Биопроба. Проводят с целью обнаружения возбудителя в исследуемом материале и подтверждения патогенных свойств выделенной культуры на золотистых хомячках, морских свинках.

Суспензию исследуемого материала на физиологическом растворе вво­дят кошкам под кожу затылка. В положительных случаях развивается ге­нерализованный процесс с гибелью животного уже через семь суток. При менее вирулентных штаммах процесс идет медленнее — появляются кож­ные язвы, главным образом на конечностях, на лицевой части головы, жи­вотное чихает, наблюдается гнойное истечение из носовой полости. Леталь­ный исход наступает через 3 недели и позднее.

Морским свинкам (самцам) чистую культуру или неконтаминирован-ный материал вводят внутрибрюшинно, загрязненный материал или сме­шанную культуру — подкожно в область шеи. На месте инъекции при под­кожном заражении образуется узелок, вскрывающийся на 4-5-е сутки с формированием язвы. После внутрибрюшинпого заражения в положи­тельных случаях развивается отечность мошонки, орхит, периорхит (фе­номен Штрауса, скротальный феномен). Через 8-15 дней часть животных

Таблица 82 - Дифференциация В. mallei и В. pseudomallei

Признаки	Вид бактерий
	В.mallei% положительных реакций	B.pseudomallei% положи­тельных реакций
Морфология	Коккообразные прямые палочки средней длины
Подвижность; жгутики	-	+
Действие на кровь	100	40
Брожение или окисление	окисление	окисление
Образование кислоты из Д-глюкозы	100	100
D-ксилозы	12 (50)1)	86 (14)
D-маннитола	62 (14) 1)	94 (6)
Лактозы	12 (62) 1)	99 (1)
Сахарозы	0	66 (4)
Мальтозы	(75) 1)	99 (1)
Каталаза	100	100
Оксидаза	25	100
Рост на среде Мак-Конки	88	100
SS	0	8 (31)
С цетримидом		7 (3)
Цитрат, среда Симмонса	0	77 (4)
Мочевина, среда Кристенсена	12	13 (8)
Восстановление нитрата	100	100
Газ из нитрата	0	100
Индол	0	0
Скошенный агар TSI, кислота	0	72
Столбик TSI, кислота	0	0
H2S (столбик TSI)	0	0
HbS(бумага с ацетатом РЬ)	100	26
Разжижение желатина	0	79
Лакмусовое молоко	0	96
Пигмент растворимый	0	51-белый
Нерастворимый	0
Рост при 25° С	100	100
35° С	100	100
42° С	0	100
Гидролиз эскулина	0	59
Лизиндекарбоксилаза	0	0
Аргининдигидролаза	100	100
Орнитиндекарбоксилаза	100	0
МПБ, 0% NaCl	0	100
МПБ, 6% NaCl	0	12

¹⁾ (—) Результат может проявиться с задержкой, необходима инкубация 7—14 суток.²⁾Инкубация 7 —14 суток.

погибает. На пике заболевания морских свинок убивают, вскрывают, де­лают мазки — отпечатки из органов, окрашивают по Граму, исследуют материал в МФА, ИФА, РНГА, проводят посевы на питательные среды с целью выделения чистой культуры возбудителя. Следует учитывать, что скротальный феномен не является строго специфической реакцией и может наблюдаться при введении P.aeruginosa, B.pseudomallei и некоторых дру­гих бактерий. Хомячкам ма­териал вводят в дозе 0,5-1 мл. Наблюдение за животными осуществляют в течении 15 суток.

Серологическая диагностика

Основной метод серологической диагностики сапа животных — РСК, с не­давних пор — пластинчатая РА с сапным цветным антигеном. Согласно действующей инструкции предписывается применение РА вместо глазной маллеиновой пробы и РСК. Разработан и испытывается для целей сероди­агностики сапа методом РНГА эритроцитарный антигенный диагностикум.

В РСК исследуют сыворотки в разведениях 1:5 и 1:10. Обычно сыворот­ки крови инактивируют в водяной бане 30 минут при 58-59° С, ослов и мулов — при 62-63° С. Первую и вторую фазу РСК проводят в водяной бане 20 минут при 37-38° С. Учет результатов реакции проводят сразу после завершения второй фазы РСК и на следующий день, при условии хранения пробирок в холодильнике. Диагностическим титром сыворотки считается разведение 1:10. 3а положительный результат принимают задер­жку гемолиза на 3-4 креста в разведении 1:10, независимо от результа­тов — в разведении 1:5. Сомнительным результатом считают реакцию на 1-2 креста в разведении 1:10, при параллельной задержке гемолиза в раз­ведении сыворотки 1:5 — на 3-4 креста. Во всех других случаях реакцию считают отрицательной.

Лабораторная диагностика мелиоидоза

Мелиоидоз (ложный сап) — редко встречающееся инфекционное заболева­ние некоторых видов животных и человека в районах Юго-Восточной Азии, северных провинциях Австралии, в виде спорадических случаев в странах Европы, Африки, Северной Америке, Китае, В РФ мелиоидоз не регистрируется. Мелиоидоз характеризуется лихорадкой, катаральногнойным воспалением слизистых оболочек, образованием казеозных узел­ков и гнойных очагов в различных органах и тканях. В естественных усло­виях восприимчивы к мелиодозу грызуны, собаки, кошки, свиньи, овцы, крупный рогатый скот, лошади, ослы, а также человек. Возбудителем бо­лезни является грамотрицательная палочковидная бактерия Burkholderia pseudomallei, род Burkholderia, ранее Pseudomonas pseudomallei. Лабораторная диагностика болезни основана на результатах бактериоло­гического и серологического исследований.

Бактериологическое исследование

Материалом для бактериологического исследования при жизни служат: гнойное отделяемое язв, содержимое абсцессов, кровь, моча, мокрота, вы­деления из носовых отверстий, глаз. Посмертно берут участки поражен­ных тканей, кровь, кусочки внутренних органов, лимфатические узлы. Взя­тие и пересылку материала проводят согласно режиму работы с особо опас­ными инфекциями.

Микроскопическое исследование исходного материала, обнаружение антигенов и ДНК возбудителя

Из материала готовят мазки для окраски по Граму, люминесцентно-серологического и иммуноферментного исследования. В положительных случа­ях в мазках, окрашенных по Граму, обнаруживают полиморфные, грамотрицательные, нередко биполярные палочковидные бактерии с закруглен­ными концами размером 3-6х0,3-0,6 мкм. Клетки возбудителя окруже­ны массивной слизистой капсулой. По данным ученых, присутствие капсулы отражает определенный антигенный состав и виру­лентность возбудителя. Апробирована ПЦР с целью выявления ДНК воз­будителя в исследуемом материале.