- •Министерство сельского хозяйства
- •Формы взаимодействия микро и макро организмов
- •Характерные особенности инфекционной болезни
- •Методы лабораторных исследований
- •Лабораторная диагностикакоринебактериозов
- •Выделение и идентификация коринебактерии
- •Питательные среды
- •Бактериологическое исследование
- •Микроскопическое исследование исходного материала
- •Бактериологическое исследование
- •Микроскопическое исследование исходного материала
- •Биопроба. Проводят с целью выделения культуры возбудителя из исследуемого мате риала и проверки патогенных свойств выделенной культуры.
- •Микроскопическое исследование исходного материала
- •Выделение и идентификация культуры возбудителя
- •Питательные среды такие же как и при лабораторной диагностике актинобациллезной пневмонии свиней.
- •Микроскопическое исследование исходного материала
- •Выделение и идентификация культуры возбудителя
- •Выделение и идентификация культуры возбудителя
- •Сывороточно-дрожжевой бульон. Готовят так же, как и сывороточно-дрожжевой агар, но на основе жидкой питательной среды.
- •Лабораторная диагностика бортелиоза
- •Бактериологическое исследование
- •Выделение и идентификация бордетелл
- •Бактериологическое исследование
- •Питательные среды
- •Лабораторная диагностика сапа
- •Биопроба. Проводят с целью обнаружения возбудителя в исследуемом материале и подтверждения патогенных свойств выделенной культуры на золотистых хомячках, морских свинках.
- •Выделение и идентификация культуры возбудителя
- •Микроскопическое исследование исходного материала
- •Микроскопическое исследование исходного материала
- •Выделение и идентификация культуры возбудителя
- •Питательные среды
- •Питательные среды
- •Микроскопическое исследование исходного материала
- •Выделение и идентификация кампилобактерии
- •Серологическая диагностика
- •Питательные среды
- •Биопроба. Проводят в случаях, когда микроскопическое исследование материала дает отрицательные результаты. Заражают молодых кур, кроликов, морских свинок, белых мышей, куриные эмбрионы.
- •Питательные среды
- •Определение потребности в холестерине. От стерола не зависят ахолеплазмы, требуют его для своего роста микоплазмы, уреаплазмы и спироплазмы.
- •Питательные среды для культивирования микоплазм
- •Лабораторная диагностика контагиозной плевропневмонии крупного рогатого скота
- •Выделение и идентификация культуры возбудителя
- •Серологическая диагностика
- •Выделение и идентификация культур возбудителей
- •Микроскопическое исследование исходного материала
- •Выделение и идентификация микоплазм от овец и коз
- •Серологическая диагностика
- •Лабораторная диагностика микоплазмозов свиней
- •Микроскопическое исследование исходного материала
- •Выделение и идентификация свиных микоплазм
- •Серологическая диагностика
- •Лабораторная диагностика микоплазмозов птиц
- •Микроскопическое исследование исходного материала
- •Выделение и идентификация культур микоплазм
- •Серологическая диагностика
- •Лабораторная диагностика Ку-лихорадки
- •Бактериологическое исследование
- •Серологическая диагностика
- •Бактериологическое исследование
- •Микроскопическое исследование материала
- •Выделение и идентификация культуры возбудителя
- •Лабораторная диагностика неориккетсиоза собак
- •Микроскопическое исследование материала
- •Биопроба. На собаках путем заражения кровью или тканью селезенки можно проводить серийные пассажи возбудителя. Инкубационный период 6-12 дней. Серологическая диагностика
- •Лабораторная диагностика анаплазмоза крупного и мелкого рогатого скота
- •Микроскопическое исследование материала
- •Серологическая диагностика
- •Микроскопическое исследование материала
- •Лабораторная диагностика гемабартонеллеза кошек
- •Микроскопическое исследование материала
- •Биопроба. При внутривенном, интраперитонеальном или оральном заражении материалом кошек воспроизводится клинически выраженное заболевание.
- •Микроскопическое исследование исходного материала
- •Выделение и идентификация хламидии
- •Серологическая диагностика
- •Лабораторная диагностика бешенства
- •Индикация и идентификация вируса
- •Серологическая идентификация
- •Лабораторная диагностика ящура
- •Серодиагностика и ретроспективная диагностика
- •Лабораторная диагностика ортомиксовирусных инфекций
- •Лабораторная диагностика гриппа птиц
- •Серологическая идентификация
- •Лабораторная диагностика классической чумы свиней
- •Серологическая идентификация
- •Серодиагностика и ретроспективная диагностика
- •Индикация и идентификация вируса
- •Серодиагностика и ретроспективная диагностика
Выделение и идентификация культуры возбудителя
Культивирование. В. pseudomallei — факультативный анаэроб, температурный оптимум 37° С, диапазон 14-44° С, рН питательных сред 6,8-7,0, диапазон 5,6-8,5. Возбудитель не требователен к питательным средам, но лучше растет на субстратах с добавлением 4-5% глицерина. Обычно посев производят на мясопептонный агар и бульон с глицерином. Кон-таминированный материал рекомендуется в течение 3 часов обработать пенициллином (1000 ЕД/мл) и высевать на М ПА с кристаллвиоле-том (1:200 000), на синтетическую среду с Р-аланином и неомицином. Посевы инкубируют при 37° С, в аэробных условиях в течение 5-6 суток, ежедневно просматривая. В.pseudomallei, в отличие от В.mallei, не способен расти при 42° С.
Отличительной особенностью В.pseudomallei от В.mallei является способность к росту на средах без глицерина. В положительных случаях на МПА с глицерином через сутки инкубирования формируются мелкие, полупрозрачные, сероватого цвета колонии с ровными краями, выпуклые, с гладкой поверхностью, которые напоминают колонии эшерихий, но более мелкие. На кровяном агаре некоторые штаммы вызывают а-гемолиз. Нередко вырастают крупные слизистые колонии, диаметром до 6 мм, правильной круглой формы, выпуклые, слегка опалесцирующие. Наиболее часто колонии этой морфологии образуются при исследовании мокроты.
На вторые сутки и позднее колонии теряют прозрачность, проявляются признаки диссоциации: часть колоний остаются блестящими, гладкими, с ровными краями, у других формируется шероховатая или складчатая поверхность, неровный, зубчатый край, они отдаленно напоминают старые колонии микобактерий туберкулеза. Таким образом, в посевах могут присутствовать S-, R-, М- и промежуточные формы колоний.
В МПБ рост возбудителя через 10-12 часов характеризуется легким помутнением среды, через 24-30 часов помутнение становится сильным, образуется осадок и поверхностная пленка, которая спустя 4-5 суток делается складчатой, превращается из серо-желтоватой в коричневатую, после добавления нейтрального красного пленка окрашивается в оранжево-красный цвет. Культуры В.pseudomallei имеют специфический запах плесени.
Морфологические и тинкториальные свойства B.pseudomallei в культуре. В мазках из культуры клетки возбудителя имеют морфологию, сходную с наблюдаемой в патологическом материале; клетки мелкие, располагаются единично, парами, короткими цепочками, «обоймами» по 5-7 штук. При старении культур образуются скопления по 8-10 штук, объединенные слизистой массой; клетки с возрастом удлиняются, появляется зернистость, одновременно обнаруживаются коккобактерии. Для клеток, окрашенных по Граму и другими анилиновыми красителями, характерна биполярность, спор не образуют, подвижны, движение клеток прямолинейное или змеевидное. На сывороточных средах возбудитель образует капсулу.
Идентификация B.pseudomallei по ферментативным свойствам. Для В. pseudomallei характерно наличие аргиниидигидролазы, оксидазы, желатиназы, гидролиз крахмала, денитрифицирующая активность, использование глюкозы, трегалозы, мезо-инозитола, d-валина, β-аланина, d-аргинина, Д-рибозы, левулината, эритритола, а-амиланина, инертность по отношению к гераниолу, Д-ксилозе, d-рамнозе, сахарату, цитроконату, мезаконату, Д- и мезо-тартрат. Критерии дифференциации В.pseudomallei представлены в таблице 79. Согласно этим данным, для возбудителя мелиоидоза свойственна, в отличие от В. mallei, способность образовывать газ из нитрата (100% штаммов), кислоту на скошенном агаре TSI (72% штаммов), расти на среде Симмонса (77% штаммов), разжижать желатину (79% штаммов), изменять лакмусовое молоко (96% штаммов).
Отмечается непостоянство утилизации В. pseudomallei органических соединений. Причина такого явления окончательно не выяснена, как постоянный признак может рассматриваться окисление галактозы, маннозы, эскулина, амидона, декстрина; непостоянный — окисление арабинозы, ксилозы, глюкозы, левулезы, лактозы, мальтозы, трегалозы, раффинозы, глицерина, маннита, инулина; постоянно отрицательный — отсутствие окисления рамнозы, сахарозы, салицина, дульцита, инозита, сорбита, адонита. Система комбинированного тестирования ферментативной активности API 20 Е позволяет идентифицировать только 50-63% штаммов возбудителя. Более эффективны системы Minitek и ЕРА — 18 NF. Несовершенство методов идентификации возбудителя по фенотипическим признакам подтверждает перспективность молекулярно-генетической диагностики мелиоидоза.
Серологическая идентификация возбудителя. На различных этапах бактериологического исследования может быть использован метод флуоресцирующих антител, РНГА, ИФА. При просмотре первичных посевов на плотных питательных средах отбирают «подозрительные» колонии и проверяют их в РА на стекле. Коммерческая иммунная мелиоидозная сыворотка агглютинирует в разведении до 1:160 культуры всех известных штаммов В. pseudomallei. В РА, при использовании поликлональной сыворотки, нельзя дифференцировать В. mallei и В. pseudomalei. Возбудитель тиелиоидоза имеет антигены, родственные довольно широкому кругу гетерологичных видов бактерий, но наиболее близок по спектру антигенов с В. mallei. По результатам РА отбирают культуры для дальнейшего изучения ферментативных свойств с целью окончательной идентификации.
Биопроба. Проводят с целью выделения культуры возбудителя из исследуемого материала и установления патогенных свойств изолированной культуры. Биопробу проводят на морских свинках, золотистых хомяках и крысах (крысы резистентны к В.mallei). Если материал не загрязнен посторонней микрофлорой, то его вводят животным внутрибрюшинно, в противном случае — подкожно или наносят на скарифицированную кожу. Морским свинкам и крысам вводят соответственно по 1,0 и 0,5 мл суспензии исследуемого материала. При наличии возбудителя на месте введения материала у животных развивается отек, некроз ткани, иногда образуется язва, увеличиваются лимфатические узлы, в них образуются абсцессы; в паренхиматозных органах (легкие, печень, селезенка) формируются множественные абсцессы, заболевание сопровождается лихорадкой. Морские свинки погибают через 8-10 дней после заражения, золотистые хомяки — через 3-5 дней. У зараженных самцов может развиваться феномен Штрауса (см. «Сап»). Павших и погибших животных исследуют бактериологически с использованием всех вышеперечисленных методов.
Серологическая диагностика
Для целей серодиагностики мелиоидоза применяют пробирочную РА, РСК и РПГА. РА при мелиоидозе малочувствительна и недостаточно специфична. Считается, что титры 1:8-1:160 могут иметь диагностическое значение. Но более достоверны результаты исследования парных сывороток крови, показывающие повышение титра антител. РСК по чувствительности и специфичности превосходит РА. В качестве антигена используют водорастворимые экстракты из клеток. Однако в РСК нельзя дифференцировать из-за антигенного родства возбудителей мелиоидоза и сапа. Специфичность РПГА определяется характером антигена на эритроцитах. У больных животных и людей, как правило, титры в РПГА составляют 1:320-1:2560.
Лабораторная диагностика псевдомоноза
P. aeruginosa относится к категории условно патогенных бактерий, часто обнаруживается на слизистых оболочках животных, на фоне снижения резистентности макроорганизма может вызывать септицемии, бронхопневмонии, абсцессы, маститы, аборты, поражения мочевого тракта, постхирургические осложнения. P. aeruginosa известен как возбудитель псевдомоноза норок. Pseudomonas aeruginosa является аэробной, грам-отрицательной бактерией, относящейся к семейству Pseudomonadaceae, роду Pseudomonas, который объединяет более двадцати видов. Лабораторная диагностика основана на результатах бактериологического исследования.
Бактериологическое исследование
Материал для исследования зависит от локализации патологического процесса, вызванного P. aeruginosa, прижизненно это может быть воспалительный экссудат, посмертно — пораженные участки легких при пневмонии, лимфатические узлы, селезенка, печень, почки и т.д. Материал желательно отбирать непосредственно из очага воспаления, отделяемого, если таковое имеется, а также до начала антибиотикотерапии или после выведения антибиотика из организма.