Лабораторная диагностика Ку-лихорадки

Ку-лихорадка (Q-febris) — природно-очаговая риккетсиозная болезнь мно­гих видов животных и человека. У сельскохозяйственных животных забо­левание протекает относительно доброкачественно, но они могут служить источником возбудителя для человека, у которого Ку-лихорадка проявля­ется как острая системная инфекция, обычно сочетающаяся с интерстициальной пневмонией. У животных (крупный и мелкий рогатый скот, мулы, лошади, свиньи, собаки, куры) болезнь характеризуется кратковременной лихорадкой, может сопровождаться конъюнктивитом, ринитом, бронхоп­невмонией, артритами, маститами, абортами, орхитами.

Передача возбудителя от животного к животному может осуществлять­ся инфицированными клещами (свыше 50 видов) или алиментарно.

Возбудителем болезни является Coxiella burneti, род Coxiella, триба Rickettsiae. Лабораторная диагностика основана на результатах бактерио­логического и серологического исследований.

Бактериологическое исследование

Прижизненно берут кровь. Для заражения куриных эмбрионов готовят про­бы гепаринизированной крови, выделения из матки и влагалища, плаценту в случае аборта, пробы молока, клещей с животного; посмертно — изме­ненные участки легких, фрагменты селезенки, паренхимы вымени, голов­ного мозга, регионарные пораженным органам лимфатические узлы.

Микроскопическое исследование исходного материала,экспресс-методы диагностики. Из исследуемого материала готовят мазки, окрашивают по Романовско­му, Гименечу и др. (см. «Хламидиозы»). В положительных случаях внутри клеток при окраске по Романовскому находят пурпурно-красные кокковидные клетки размером 0,2-0,4 мкм или короткие палочки, похожие на C.psittaci.

Используют сэндвич — вариант твердофазного ИФА для обнаружения антигена возбудителя в исследуемом материале. Данные ИФА в 100% слу­чаев совпадают с результатами биопробы на белых мышах. Близкой чувствительностью при обнаружении возбудителя облада­ет метод флуоресцирующих антител (прямой вариант). Детекцию ДНК воз­будителя в материале эффективно проводят при помощи ПЦР.

Выделение и идентификация С.burneti

Культивирование в куриных эмбрионах. Для заражения куриных эмбрионов подходит нитрированная кровь. В случае возможной контаминации материала посторонней микрофлорой тка­невый гомогенат на физиологическом растворе (1:10) обрабатывают пени­циллином (1000 ЕД/мл) и стрептомицином (500ЕД/мл) в течение 60 минут, делают контрольные высевы на МПА, МПБ. Суспензию в объеме 0,2-0,25 мл или нитрированную кровь вводят в желточный мешок (см. «Хлами­диозы»). Используют 5-7-дневные куриные эмбрионы, начиная с 4-5 су­ток яйца ежедневно овоскопируют. Павшие эмбрионы вскрывают по мере гибели, после 8 суток допускается вскрытие живых эмбрионов. При отри­цательных результатах проводят до 4-6 «слепых» пассажей. Риккетсии обнаруживают в оболочках желточного мешка в окрашенных препаратах или при помощи метода люминесцирующих антител. После адаптации штам­ма к куриным эмбрионам из ткани эмбриона можно экстрагировать антиген и идентифицировать его в серологических реакциях с иммунными сыворот­ками против фаз I и II C.burneti.

Выращивание в культуре клеток. Культивирование C. burneti может быть проведено в культуре фибробла-стов куриного эмбриона, эпителия желточного мешка, почечного эпителия и т.д. Риккетсии хорошо размножаются в клет­ках ФСЦ, Нер-2, КП, ПК, ТК, СК, трипсинизированных клетках куриных эмбрионов. С пятого дня зараженные культуры клеток исследуют путем микроскопии окрашенных мазков, в РИФ и ПЦР.

Заражение лабораторных животных. Суспензию из исходного материала (1:5) обрабатывают антибиотиками и вводят интраперитонеально морским свинкам массой 250-300 г в дозе 3-5 мл или молодым кроликам. Морских свинок ежедневно термометрируют, проводят до 3-5 «слепых» пассажей. У погибших или убитых в пе­риод лихорадки животных берут соскобы с брюшины, готовят мазки, микроскопируют, исследуют в РИФ. О результатах заражения судят по нали­чию риккетсией в препаратах. Длительное наблюдение за животными (35-40 дней) позволяет поставить диагноз на основании исследования сыворо­ток крови в РСК.