- •Министерство сельского хозяйства
- •Формы взаимодействия микро и макро организмов
- •Характерные особенности инфекционной болезни
- •Методы лабораторных исследований
- •Лабораторная диагностикакоринебактериозов
- •Выделение и идентификация коринебактерии
- •Питательные среды
- •Бактериологическое исследование
- •Микроскопическое исследование исходного материала
- •Бактериологическое исследование
- •Микроскопическое исследование исходного материала
- •Биопроба. Проводят с целью выделения культуры возбудителя из исследуемого мате риала и проверки патогенных свойств выделенной культуры.
- •Микроскопическое исследование исходного материала
- •Выделение и идентификация культуры возбудителя
- •Питательные среды такие же как и при лабораторной диагностике актинобациллезной пневмонии свиней.
- •Микроскопическое исследование исходного материала
- •Выделение и идентификация культуры возбудителя
- •Выделение и идентификация культуры возбудителя
- •Сывороточно-дрожжевой бульон. Готовят так же, как и сывороточно-дрожжевой агар, но на основе жидкой питательной среды.
- •Лабораторная диагностика бортелиоза
- •Бактериологическое исследование
- •Выделение и идентификация бордетелл
- •Бактериологическое исследование
- •Питательные среды
- •Лабораторная диагностика сапа
- •Биопроба. Проводят с целью обнаружения возбудителя в исследуемом материале и подтверждения патогенных свойств выделенной культуры на золотистых хомячках, морских свинках.
- •Выделение и идентификация культуры возбудителя
- •Микроскопическое исследование исходного материала
- •Микроскопическое исследование исходного материала
- •Выделение и идентификация культуры возбудителя
- •Питательные среды
- •Питательные среды
- •Микроскопическое исследование исходного материала
- •Выделение и идентификация кампилобактерии
- •Серологическая диагностика
- •Питательные среды
- •Биопроба. Проводят в случаях, когда микроскопическое исследование материала дает отрицательные результаты. Заражают молодых кур, кроликов, морских свинок, белых мышей, куриные эмбрионы.
- •Питательные среды
- •Определение потребности в холестерине. От стерола не зависят ахолеплазмы, требуют его для своего роста микоплазмы, уреаплазмы и спироплазмы.
- •Питательные среды для культивирования микоплазм
- •Лабораторная диагностика контагиозной плевропневмонии крупного рогатого скота
- •Выделение и идентификация культуры возбудителя
- •Серологическая диагностика
- •Выделение и идентификация культур возбудителей
- •Микроскопическое исследование исходного материала
- •Выделение и идентификация микоплазм от овец и коз
- •Серологическая диагностика
- •Лабораторная диагностика микоплазмозов свиней
- •Микроскопическое исследование исходного материала
- •Выделение и идентификация свиных микоплазм
- •Серологическая диагностика
- •Лабораторная диагностика микоплазмозов птиц
- •Микроскопическое исследование исходного материала
- •Выделение и идентификация культур микоплазм
- •Серологическая диагностика
- •Лабораторная диагностика Ку-лихорадки
- •Бактериологическое исследование
- •Серологическая диагностика
- •Бактериологическое исследование
- •Микроскопическое исследование материала
- •Выделение и идентификация культуры возбудителя
- •Лабораторная диагностика неориккетсиоза собак
- •Микроскопическое исследование материала
- •Биопроба. На собаках путем заражения кровью или тканью селезенки можно проводить серийные пассажи возбудителя. Инкубационный период 6-12 дней. Серологическая диагностика
- •Лабораторная диагностика анаплазмоза крупного и мелкого рогатого скота
- •Микроскопическое исследование материала
- •Серологическая диагностика
- •Микроскопическое исследование материала
- •Лабораторная диагностика гемабартонеллеза кошек
- •Микроскопическое исследование материала
- •Биопроба. При внутривенном, интраперитонеальном или оральном заражении материалом кошек воспроизводится клинически выраженное заболевание.
- •Микроскопическое исследование исходного материала
- •Выделение и идентификация хламидии
- •Серологическая диагностика
- •Лабораторная диагностика бешенства
- •Индикация и идентификация вируса
- •Серологическая идентификация
- •Лабораторная диагностика ящура
- •Серодиагностика и ретроспективная диагностика
- •Лабораторная диагностика ортомиксовирусных инфекций
- •Лабораторная диагностика гриппа птиц
- •Серологическая идентификация
- •Лабораторная диагностика классической чумы свиней
- •Серологическая идентификация
- •Серодиагностика и ретроспективная диагностика
- •Индикация и идентификация вируса
- •Серодиагностика и ретроспективная диагностика
Лабораторная диагностика ортомиксовирусных инфекций
Вирусы имеют особое сродство к мукополисахаридам и гликопротеидам. Имеют сходные биологические свойства: способность агглютинировать эритроциты, наличие у некоторых представителей нейраминидазы, легкость культивирования в КЭ и тропизм к органам дыхания. Вирусы имеют принципиальные различия по внутриклеточной локализации АГ, по чувствительности и препаратам, затрагивающим синтез белков и нуклеиновых кислот и по генетическим свойствам. С 1980 г. принята следующая номенклатура субъединиц вирусов гриппа рода А, включающая вирусы человека, лошади, свиньи, кур, уток, индюков и некоторых видов птиц.
Таблица 105 - Номенклатура субъединиц вирусов гриппа рода А
Согласно Международной номенклатуре любой штамм вируса гриппа рода А обозначается по следующей схеме: род/источник изоляции/место изоляции/ собственный номер изолята/год изоляции/формула вида - серотипы ГА и нейраминидазы. Для штаммов, изолированных от человека, источник изоляции не пишется; для всех других штаммов год изоляции обозначается 2-мя последними цифрами. Семейство ортомиксовирусов (от греч. orthos -правильный, прямой и mуха - слизь) включает три рода: вирусы гриппа А и В, вирусы гриппа С и тоготоподобные вирусы.
Типичным представителем рода вирусов гриппа А и В является вирус гриппа A/PR/8/34(H1N1). Вирионы представляют собой частицы плеоморфной, чаще округлой формы, диаметром 80-120 нм. Они состоят из фрагментированного нуклеокапсида спиральной симметрии диаметром 9-15 нм и липопротеидной оболочки, на поверхности которой имеются выступы длиной 10,0-13,5 нм. Мол. м. вирионов 250 МД,
Геном состоит из 8-и неодинаковых по размеру (900-2350 нуклеотидов) фрагментов 1-спиральной минус-РНК. Вирионная РНК ортомиксовирусов не обладает инфекционностью. В вирионах обнаружено 7 белков, 4 из которых (РВ1, РВ2, РА, NP) связаны с нуклеокапсидом, а 3 (НА, NA, Ml) входят в состав липопротеидной оболочки, причем 2 из них (НА и NA) являются гликопротеинами. Гликопротеины образуют 2 вида выступов наружной оболочки вирионов. Выступы 1-го вида образованы гемагглютинином (НА) с мол.м. 75-80 кД (около 500 а.к.). Каждый выступ состоит из 3-х молекул НА, которые организованы в палочкообразную структуру. Каждая молекула НА в свою очередь состоит из 2-х субъединиц (НА 1-330 а.к., НА 2-22 - а.к.), соединенных дисульфидной связью. НА ответственен за адсорбцию и проникновение вирионов в клетку и ГА-активность вируса. AT к НА нейтрализуют инфекционность вируса и подавляют его ГА-активность. Выступы 2-го типа образованы нейраминидазой (NA) с мол.м. 60-70 кД (450-470 а.к.). Все подтипы НА и NA вируса гриппа А обозначают последовательными номерами независимо от происхождения вируса. Установлено 14 АГ подтипов по НА и 9 подтипов по NA. Вирус гриппа В не подразделяют на АГ подтипы. Синтез вирусспецифических белков происходит в цитоплазме клетки.
В естественных условиях вирус гриппа А поражает человека, свиней, лошадей и птиц, а вирус гриппа В - только человека. Передаются вирусы аэрогенным путем.
Типичный представитель рода вирусов гриппа С - вирус гриппа C/Taylor/1233/47. Вирус гриппа С обнаружен у человека и свиней.
В состав рода тоготоподобные вирусы входят вирусы Тогото (прототипный вирус) и Дори, переносимые клещами и иногда поражающие человека. Морфологически они сходны с другими ортомиксовирусами и содержат 6-7 фрагментов 1-спиральной минус-РНК.
Грипп кур (классическая чума птиц, грипп птиц А1, подтип 7, экссудативный тиф) - острая контагиозная вирусная болезнь, характеризующаяся общим угнетением, отеками, поражением органов дыхания и пищеварения.
В настоящее время грипп птиц в форме КЧП регистрируется редко. Чаще инфекция проявляется эпизоотическими вспышками, вызываемыми штаммами других АГ подтипов с более низкой, чем вирус КЧП, патогенностью. Такие вспышки зарегистрированы в США, Италии, Англии, ФРГ, СССР и других странах. Вирусы гриппа птиц (ВГП) выделены от кур, индюков, уток, перепёлок, фазанов, глухарей, длиннохвостых попугаев, цесарок и др.
Антигенная вариабельность и родство. В настоящее время вирусы гриппа А птиц на основании их поверхностных АГ - ГА (Н) и нейраминидазы (N) - разделены на 13 по Н-АГ и 9 вариантов по N-АГ (табл. 106). Штаммоспецифические АГ-связи определяются с помощью: РТГА - для определения сходства по ГА; РТНА - для определения сходства или различия по НА; теста двойной диффузии - для определения сходства ГА и НА. У штаммов вируса гриппа А птиц, имеющих АГ характеристику H1N1, выявлено не менее 4 АГ детерминант нейраминидазы. Четкие различия выявлены также у НА штаммов вируса гриппа А птиц с АГ формулой H3N8, следовательно, НА штаммов вируса гриппа А птиц с АГ характеристиками H1N1 и H3N8 имеет на своей поверхности не менее 4-х АГ различных детерминант: 1 общую для вирусов, имеющих одинаковый сероподтип, 2 - перекрестно реагирующих и 1 - штаммоспецифическую.
Таблица 106 - Обозначения серотипов вируса гриппа А птиц
Серовариант |
Наименование штамма |
Формула |
1. |
А/утка/ Ал ьберта/3 5/7 6/ |
H1N1 |
2. |
А/утка/Германия/ 1215/73 |
H2N3 |
3. |
А/утка/Украина 1/63 |
H3N8 |
4. |
А/угка/ЧССР/56 |
H4N6 |
5. |
А/крачка/Ю . Африка/6 1 |
H5N3 |
6. |
А/индюк/Массачусетс/3 740/65 |
H6N2 |
7. |
А/вирус чумы птиц/Росток/34 |
H7N1 |
8. |
А/утка/Онтарио/б 1 1 8/68 |
H8N4 |
9. |
А/индюк/Висконсин( 1 /66) |
H9N2 |
10. |
А/цыпл енок/Германия/4 9 |
H10N7 |
11. |
А/Утка/ Англ ия/5 6 |
H1IN6 |
12. |
А/утка/ Альберта/60/ 1 6 |
H12N5 |
13. |
А/черноголовый хохотун/ Астрахань/ 142/7 |
H13N2 |
Кроме 13 подтипов ГА, все штаммы ВГП содержат в своей структуре НА или птичьего, или человечьего, или лошадиного происхождения. Собственно птичьей НА известно 6 типов, Подтиповая классификация ВГП продолжается и по сегодняшний день, т.к. новые факты выделения их от птиц различных видов регистрируются ежегодно в различных регионах земного шара. В 1971 г. была опубликована номенклатура вирусов гриппа А, рекомендованная группой экспертов ВОЗ. Согласно этой рекомендации каждый штамм обозначается по месту и времени выделения, а в скобках указывается его АГ формула. Эта номенклатура себя оправдала, однако накопившиеся за последние годы данные требуют ее пересмотра В 1980 г. ВОЗ предложила новую номенклатуру ВГП. Предложено обозначать серотипы ГА и НА последовательными номерами, независимо от происхождения вирусов. Таблица эталонных штаммов ВГП свидетельствует о том, что изменения нуклеотидной последовательности и, как следствие, замена аминокислотных остатков сопряжено с изменением патогенности вируса гриппа в отношении птиц и КЭ. Так, например, изолят А/индюк/Висконсин/68
(H5N9) ВГП состоит из 2-х популяций вируса, имеющих разные гены NS и вызывающих разные биологические реакции. Анализ АГ свойств методами ИФА и РТГА свидетельствует о родстве внутренних белков "человеческих" и "птичьих" вирусов гриппа и различиях в структуре поверхностного гликопротеина - ГА.
Спектр патогенности в естественных условиях. Он неоднороден и зависит от АГ подтипа. Известны 2 подтипа ВГП; А5 и А7, вызывающих заболевание типа КЧП. Грипп А7 КЧП чаще поражает птиц семейства куриных, менее восприимчивы водоплавающие птицы.
Дикие утки и др. виды водоплавающей птицы также чувствительны даже к самым слабопатогенным штаммам ВГП и являются не только переносчиками инфекции, но и резервуаром. Сезонные миграции диких птиц вызывают сезонные заболевания болотных птиц.
Из 14 подтипов вируса гриппа А только 3 обнаруживаются у человека (Н1, Н2 и НЗ). Прошло уже 25 лет с тех пор как из человеческой популяции исчез подтип Н2 вируса гриппа. Однако ген ГА Н2 циркулирует среди птичьих штаммов вируса гриппа.