Исследование микроорганизмов в окрашенном состоянии

Окрашенные тела микроорганизмов резко отличаются от общего фона препарата, что позволяет установить: а) ориентировочно состав микробного пейзажа изучаемого объекта; б) степень чистоты выделяемой культуры; в) некоторые морфологические особенности микроорганизмов (форму, размеры, наличие спор, жгутиков, капсул).

Приготовление окрашенного препарата состоит из нескольких последо-вательных операций: подготовки мазка, высушивания, фиксации, окраски. Для этого используют совершенно чистые обезжиренные стекла. Наиболее простой способ обезжиривания состоит в натирании предметного стекла кусочком сухого мыла, а затем протирании чистой марлей. Капля воды, нанесенная на хорошо подготовленную поверхность, легко расплывается.

При взятии бактериальной культуры поступают следующим образом:

1. нагревают до покраснения бактериологическую петлю в пламени; петлю держат в правой руке за петледержатель;

2. берут пробирку с культурой в левую руку так, чтобы видеть поверхность питательной среды; вращательным движением вынимают пробку из пробирки, прижимая ее мизинцем и безымянным пальцем правой руки к ладони;

3. обжигают край пробирки, осторожно вводят петлю и берут материал;

4. вынимают петлю, обжигают край пробирки, закрывают ее пробкой

(рис. 4).

Рисунок 4. Техника приготовления мазка

Если препарат готовят из бактериальной культуры, выращенной на плотной питательной среде, то на предметное стекло предварительно наносят каплю стерильного физиологического раствора или стерильной водопроводной воды.

Взятый материал осторожно круговыми движениями распределяют по стеклу ровным тонким слоем, после чего петлю немедленно стерилизуют в пламени. Следует помнить, что в этот период происходит работа с живыми микроор-ганизмами, поэтому резкие движения могут привести к разбрызгиванию мате-риала и повлечь за собой инфицирование рук и окружающих предметов.

Мазки высушивают на воздухе при комнатной температуре или в токе теп-лого воздуха, держа предметное стекло высоко над пламенем. Нельзя допускать перегрева, так как при этом может нарушиться структура микроорганизмов.

При фиксации мазка микроорганизмы погибают и плотно прикрепляются к поверхности стекла, не смываясь при дальнейшей обработке. Наиболее распространенным способом является фиксация в пламени. Предметное стекло (мазком вверх) троекратно проводят через пламя. При таком способе фиксации сохраняются форма бактерий, споры, зерна волютина, однако способ нельзя применять для мазков крови, мазков-отпечатков из органов, а также при выяв-лении спор и жгутиков. Для этих целей проводят фиксацию в этиловом спирте (20 мин.), в жидкости Никифорова, состоящей из смеси равных объемов эти-лового спирта и эфира (20 мин.), в холодном ацетоне.

Существуют простые и сложные методы окраски. При применении простых методов используется только одна краска – водный фуксин (1-2 мин.) или мети-леновый синий (3-5 мин.). По окончании окрашивания препарат промывают струей воды до тех пор, пока стекающая вода не станет бесцветной, и сушат его на воздухе при комнатной температуре или осторожно промокая фильтро-вальной бумагой.

Сложные методы окраски предусматривают последовательное использование нескольких красителей различного химического состава, что позволяет выявить определенные структуры бактериальной клетки.