
- •Наиболее вероятное количество клеток микроорганизмов в единице объёма исходной суспензии (по Мак-Креди)
- •Тема № 7. Возбудители бактериальных кишечных инфекций
- •Эшерихии
- •Сальмонеллы
- •Тема № 8. Основы санитарной микробиологии
- •Основные понятия и термины санитарной микробиологии
- •Общая характеристика санитарно-показательных микроорганизмов
- •Первая группа санитарно- показательных микроорганизмов
- •Вторая группа санитарно- показательных микроорганизмов
- •Санитарно-микробиологическое исследование почвы
- •Санитарно-микробиологическое исследование воды
- •100 Мл питьевой воды)
- •Санитарно-микробиологическое исследование воздуха
- •Тема № 9. Санитарная микробиология пищевых продуктов. Пищевые токсикоинфекции и интоксикации
- •Санитарная микробиология мясных продуктов
- •Бактериологическое исследование консервов
- •Санитарно-микробиологическое исследование молока и молочных продуктов
- •Санитарно-микробиологическое исследование смывов с объектов внешней среды
- •Пищевые токсикоинфекции и интоксикации
- •Тестовые задания
- •Литература.
- •Оглавление
Диско-диффузионный метод
Метод основан на способности антибиотика диффундировать из пропитан-ных ими бумажных дисков в питательную среду, угнетая рост микроорганиз-мов, посеянных на поверхности агара.
Плотную питательную среду готовят в соответствии с инструкцией изго-товителя. Перед заполнением расплавленной средой чашки Петри устанав-ливают на строго горизонтальную поверхность (выверенную по уровню, без впадин и выпуклостей). Соблюдение указанных предосторожностей необхо-димо в связи с тем, что размер и форма зоны ингибиции роста зависят от глу-бины и равномерности агарового слоя.
При использовании свежеприготовленных чашек или чашек после хранения в холодильнике их необходимо подсушить перед инокуляцией, что достигается инкубацией при 35 0С с приоткрытой крышкой в течение 10-20 мин. Перед инокуляцией необходимо проконтролировать отсутствие конденсата жидкости на внутренней поверхности крышек.
Для определения чувствительности следует использовать только стандарти-зированные качественные диски. При определении чувствительности диско-диффузионным методом используют стандартный инокулюм, соответствующий по плотности 0,5 по стандарту Мак-Фарланда и содержащий примерно 1,5х108 КОЕ/мл. Инокулюм следует использовать в течение 15 мин. после приготовления. Стандартный инокулюм наносят пипеткой на поверхность чашки Петри с питательной средой в объеме 1-2 мл, равномерно распределяют по поверхности покачиванием, после чего удаляют избыток инокулюма пипеткой. Приоткрытые чашки подсушивают при комнатной температуре в течение 10-15 мин.
Не позднее, чем через 15 мин. после инокуляции на поверхность питательной среды наносят диски с антибиотиками. Аппликацию дисков проводят с помощью стерильного пинцета или автоматического диспенсера. Расстояние от диска до края чашки и между дисками должно быть 15-20 мм. Таким образом, на одну чашку диаметром 100 мм следует помещать не более 6 дисков с антиби-отиком. Диски должны равномерно контактировать с поверхностью агара, для чего их следует аккуратно прижать пинцетом.
Непосредственно после аппликации дисков чашки Петри помещают в термостат кверху дном и инкубируют при температуре 35оС в течение 18-24 ч. (в зависимости от вида тестируемого микроорганизма).
После окончания инкубации чашки помещают кверху дном на темную ма-товую поверхность так, чтобы свет падал на них под углом в 450 (учет в отра-женном свете). Диаметр зон задержки роста измеряют с точностью до 1 мм (рис.14).
Рисунок 14. Диско-диффузионный метод
При измерении зон задержки роста следует ориентироваться на зону полного подавления видимого роста. Крупные колонии, выявляемые в пределах четкой зоны подавления роста, свидетельствуют о наличии посторонней микрофлоры.
Фитонциды
Антибиотические вещества вырабатываются не только микроорганизма-ми, но также растениями и животными. Фитонциды – это вещества, выделяемые растениями и обладающие антимикробным действием. Химическая природа фитонцидов разнообразна. Антимикробным действием обладают многие вещества, находящиеся в растениях: эфирные масла, гликозиды, антоцианы, дубильные вещества и многие другие, химическая природа которых еще не раскрыта.
Антимикробными свойствами обладают многие употребляемые в пищу овощи, пряности. Из чеснока и некоторых сортов репчатого лука выделен аллицин, из репы и редьки — рапин, из томатов — томатин. Эти вещества активны в отношении различных бактерий.
Для изучения действия фитонцидов на бактерии можно воспоьзоватося диско-диффузионным методом, помещая на по-верхность питательной среды вместо дисков небольшое количество измельчён-ного растительного материала (натёртый на тёрке чеснок).
После термостатирования при температуре 37 0 С выявляют действие фитон-цидов чеснока на исследуемые бактерии. Устанавливают вокруг кашицы чес-нока наличие «серильной зоны» - зоны отсутствия роста бактерий и зоны угне-тения (несплошной, рассеянный рост колоний).
КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ
Антибиотики. Классификация антибиотиков по химическому составу, по источнику получения, по механизму действия, по спектру действия.
Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ
Поставить опыт по определению чувствительности кишечной палочки и культуры пекарских дрожжей к УФ-излучению.
Поставить опыт по определению чувствительности кишечной палочки к различным антибиотикам методом дисков.