РАЗДЕЛ 2. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ВЫСШИХ РАСТЕНИЙ
РАБОТА 2.4. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРИСУТСТВИЯ ГМО В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ МЕТОДОМ ПЦР
|
|
|
Таблица 2.7 |
||
|
|
|
|
|
|
Шаг |
Функция |
Температура, |
Длительность, |
Число |
|
°С |
мин |
циклов |
|||
|
|
||||
Начальная де- |
Денатурация |
94 |
2 |
1 |
|
натурация |
|||||
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
Денатурация |
94 |
1мин |
|
|
|
|
|
|
40 |
|
Амплификация |
Отжиг |
59 |
1мин |
||
Синтез |
72 |
2 мин |
|
||
|
|
||||
Завершающий |
Синтез |
72 |
10 мин |
|
|
синтез |
(элогация це- |
|
|||
пи) |
|
|
|
||
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
Хранение* |
Хранение |
4 |
Неопределенное |
1 |
|
Задание 2.4.2. Анализ продуктов ПЦР спомощью гель- электрофореза
Порядок выполнения работы
1.Приготовить 1 %-й гель агарозы и аппарат для гель-электрофореза согласно протоколу из работы 2.1 Задание 2.1.1. Гель приготовить без бромистого этидия.
2.Пробирки после ПЦР отцентрифугировать (пульс-режим).
3.В каждую пробирку внести по 10 мкл раствора красителя Orange G, тщательно перемешать на вортексе.
4.В лунки геля поместить по 20 мкл образцов в следующем порядке (см. табл. 2.8).
5.Провести электрофорез на агарозном геле в течение 30 мин при напряжении 100 В.
6.Зафиксировать результат на системе видеодокументации и проанализировать полученные результаты. Заполнить табл. 2.9.
|
Современные аппаратура и методы исследования биологических систем. Большой практикум. Учебебное пособие |
106 |
РАЗДЕЛ 2. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ВЫСШИХ РАСТЕНИЙ
РАБОТА 2.4. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРИСУТСТВИЯ ГМО В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ МЕТОДОМ ПЦР
|
|
|
|
|
Таблица 2.8 |
|
|
|
|
|
|
№ лунки |
образец |
|
|||
1 |
|
«non-ГМО» образец, растительный праймер |
|||
|
|
|
|
|
|
2 |
|
«non-ГМО» образец, ГМО-праймер |
|||
|
|
|
|
|
|
3 |
|
«тест» образец, растительный праймер |
|||
4 |
|
«тест» образец, ГМО-праймер |
|
||
5 |
|
«+ГМО» образец, растительной праймер |
|||
|
|
|
|
|
|
6 |
|
«+ГМО» образец ГМО-праймер |
|
||
7 |
|
Набор стандартов мол. массы 100 bp |
|||
|
|
|
|
|
Таблица 2.9 |
|
|
|
|
|
|
№ полосы |
|
Нанесенный образец |
Наличие |
|
Размер |
|
полос |
|
фрагментов |
||
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
1 |
|
«non-ГМО» образец, расти- |
|
|
|
|
тельный праймер |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
2 |
|
«non-ГМО» образец, ГМО- |
|
|
|
|
праймер |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
3 |
|
«тест» образец, раститель- |
|
|
|
|
ный праймер |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
4 |
|
тест» образец, ГМО-праймер |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
5 |
|
«+ГМО» образец, раститель- |
|
|
|
|
ной праймер |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
6 |
|
«+ГМО» образец ГМО- |
|
|
|
|
праймер |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
7 |
|
Стандарты мол. массы |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Контрольные вопросы
1.Какие методы анализируют анонимный полиморфизм ДНК? Какие принципы положены в их основу?
2.Назовите достоинства и недостатки использования RAPD- и ISSRме-
тодов.
3.Какие участки ДНК амплифицируются при проведении RAPD- и ISSRанализов?
|
Современные аппаратура и методы исследования биологических систем. Большой практикум. Учебебное пособие |
107 |
РАЗДЕЛ 2. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ВЫСШИХ РАСТЕНИЙ
РАБОТА 2.4. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРИСУТСТВИЯ ГМО В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ МЕТОДОМ ПЦР
4.Какие требования предъявляются к праймерам, используемым для создания RAPD- и ISSR-маркеров?
5.Назовите последовательность основных этапов работ при проведении RAPD- и ISSR-анализов.
6.Каким образом анализируется матрица фенетических признаков?
7.Что называют ГМО? Как вы относитесь к проблеме их распростране-
ния?
8.Возможно ли создание единой методики ПЦР с одинаковыми праймерами для определения всех видов ГМО?
|
Современные аппаратура и методы исследования биологических систем. Большой практикум. Учебебное пособие |
108 |