Лабораторная диагностикакоринебактериозов

В настоящее время род Corynebacterium включает порядка 25 видов бакте­рий. Естественной средой обитания коринебактерий являются слизистые и кишечный тракт, некоторые виды обнаруживаются на коже клинически здоровых животных. В патологии животных наибольшее значение имеют нижеследующие виды коринебактерий. C.pseudotuberculosis — вызывает казеозный лимфаденит у овец, коз, лимфангит у крупного рогатого скота, овец. Естественной средой обитания являются слизистые и кишечный тракт, а также кожа клинически здоровых овец. С. renale вызывает пиелонефриты у крупного рогатого скота, баланопоститы у баранов, поражения лимфа­тических узлов у свиней. C.cystitidis и С. pilosum обусловливают пиелонеф­риты крупного рогатого скота. Оба вида обитают в мочеполовом тракте коров. С. renale, С. pilosum, С. cystitidis относят к так называемой «ренальной» группе коринебактерий. С. equi (синоним Rhodococcus equi) вызывает бронхопневмонию у жеребят 2-4-месячного возраста, цервикальные лим­фадениты у свиней, крупного рогатого скота, обычно этот вид бактерий обнаруживают в фекалиях животных. С. bovis обитает в молочном канале крупного рогатого скота, его роль в патологии неясна. Хорошо известный ранее вид С. pyogenes перенесен в род Actynomyces. Лабораторная диагно­стика коринебактериозов основана на результатах бактериологического исследования.

Бактериологическое исследование

Объектом исследования является гной, экссудат, при пневмониях (С. equi - R.equi) — образцы трахеальной слизи, в случаях циститов, нефритов берут пробы мочи.

Микроскопическое исследование исходного материала

Из исследуемого материала готовят мазки, окрашивают по Граму, в слу­чае подозрения на наличие R.equi так же по модифицированному методу Циля—Нильсена. В препаратах, окрашенных по Граму, коринебактерии имеют форму грамположительных палочек с закругленными концами, раз­личной степенью полиморфизма, нередко располагающихся под углом друг к другу; клетки R.equi чаще кокковидные, легко обесцвечиваются и могут окрашиваться как кислотоустойчивые.

Выделение и идентификация коринебактерии

Культивирование. Коринебактерии — факультативные анаэробы, температурный оптимум 37-38° С, рН питательных сред 7,4-7,6. Для выделения патогенных ко­ринебактерии используют кровяной, сывороточный (5%) МПА, МПБ, бу­льон и агар Хоттингера, кровяную теллуритовую среду, среду Леффлера. Контаминированный материал для подавления роста грамотрицательных бактерий засевают на агар Мак-Конки. Посевы инкубируют в условиях обычной атмосферы 24-48 часов.

Особенности роста коринебактерии на питательных средах. С.pseudotuberculosis на кровяном агаре через сутки инкубирования фор­мирует желто-белые или белые с матовой поверхностью, непрозрачные ко­лонии диаметром около 1 мм. Через 48-72 часа культивирования проявля­ется узкая зона гемолиза (у большинства штаммов). При длительном инку­бировании размер колоний может достигать 3 мм, они приобретают корич­неватый цвет и крошковидный характер.

На среде Леффлера возбудитель растет в виде крошковатого с желтым оттенком налета, без разжижения сыворотки. На кровяной теллуритовой среде колонии мелкие, слабовыпуклые, с матовой поверхностью, черного цвета. В питательном бульоне возбудитель растет без или с равномерным помутнением среды, с появлением небольшой пленки и осадка.

C.renale через 24 часа инкубирования образует мелкие, негемолитичес­кие колонии, с возрастом превращающиеся в непрозрачные, белые. C.pilosum образует колонии, сходные с колониями C.renale, приобретаю­щие с возрастом цвет от желтого до коричневого. C.cystitidis формирует колонии как и C.renale, но обычно белого цвета. C.equi (R.equi) через 24 часа выращивания посевов образует мелкие, гладкие, блестящие колонии, негемолитические. В более старых культурах колонии желтовато-розово­го цвета.

Морфология клеток коринебактерии в культуре. Из подозрительных колоний готовят и микроскопируют мазки, окрашен­ные по Граму. Клетки коринебактерии в мазках из колоний по морфологии и тинкториальным свойствам в основном не отличаются от таковых в пре­паратах из исходного материала.

Идентификация коринебактерии на уровне рода. Культуры бактерий, сходные по морфологическим, тинкториальным, культуральным свойствам с коринебактериями, отвивают на питательные среды и исследуют с целью идентификации. Для идентификации на родо­вом уровне принимают во внимание происхождение материала, тинктори-альные особенности (быстрота обесцвечивания при окраске по Граму), мор­фологию клеток, отношение к кислороду, подвижность, каталазную ак­тивность.

Идентификация коринебактерии на уровне вида. Выделенные культуры на последующем этапе дифференцируют на виды путем изучения гемолитической активности на кровяном агаре, фермента­тивных свойств: гидролиз эскулина, редукция нитратов, разжижение жела­тины, образование уреазы, образование кислоты без газа из глюкозы, маль­тозы, сахарозы (табл. 61).

С целью дифференциации коринебактерии «ренальной» группы допол­нительно изучают скорость формирования колоний, цвет, рост при рН 5,4 (в бульоне), редукцию нитратов, разжижение желатина, гидролиз твина-80, образование кислоты из ксилозы, крахмала (табл. 62).

С целью уточнения видовой принадлежности выделенной культуры ко­ринебактерии число изучаемых признаков может быть в случае необходи­мости расширено (табл. 63).

Биопроба. При заражении мышей культурами С. pseudotuberculosis выявляется вариа­бельность их вирулентности. При внутривенном заражении погибает 90,7% животных, при подкожном — около 21,2%. В результате внутрибрюшинного заражения морских свинок (самцы) можно вызвать орхит.

Питательные среды. Среда Тинсдаля. К 1000 мл расплавленного и охлажденного до 50° С 2%-ного МПА добавляют 120 мл 1%-ного раствора L-цистина на 0,1 N хлористоводородной кислоте, 120 мл 0,1 N раствора гидроокиси на­трия, 18 мл 2%-ного раствора теллурита калия, 18 мл 2,5%-ного ра­створа гипосульфата натрия и 200 мл стерильной сыворотки крови крупного рогатого скота.

Приготовление раствора теллурита калия. В 100 мл дистиллирован­ной воды растворяют 2 г теллурита калия. Раствор стерилизуют в кипя­щей водяной бане 30 минут и хранят при комнатной температуре. В слу­чае выпадения осадка раствор вновь прогревают в водяной бане.

Таблица 61 - Дифференциальные признаки грамположительных, не образующих спор, неправильной формы палочек

Признаки		Corynebас -terium	Agromyces	Cellulomonas	Oerskovia	Rothia	Actinomyces	Arcanobасterium	Propiono-bacterium	Arachnia	Cardnerella
Морфология клетки		Палочки булавовид­ной формы	Ветвящиеся, нитевидные формы	Неправильные палочки, кок­ковые формы	Ветвящиеся гифы, па­лочковид­ной формы	Неправильные палоч­ки, нити, кокковид-ные формы	Палочки, нити, ветвящиеся струк­туры	Короткие непра­вильные палоч­ки, могут доми­нировать кокко-видные формы	Неправильные палочки, вет­вящиеся и кок-ковидные фор­мы	Палочки, нити, вет­вящиеся структуры	Неправильные палочки
Окраска по Граму +			+	+ '	+	+	+	+	+	+	-
Отношение к кислороду:	Строгий аэроб Р		X	-	-	-	-	-	-	-	-
	Факультативный анаэроб или мик-роаэрофил Р		X	+	+	+	+	+	Р	+	+
	Строгий анаэроб	-	-	-	-	-	-	-	Р	-	-
Подвижность		-	_	Р	X	-	-	-	-	-	-
Каталаза		+	-	+	+	+	3	3	+ 4	-	-
Место обитания и па­тогенные свойства		Человек, животные и др. ис­точники. Есть виды, патогенные для живот­ных и че­ловека	Почва	Почва, гнию­щие растения	Почва, гниющие растения, другие ис­точники	Ротовая полость; оппортунистический патоген человека	Млеко питающие; большинство па­тогенны для жи­вотных и человека	Животные, чело­век; патогенны для человека и животных	Продукты, ко­жа человека, клинический материал. Есть патогенные для человека	Ротовая полость и др. мате­риалы от человека. Может быть пато­генней для человека	Генитальный и мочеполовой тракты
1- Возможно быстрое обесцвечивание;2- Возможно появление грамотрицательных клеток, но более типична вариабельность; некоторые штаммы дают положительную реакцию;4которые штаммы дают негативную реакцию; штаммов имеют положительный признак; признак различен в рангах (вида, рода, семейства).

Таблица 62 - Дифференциация коринебактерий и Rhodococcus equi

Признаки	C.bovis	C.kurtscheri	С.pseudo­tuberculosis	C.renaie группа	R.equi
β-гемолиз	-	V	-	-	-
Гидролиз эскулина	-	+	-	-	-
Редукция нит­ратов	-	+	V"	V	+
Уреаза	-	+	+ (>18ч)	+ (<1ч)	+ (>18ч)
Разжижение желатина	-	-	-	V	-
Глюкоза	+	+	+	+	-
Мальтоза	-	+	+	-	-
Сахароза	-	+	-	-	-

+ положительная реакция; - отрицательная реакция; v- варьирующий признак;

v"- штаммы, выделенные от лошадей позитивные, от овец - негативные.

Таблица 63 - Дифференциация С. renale, C. pilosum, C. cystitidis

Признаки	C.renaie	C.pilosum	C.cystitidis
Цвет колоний	Желтый	Желтый	Беловатый
Срок появления макроскопически видимых колоний при 37° С	24	24 ч	48 ч
Образование кислоты из:
ксилозы	-	-	+
крахмала	-	+	+
Редукция нитратов	-	+	-
Разжижение казеина	+	-	-
Гидролиз твина-80	-	-	+
Рост в бульоне с рН 5,4	+	-	-

Таблица 64 - Дифференциальные признаки видов коринебактерий

Признаки			C.diphteriae	C.pseudotuberculosis	C.xerosis	C.pseudodiphteriticum	C.kurtscheri	C.minutissi mum	C.striatum	C.renale	C.cysticus
1			2	3	4	5	6	7	8	9	10
Гидролиз		эскулина	-	-	-	-	-	нд	-	-	-
		гиппурата	-	-	+	+	+	+	+	+	+
		желатина	1	X	-	-	-	-	х2	-	-
Уреаза			1	+	-	+	+	-	-	+	+
Фосфатаза			-	-	-	-	-	+	+	-	-
Расщепление тирозина			-	-	-	-	-	нд	+	-	-
Метилрот			+	+	-	-	-	-	+	-	-
Расщепление казеина			-	-	-	-	-	-	-	+	-
Редукция нитратов			+ 3	X	+	+	+	-	-	-	-
Образование кислоты из:	глюкозы		+	+	+	-	-	+	+	+	+
	арабинозы		+	X	-	-	-	нд	-	-	-
	ксилозы		-	-	-	-	-	-	-	-	+
	рамнозы		+	-	-	-	-	НД	-	-	-
	фруктозы		+	+	+	-	+	+	+	+	+
	галактозы		+	+	+	-	-	нд	4 X	-	-
	маннозы		+	+	4 X	-	+	X	+	+	-
	лактозы		-	-	-	-	-	-	X	-	-
	мальтозы		+	+	5	-	+	+	+	X	+
	сахарозы		5	X	+	-	+	+4	5	-	-
	трегалозы		1	5	5	-	X	-	X	X	+
	раффинозы		X	-	-	-	-	-	-	-	-
	салицина		+	-	+	-	+	нд	-	-	-
	декстрина		+	X	-	-	+	нд	+	+	+
	крахмала		X	-	-	-	+	-	+	-	+

Признаки			C.pulosum	C.mucetoides	C.matruchotii	C.flavescens	C.vitarumen	C.glucamicum	C.callunac	C.bovis	C.paurometobolum
1			11	12	13	14	15	16	17	18	19
Гидролиз		эскулина	-	-	+	нд	+	-	-	-	+
		гиппурата	+	нд	+	-	-	+	+	+	-
		желатина	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Уреаза			+	-	х2	-	+	+	+	-	-
Фосфатаза			-	+	-	-	-	нд	нд	+	+
Расщепление тирозина			-	нд	нд	нд	нд	нд	нд	-	-
Метилрот			-	-	-	+	+	+	+	-	-
Расщепление казеина			-	нд	НД	нд	нд	-	-	-	-
Редукция нитратов			+	-	+	-	+	+	-	-	-
Образование кислоты из:	глюкозы		+	+	+	+	+	+	+	+	-
	арабинозы		-	-	-	-	нд	-	-	X	-
	ксилозы		-	-	-	-	нд	-	-	-	-
	рамнозы		-	нд	-	-	нд	-	-	-	-
	фруктозы		+	нд	+	+	+	+	+	+	-
	галактозы		-	-	-	+	+	-	-	+	-
	маннозы		+	-	+	+	+	+	+	-	-
	лактозы		-	-	-	-	-	-	-	X	-
	мальтозы +			-	+	-	+	+	+	+	-
	сахарозы -			нд	+	-	+	+	+	-	-
	трегалозы		+	X	-	-	+	+	+	X	-
	раффинозы -			-	5 X	-	нд	-	-	-	-
	салицина -			нд	+	-	+	-	+	-	-
	декстрина		+	-	+	-	нд	-	-	X	-
	крахмала		+	нд	5	-	-	-	-	-	-

' Исключение — типulcerans;²около 50% штаммов положительны;³типulceransможет быть отрицательным;⁴некоторые штаммы отрицательные;⁵некоторые штаммы положительные; нд — нет данных; х — 11-89% штам­мов положительные.

Приготовление раствора гипосульфита натрия. Раствор готовят на стерильной дистиллированной воде. После добавления каждого ком­понента среду тщательно перемешивают и, не стерилизуя, разливают по чашкам Петри. До использования среду можно хранить при 10° С не более 3-4 суток.

Среда предназначена для дифференциации возбудителя дифтерии и дифтероидов. Коринебактерии дифтерии образуют колонии черного цвета, т.к. способны продуцировать сероводород из цистина, взаимодействующий с солью теллурита. С. diphtheriae var. gravis на этой среде образует мелкие, выпуклые, блестящие, черные колонии. Среда обладает селективными свой­ствами, посторонняя микрофлора растет слабо.

Теллуровая среда Клауберга II. К 1000 мл рас­плавленного 3%-ного питательного агара прибавляют 3 мл 2%-ного ра­створа теллурита калия, 10 мл глицериновой смеси и 50 мл «лаковой кро­ви». Среду разливают в чашки Петри (используют не более 3-4 суток) и хранят при 4-10° С. Коринебактерии дифтерии типа «gravis» образуют серовато-черные колонии с несколько изрезанными краями, типа «mitis» — мелкие, с ровными краями серовато-черные блестящие колонии.

Приготовление «лаковой крови». К 3 мл стерильной дистиллированной воды добавляют 16 мл дефибринированной крови крупного рогатого ско­та, добавляют 20 мл химически чистого стерильного глицерина. Смесь вы­держивают в холодильнике 3-6 недель.

Кровяной теллуровый агар. К 100 мл рас­плавленного и охлажденного до 45-50° С питательного агара (рН 7,6-7,8) добавляют 10 мл дефибринированной крови лошади или крупного ро­гатого скота, 2 мл 2%-ного раствора теллурита калия (К,ТеО₃). Получен­ную среду перемешивают и разливают в чашки Петри. Колонии дифтерийных бактерий на этой среде имеют черный цвет или черный центр колонии, дифтероидов — более выпуклые, влажные, серого цвета, с коричневым центром, ложнодифтерийных бактерий — мелкие се­рые, с коричневым центром, непрозрачные.

Среда Пергола. Используют как среду обогащения для выделения коринебактерии дифтерии. Из куриного яйца стерильно извлекают желток, переносят его в колбу с бусами и добавляют 100 мл стерильной сыворотки крови лошади или круп­ного рогатого скота, 1 мл 2%-ного раствора теллурита калия; тщательно перемешивают. Полученую смесь разливают по 2-3 мл в стерильные про­бирки и прогревают 1 ч в водяной бане при 56° С. Затем для контроля сте­рильности выдерживают 48 ч в термостате при 37° С. На этой среде дифте­рийные бактерии формируют через 12- 15 ч инкубирования светло- или темно-серые влажные колонии.

Жидкая среда для дифтерийных микробов. К 400 мл сте­рильного бульона (рН 7,6), содержащего 10% сыворотки лошади или крупного рогатого скота, добавляют 75 мл «лаковой крови», 20 мл 1%-ного раствора теллурита калия, 12,5 мл глицериновой смеси и 12,5 мл 1%-ного цистина.

Ацетатно-теллуритовый бульон для дифтерийных микробов. В колбе смешивают 200 мл МПБ (рН 7,4), 2 мл глицерина, 18 мл 50%-ного раствора пептона Витте и 0,63 мл 50%-ного раствора ацетата натрия. Среду стерилизуют текучим паром в течение 1 ч, охлаждают до 48° С и добавляют 10 мл 1%-ного раствора теллурита калия и 21 мл дефибриниро­ванной крови барана.

Желточно-молочно-агаровая среда. К 1000 мл 4%-ного агара на мартеновском бульоне или МПБ (рН 7,6-7,8) добавляют 10 куриных желтков, эмульгируют и вносят 800 мл обезжирен­ного, стерильного молока. Компоненты перемешивают, готовую среду раз­ливают по стерильным пробиркам, скашивают и дважды по 1 ч прогревают в аппарате Коха при 80° С.

Среда Пай. В колбе смешивают 1000 мл содержимого куриных яиц и 500 мл дистиллированной воды, взбивают, фильтруют через двойной слой марли, добавляют 120 мл глицерина, 5 г декстрозы, перемешивают, разли­вают по стерильным пробиркам, скашивают и стерилизуют как свернутую сыворотку (см. среда Леффлера).

Индикаторная среда III для дифтерийных бактерий. К 420 мл 3%-ного питательного агара добавляют 12,5 мл 1%-ного ра­створа цистина, 1,5 мл 50%-ного раствора ацетата натрия, 880 мл 1%-ного раствора теллурита калия. Устанавливают рН 8,0 и вносят 60 мл 2%-ного раствора индикатора водного голубого. В нагретую до 50-55° С среду добавляют смесь следующего состава: 280 мл дистиллиро­ванной воды, 21 мл глицериновой смеси (см.среда Клауберга II), 15 г глюкозы, 140 мл дефибринированной крови (рН смеси 7,0). После пере­мешивания среду разливают в чашки Петри.

Сывороточная среда Леффлера. Рекомендуется для выращивания пато­генных нейссерий, коринебактерии. Смешивают 750 мл сыворотки крови овцы, 250 мл МПБ (рН 7,0), 2,5 г декстрозы, 1,25 г натрия хлорида. Среду разливают в пробирки и свертывают в скошенном положении при 80° С 3 дня по 2ч в аппарате Коха или в сушильном шкафу при 70° С 3 дня по 1 ч.

Лабораторная диагностика актиномикоза

Большинство видов бактерий рода Actinomyces патогенны для животных и человека. Основные патогенные виды следующие: A.bovis — возбуди­тель актиномикоза крупного рогатого скота, естественной средой обита ния предположительно являются слизистые ротовой полости или кишеч­ник; A.suis вызывает у свиней актиномикоз молочной железы; A.israelii — основной возбудитель актиномикоза человека, может быть причиной эн­дометритов, цервицитов и конъюнктивитов, ассоциируется с актиномикозом крупного рогатого скота и свиней, естественное место обитания — ротовая полость, слизистые кишечника людей; A.pyogenes — вызывает гнойные процессы у животных, в том числе маститы коров, перитониты у свиней, естественной средой обитания являются слизистые оболочки; A.viscosus — возбудитель актиномикоза собак; A.hordeovulneris — вызы­вает у собак абсцессы, плевриты, перитониты, артриты. Лабораторная диагностика болезней, вызываемых перечисленными видами бактерий, основана на результатах бактериологического исследования.

Бактериологическое исследование

Объектом исследования является гной, экссудат, содержимое абсцессов, пораженные лимфатические узлы. Тканевый материал в случае необхо­димости консервируют в 30%-ном водном растворе глицерина.

Микроскопическое исследование исходного материала

При диагностике болезней, вызываемых A.bovis и A.viscosus, существен­ное диагностическое значение имеет микроскопия зернистых гранул «друз», обнаруживаемых в гное или экссудате. С указанной целью гной (экссудат) помещают в чашку Петри, разводят небольшим количеством дистиллированной воды, находят зеленовато-желтые (A.bovis) или серо-белые (A.viscosus) зернышки, т.н. «друзы». Зернышки промывают в дис­тиллированной воде, помещают на предметное стекло в каплю 10-20%-ного раствора NaOH или КОН и выдерживают 15 минут или не­много подогревают над пламенем горелки. Далее на препарат наносят водный раствор глицерина (50%-ный), накрывают его покровным стек­лом и изучают под малым и большим увеличением микроскопа. Скопле­ния клеток возбудителя имеют гомогенный центр из переплетенных па­лочковидных клеток, к периферии булавовидно утолщающихся. При ок­раске по Граму центр «друзы» окрашивается грамположительно, пери­ферия — грамотрицателыю.

В препаратах, содержащих в материале A.pyogenes, находят малень­кие, очень полиморфные грамположительные палочковидные бактерии раз­мером 0,5-2,0 х 0,2-0,3 мкм, располагающиеся беспорядочно. Клетки A.hordieovulneris имеют морфологию, типичную для рода, — нитевидные ветвящиеся, реже короткие дифтероидные формы.

Выделение и идентификация патогенных видов рода Actinomyces

Культивирование. Посев исследуемого материала производят на кровяной агар (кровь овец, крупного рогатого скота). Посевы материала, предположительно со­держащего A.bovis, культивируют в аэробных условиях в атмосфере 10%) СО₂; A.hordeovulneris растет в аэробных и анаэробных условиях с содержа­нием в атмосфере 10%> CO₂ A.pyogenes и A. Viscosus растут в аэробных усло­виях с 10%) СО₂. Контаминированный материал высевают на селективные среды (см. «Питательные среды»). Для выделе­ния A.israelii из контаминированного материала на неселективных средах следующую его предварительную обработку. Материал суспендируют в транспортной среде Syed: раствор 1-0,6% раствор К₂НР0₄, раствор 2-1,2% раствор NaCl, 1,2% раствор (NH₄) ₂S0₄, 0,6% раствор КН₂Р0₄, 0,25% раствор MgS0₄. Готовая среда содержит 75 мл раствора №1, 75 мл раствора № 2,10 мл 1М раствора этилендиаминотетраацетата, 20 мл свежего 1%-ного раство­ра дитиотреитола, 5 мл 8%-ного раствора Na₂C0₃, 1 мл 1%>-ного раствора резазурина, 814 мл дистиллированной воды, рН 8,0. Среду стерилизуют фильтрацией. Исследуемый материал суспендируют в транспортной сре­де. 1 мл суспензии смешивают с 1 мл толуола и встряхивают 20 минут. Водную фазу отсасывают пипеткой, добавляют к ней 10 мл транспортной среды, центрифугируют и осадок высевают на неселективные питатель­ные среды.

Эффект обработки основан на ингибирующем действии толуола на грамотрицательные бактерии. Посевы культивируют при 36-37° С от 2-4 до 14 дней.

Особенности роста актииомицетов на питательных средах. A.bovis на плотных питательных средах образует нитевидные микроко­лонии через 24 часа; позднее — макроколонии диаметром около 2 мм, не­прозрачные, белые, серо-белые, кремово-белые, шероховатые или гладкие, без зоны гемолиза, мягкой консистенции. Рост медленный, типичные коло­нии формируются к 14-15 дню культивирования. Возбудитель хорошо растет (диффузно) в тиогликолатном бульоне к 7-10 дню инкубирования.

A.pyogenes. Нитевидных микроколоний не образует, через 48 часов ин­кубирования формирует колонии размером около 1 мм с узкой зоной β-гемолиза, выпуклые, с ровными краями, непрозрачные, белые или серо-белые, гладкие, мягкой консистенции.

A. viscosus формирует колонии двух типов: 1-й тип — крупные, гладкие, бле­стящие, выпуклые; 2-й тип — маленькие, шероховатые, неправильной формы.

A.hordeovulneris. Первоначально образует нитевидные микроколонии, позднее (14 дней культивирования) формируются колонии размером около 2 мм, приподнятые, с волнистым краем, с нитевидными отростками, непрозрачные, белые, серо-белые, кремово-белые, шероховатые, сухие или мяг­кой консистенции, обычно без зоны гемолиза.

A.suis. Образует колонии размером до 2 мм, гладкие, непрозрачные, вы­пуклые, центр может иметь углубление, края волнистые с отростками, бе­лого или серо-белого цвета. Колонии могут быть шероховатыми или глад­кими, сухими или мягкими.

A.israelii. Образует нитевидные микроколонии на плотных средах, к 14 дню - макроколонии R- формы, диаметром около 2 мм, выпуклые, центр может иметь углубление, края волнообразные и нитевидные, непрозрач­ные, белого, серо-белого, кремово-белого цвета, по консистенции сухие, крошкообразные или мягкие.

Морфология клеток актиномицетов в культуре. Морфология клеток в культуре у ряда актиномицетов отличается от таковой в исследуемом материале.

A bovis. В препаратах, окрашенных по Граму, клетки имеют фор­му грамположительных палочек, коккобактерий, палочек с утолщен­ными или разветвляющимися концами, могут присутствовать нити раз­личной длины.

A.pyogenes. В препаратах находят типичные для рода полиморфные грамположительные палочки.

A. viscosus. В мазках из крупных колоний обнаруживают грамположи-тельные дифтероидные палочковидные клетки, в мелких колониях — ко­роткие ветвящиеся нити.

A hordeovulneris. Морфология клеток в препаратах типична для рода. A.suis. В препаратах находят типичные грамположительные палочки дифтероидной формы, иногда кокковидной, а также V, Y или Т-формы, ко­роткие или длинные нити, ветвящиеся формы.

Идентификация представителей рода Actinomyces на уровне рода. Начальные этапы идентификации предполагают в первую очередь диф­ференциацию видов рода Actinomyces от родов Nocardia, Streptomyces, Dermatophilus. При этом у выделенных культур определяют: потребность в О каталазную активность, подвижность, кислотоустойчивость клеток, рост на грибных средах, наличие воздушных гиф, образование спор, фрагмен­тацию гиф наличие запаха у колоний, тип утилизации углеводов (оксида­ция, ферментация в тесте Хью - Ляйфсона).

На основании перечисленных признаков для дальнейшего изучения от­бирают культуры бактерий, типичные по морфологическим, тинкториаль-ным и культуральным свойствам для Actinomyces, растущие в анаэробных или капнофильных (СО₂) условиях атмосферы, не имеющие запаха, дающие отрицательную (чаще) или положительную (реже) реакцию на каталазу, не проявляющие при окраске по модифицированному методу Циля — Нильсе­на кислотоустойчивое™, не растущие на средах для культивирования гри бов, не образующие воздушных гиф, спор, не проявляющие склонности к фрагментации нитей (гиф), расщепляющие углеводы (глюкоза) в тесте Хью — Ляйфсона путем ферментации.

Таблица 65 - Родовые признаки Actinomyces

Признаки	Actinomyces	Nocardia	Streptomyces	Dermatophilus
Отношение к кислороду	Анаэробы или капнофилы	Строгие аэробы	Аэробы	Аэробы/ капнофилы
Каталаза	-(+)	+	+	+
Частичная кислотоустойчивость при окраске по модифицированному ме­тоду Циль-Нильсена	-	+	-	-
Подвижность	-	-	-	+ (зооспоры)
Рост на декстрозном ага­ре Сабуро	-	+	+	-
Воздушные гифы	-	+	+	-
Споры	-	+ (конидии)	+ (конидии)	+ (зооспоры)
Фрагментация гиф (нитей)	-	+	+	+
Запах культуры	-	-	Острый, почвенный	-
Метаболизм	Ферментация	Оксидация	Оксидация	Слабая ферментация
Резервуар	Слизистые рта и носоглотки	Почва	Почва	Больные и живот­ные-носители
Ветеринарное значение	Локальные и системные болезни, характеризую­щиеся образованием гра­нулой на коже, подкожей и в органах		Не патогенны	Вызывают поражение кожи

+ положительная реакция; - отрицательная реакция; - (+) преимущественно негативные реакции.

Идентификация представителей рода Actinomyces на видовом уровне. У выделенных культур, отвечающих родовым признакам Actinomyces, изучают с целью определения их видовой принадлежности более широкий круг ферментативных свойств.

Таблица 66 - Свойства основных патогенных для животных видов

рода Actinomyces

Признаки	Вид
	A.bovis	A.viscosus	A.pyogenes	A.hordeovulneris
Наличие гранул в гное	Зелено-желтые гранулы (друзы)	Серо-белые гранулы (друзы)	-	-(+)
Обнаружение при микроскопии мазков из исходного материала	Нити, ветвящиеся формы, реже диф­теройдные формы	Аналогично A.bovis	Короткие дифтеройдные формы	Аналогично A.bovis
Отношение к кислоро­ду	Анаэроб-капнофил	Аэроб-капнофил	Аэроб-капнофил	Аэроб-капнофил или анаэроб-капнофил
Образование каталазы	-	+ (слабая реакция)	-	+ (слабая реакция)
CAMP- тест сS.aureus	-	-	+	-
Разжижение сыворот­ки в среде Леффлера	-	-	+ (Через 24-48 ч)	-

Биопроба. Заражение лабораторных животных в диагностике болезней этой группы обычно не применяют. A.pyogenes, например, проявляет слабую и вариа­бельную патогенность. При подкожном заражении A.pyogenes у животных развиваются подкожные абсцессы, внутрибрюшинном или внутривенном — возможен летальный исход.