Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:

Большой практикум / Белки и ДНК / Нуклеотидные и аминокислотные последовательности

.pdf
Скачиваний:
85
Добавлен:
09.05.2021
Размер:
546.08 Кб
Скачать

РАБОТА С НУКЛЕОТИДНЫМИ И АМИНОКИСЛОТНЫМИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЯМИ

Задача: проанализировать заданную неизвестную нуклеотидную последовательность путем ее сравнения с известными нуклеотидными последовательностями генов фотопротеинов. Сделать выводы о сходствах и различиях данных последовательностей. Получить выведенную аминокислотную последовательность заданного образца и сравнить ее с выведенной аминокислотной последовательностью соответствующего фотопротеина. Сделать выводы о сходствах и различиях в аминокислотном составе.

Ход работы:

1. AV

Выводы: в данной последовательности есть мутация CAC->TTC, в результате которой анализируемая последовательность будет кодировать белок с фенилаланином вместо гистидина.

2. OL

Выводы: референтная последовательность в качестве С-концевой аминокислоты содержит Pro, после кодона которой находится стоп-кодон (TAA), тогда как в анализируемой последовательности вместо кодона ССС, кодирующего пролин, стоит стоп-кодон (TAA). То есть анализируемая последовательность будет кодировать обелин без С-концевого пролина.

3. OL

Выводы: мутация TCT->GCT, что приводит к изменению аминокислот Ser->Ala.

4. OL

Выводы: присутствует не определенный программой цитозин, что смещает последовательность на один аминокислотный остаток; синонимичная мутация ATC- >ATA, которая не приводит к изменению аминокислоты (изолейцин остался изолейцином); удлинение C-концевого фрагмента с добавлением 7 аминокислотных остатков.

Если вручную подставить не определенный программой цитозин, то обнаруживается одна замена гуанина на тимин (TGG→TGT), что приводит к появлению цистеина вместо триптофана. С-концевой остаток удлиняется на один остаток тирозина и 6 остатков гистидина. Полигистидиновый участок добавляют для возможности очистки белка с помощью металл-хелат аффинной хроматографии, поскольку имидазольные группы гистидина специфично взаимодействуют с ионами никеля и кадмия.

5. MC

Выводы: присутствует не определенный программой гуанин, что приводит к смещению последовательности на один аминокислотный остаток; замена GAT->GAG, что заменяет Asp на Glu; замена CGT->GCT и последующая замена Arg на Ala.

6. MC

Выводы: в анализируемой последовательности есть одна мутация (с CGT на GCT, Arg- >Ala); референтная последовательность содержит C-концевой остаток тирозина, а в исследуемой последовательности он убран.

7. BA

Выводы: делеция одного нуклеотида (Т) приводит к полному изменению аминокислотной последовательности после 156 аминокислотного остатка.

8. AV

Выводы: имеет место замена TGG->TTC. В результате чего происходит замена триптофана на фенилаланин.