Бактериологическое исследование

При подозрении на инфекцию Е. phagocytophila для исследования берут кровь через 3-4 дня после начала лихорадки, делают мазки или цитрированную кровь хранят при 4°С, в этом случае возбудитель остается жизнеспособным до семи суток, при -70° С — несколько месяцев. Для исследования на эрлихиоз лошадей берут пробы крови на 3-5-е сутки после лихорадочного со­стояния. С целью диагностики эрлихиоза собак берут кровь на 2-3-й сутки после повышения температуры или биоптаты из легких, печени, селезенки.

Микроскопическое исследование материала

Мазки из крови, биоптатов фиксируют метанолом, окрашивают по Романовскому-Гимза, при наличии антисывороток используют метод флуорес­цирующих антител.

E.phagocytophila обнаруживают в гранулоцитах, реже — в моноцитах. В период риккетсемии поражены до 6-50% гранулоцитов. Для отрицательного ответа необходимо исследовать не менее 100 клеток. Морфогенез возбудителя складывается из превращения элементарного тельца овальной или кокковидной формы красного цвета диаметром около 0,4-0,5 мкм в тельце размером 1-2 мкм, с последующей трансформацией в морулу (образование похоже на тутовую ягоду) диаметром 2-4 мкм. Цикл развития завершается распадом морулы на элементарные тельца.

Есть данные о применении флуоресцирующих антител для обнаружения возбудителей в головном мозге.

При исследовании на инфекцию Е. canis возбудитель можно обнаружить в окрашенных мазках крови на 2-3-й сутки после появления температуры, лучше в мазках из лейкоцитарного слоя. Возможно обнаружение возбуди­теля в биоптатном материале из печени, селезенки, легких. Морфология возбудителя такая же, как и у E.phagocytophila, локализуется в моноцитах или лимфоцитах.

E.equi наиболее успешно удается обнаружить в мазках из свежей крови, поражено бывает от 0,5 до 73% гранулоцитов (в среднем 35%). Элементар­ные тельца имеют диаметр около 0,2 мкм, цвет от голубого до серо-голубо­го, морула достигает диаметр 5 мкм. С успехом апробирована для выявления эрлихий полимеразная цепная реакция.

Выделение и идентификация культуры возбудителя

Для изоляции возбудителей используют перевиваемые или первичные куль­туры клеток костного мозга и нейтрофилов крови. Идентификацию возбу­дителя проводят микроскопически, в РИФ, ПЦР.

Биопроба. Инфекция, вызываемая E.phagocytophila воспроизводится введением дефибринированной крови, взятой в период лихорадки, крупному рогатому скоту, овцам. Инкубационный период составляет 4-8 дней. Эрлихиоз собак воспроизводится заражением животных кровью, возможно культи­вирование возбудителя в культуре моноцитов собак. При заражении кро­вью молодых лошадей клинические признаки инфекции E.equi воспроизво­дятся не всегда.

Серологическая диагностика

Испытаны непрямой метод флуоресцирующих антител, ЭЛИЗА-тест для обнаружения антител в крови при инфекциях, вызываемых Е.canis, E.equi и другими эрлихиями. Выпускается диагностический набор для ЭЛИЗА (фир­ма Helica Biosystems).

Лабораторная диагностика неориккетсиоза собак

Возбудитель относится к трибе Rickettsiae, роду Neorickettsia, представ­ленному одним видом Nihelminthoeca. В настоящее время род Neorickettsia дополнен видами N. risticii и N. sennetsu. В природе этот вид риккетсий обитает в организме трематоды Nanophyetus salmonicida, а он, в свою очередь, в организме лососевых рыб. Все стадии развития трематоды (яйца, редии, церкарии, метацеркарии) инфекционны для со­бак. Возбудитель в искусственных питательных средах, куриных эмбри­онах не культивируется. Паразитирует в ретикулоэндотелиальных клет­ках лимфоидной системы, включая макрофаги. Собаки, лисы заражаются при поедании рыбы, развивается лихорадка. Болезнь регистрируется в северных районах США. Лабораторная диагностика основывается на результатах микро­скопического исследования материала, выявлении антител методом не­прямой иммуннофлуоресценции.

Бактериологическое исследование

Объектом исследования являются прижизненно взятые биоптаты из лим­фатических узлов на стадии лихорадки. Кровь содержит возбудитель, но методом микроскопии его обнаружить трудно. Риккетсий лабильны, но при -70° С выживают до 6 месяцев.