Лабораторная диагностика контагиозной плевропневмонии крупного рогатого скота

Контагиозная плевропневмония крупного рогатого скота — высококонта­гиозная болезнь, протекающая в виде крупозной пневмонии и плеврита с последующим развитием анемических некрозов (секвестров) в легких. Возбудитель — Mycoplasma mycoides subsp. mycoides, род Mycoplasma, семейство Mycoplasraataceae. Лабораторная диагности­ка основана на результатах бактериологического и серологического ис­следований.

Бактериологическое исследование

Прижизненно берут носовую слизь тампонами, носовые истечения, жид­кость путем пункции грудной полости, кровь. Посмертно отбирают кусоч­ки пораженных легких, плевральную жидкость, регионарные лимфатичес­кие узлы. Материал транспортируют в термосе со льдом в нативном виде или в питательных средах, в последнем случае в среду не включают инги­биторы. Материал должен быть подвергнут бактериологическому исследованиюв течение нескольких часов, это время может быть увеличено, если материал транспортируют и хранят при -70° С.

Выделение и идентификация культуры возбудителя

Культивирование. Для посева используют среду Хейфлик, Эдварда, ВИЭВ, УНИИЭВ, мартеновский бульон с 10-15% сыворотки крови крупного рогатого ско­та и 10% дрожжевого экстракта.

Жидкий исследуемый материал, а также гомогенат легочной ткани вы­севают на агаровые и бульонные среды. Можно делать посев на поверх­ность агаровой среды кусочками легочной ткани и лимфатических узлов. Целесообразно из жидкого материала (легочная лимфа, плевральная жид­кость), тканевого гомогената (10%-ная взвесь в сердечно-мозговом бульо­не) готовить последовательные десятикратные разведения и по 0,1 мл раз­ведений 10^-1-10⁵ высевать на агаровую среду. Нередко из-за присутствия тканевых ингибиторов рост микоплазм получается в более высоких разве­дениях при отсутствии в малых. Посев материала в полужидкую среду Хей­флик с 0,15% агара увеличивает частоту выделения возбудителя. Посевы инкубируют при 37° С во влажной камере в аэробных условиях.

Рост возбудителя в жидких питательных средах обычно наблюдается через 3-7 суток в виде легкого помутнения, опалесценции, изменения цве­та. С целью выявления колоний микоплазм из пробирок с признаками роста производят высев на агаровые среды. Посевы на агаровых средах начина­ют ежедневно просматривать через 48 часов инкубирования в течение 5-7 суток, используя стереоскопический микроскоп с увеличением х25-40. Ко­лонии возбудителя имеют типичную для микоплазм форму «яичници-глазуньи» и диаметр 0,1-0,6 мм. На следующем этапе проводят идентификацию колоний микоплазм (или ахолеплазм), дифференцируя их от колоний классических бактерий или L-форм, используя методы, описанные выше, а также посев на среды без се­лективных факторов. Чистые культуры микоплазм отвивают на жидкую питательную среду и поддерживают путем субкультивирования с интерва­лом 7 суток.

Идентификация культуры возбудителя. Идентификацию обычно осуществляют серологическими методами: ок­раска колоний на агаре при помощи референтных флуоресцирующих ан­тисывороток, в тестах ингибиции роста и метаболизма — с диагностичес­кими сыворотками, а также исследуют ферментативную активность вы­деленных культур. Для М. туcoides subsp. mycoides характерна чувстви­тельность к дигитонину, способность к ферментации глюкозы, редукции тетразолия натрия в аэробных и анаэробных условиях, разжижению сы воротки в аэробных условиях при слабой про геолитической активности в анаэробных условиях, инертность по отношению к аргинину и отсутствие фосфатазы (табл. 94).

Таблица 94 - Биохимические свойства видов и серогрупп микоплазм, выделяемых от крупного рогатого скота

Вид или серогруппа	Аргинин	Глюкоза	Фосфатаза	Разжижение сыворотки	Редукция тетразолия натрия	Образование пленки и пятен	Гидролиз желатина	Гидролиз казеина	Гемадсорбирующие свойства ко­лоний
М. alcalescens	+	_	+	-	-/-	-	-	н.д."	+
М. arginini	+	-	-	-	-/+	-	+	-	-
М. bovigenitalium	-	-	+	-	-/+	+	-	-	d
М. bovirhinis	-	+	-	d	+ /+	-	-	+	d
М. bovis	_	-	+	-	+ /+	d	н. д.	-	+
М. bovoculi	-	+	-	-	+ /+	+	-	н.д.	-
М. canadense	+	-	Слабая реакция	-	-/+	-	н. д.	н.д.	-
М. dispar	-	+	-	-	+ /+	-	н.д.	н.д.	-
М. mycoides subsp. mycoides	-	+	-	+ /или слабая реакция	+ /+		+ /или слабая реакция	+
Группа 7 Leach	-	+	-	+	+ /+

н. д. — нет данных, d— 11—89% штаммов положительные.

Биопроба

Проводят при возникновении болезни в благополучной зоне на телятах 6-8-месячного возраста путем введения экссудата от больных животных под­кожно в область шеи или подгрудка, интратрахеально, интраплеврально или аналогичными способами бульонной культурой. Инкубационный пе­риод составляет 6-27 дней. В положительных случаях при подкожной ино­куляции материала на месте инъекций развивается воспалительный отек, подъем температуры до 40-42°С. Летальный исход (не всегда) наступает через 12-15 суток.