Микроскопическое исследование материала

Из органов делают мазки-отпечатки, фиксируют метанолом (3-5 ми­нут) или этанолом (20-25 минут) и окрашивают по Романовскому 30-45 минут (3 капли азур-эозина на 2 мл дистиллированной воды с рН 7,0-7,2) или проводят прямое флуорохромировапие акридиновым оранже вым. Эперитрозооны морфологически представляют кокковидные или кольцевидные образования размером 0,4-1,5 мкм, редко палочки розо­ватого или розово-фиолетового цвета. На поверхности эритроцитов воз­можно скопление кольцевидных форм. Согласно «Методическим указа­ниям по лабораторным исследованиям на эперитрозооноз овец» (1985) для дифференциации эперитрозоонов от анаплазм, бабезий, пироплазм и тейлерий рекомендуется руководствоваться критериями, изложенными в таблице 99.

Таблица 99 - Дифференциальная таблица возбудителей

Возбудитель	Форма клетки	Локализация
1. Эперитрозоон	Округлая, овальная, палочковид­ная, гантелевидная, кольцевидная	На поверхности эритроцитов, тромбоцитов, по их периферии, между ними
2. Анаплазма	Палочковидная, округлая	По периферии, в центре эритроцита
3. Пироплазма	Округлая, грушевидная (парная, одиночная), парная расположена под острым углом или параллель­но	В центре эритроцита
4. Бабезия	Округлая, грушевидная (парная, одиночная); парная расположена под прямым углом	Чаще по периферии, в центре эрит­роцита
5.Тейлерия	Круглая, овальная, палочковид­ная, запятовидная, анаплазмоид-ная,крестообразная	В эритроците

Серологическая диагностика

Для диагностики эперитрозооноза свиней испытаны и рекомендованы не­прямой метод флуоресцирующих антител и РСК.

Лабораторная диагностика гемабартонеллеза кошек

Возбудитель относится к семейству Anaplasmataceae, роду Haemabartonella, виду H. felis. Заболевание известно как инфекционная анемия кошек. Воз­будитель локализуется в эритроцитах. На бесклеточных питательных сре­дах не культивируется, не патогенен для других видов животных. Лабора­торная диагностика основана на результатах микроскопического исследо­вания материала.

Бактериологическое исследование

Объектом исследования является кровь и ткани больных животных.

Микроскопическое исследование материала

Мазки фиксируют метанолом, окрашивают по Романовскому-Гимза или флуоресцирующими антителами. Возбудитель имеет кокковидную (0,1-0,8 мкм) или палочковидную (0,2-1,5 мкм) форму, локализуется в углуб­лениях поверхности или вакуолях эритроцитов, редко — в плазме. Кольце­видные структуры встречаются редко. При окраске по Романовскому-Гимза цвет клеток темно-пурпурный.

Биопроба. При внутривенном, интраперитонеальном или оральном заражении мате­риалом кошек воспроизводится клинически выраженное заболевание.

Лабораторная диагностика хламидиозов

Хламидии представляют собой кокковидные, грамотрицательные бактерии, которые являются облигатными внутриклеточными паразитами, энергоза­висимыми от клетки хозяина, поэтому на искусственных питательных сре­дах не растут. Размножаются внутри связанных с мембраной вакуолей в цитоплазме клеток млекопитающих и птиц. Относятся к семейству Chlamydiaceae, роду Chlamydia, который ранее подразделяли на два вида хламидии.

В настоящее время подтверждена фенотипическая гетерогенность хлами­дии и на основании результатов методов геносистематики проведена реклассификация известных видов хламидии, определено таксономическое по­ложение так называемых «хламидиеподобных» бактерий. В соответствии с этими критериями порядок Chlamydiales подразделен на четыре семейства и пять родов. Семейство Chlamydiaceae включает роды: Chlamydia (виды: С.trachomatis, C.suis, C.muridatum); Chlamydophila (виды: C.pneumoniae, Cpecorum, Cpsittaci, C.abortus, C.caviae, C.felis). Семейство Parachlamydiaceae представлено родом Parachlamydia с одним видом P.acanthamoebae. Семейство Simkaniaceae включает род Simkania с видом S.negevensis. Семейство Waddliaceae представлено родом Waddlia с видом W.chondrophila. В пределах рода Chlamydia вид С. suis рассматривается как возбудитель конъюнктивита, энтерита и пневмо­нии у животных; С. trachomatis является исключительно паразитом челове­ка; C.muridatum определен как патоген грызунов. В роде Chlamydophila вид С.ресоum рассматривается как возбудитель бесплодия у коал, отдельные штаммы выделяют от жвачных млекопитающих и свиней. Вид C.pneumoniae является возбудителем респираторных болезней человека (биовар TWAR), лошадей (биовар Equine) и коал (биовар Koala). Chlamydophila psittaci (пре­жнее название — Chlamydia psittaci) согласно новой классификации вклю­чает штаммы восьми сероваров, для которых основными хозяевами являют­ся птицы, и они могут передаваться человеку. Вид С. abortus в основном вызывает аборты у жвачных животных, но также обнаруживается у свиней, кроликов, мышей. C.felis обуславливает риниты и конъюнктивиты у кошек. С. caviae рассматривается как вид, эндемичный для гвинейской свиньи. Пред­ставители семейства Parachlamydiaceae поражают простейших и не пред­ставляют интереса для ветеринарных микробиологов. У единственного вида семейства Simkaniaceae естественный хозяин не установлен, он выделен толь­ко из культуры клеток. В семействе Waddliaceae вид W. chondrophila выде­лен из абортированного плода коровы.

Таблица 100 - Патогенные свойства хламидий

Вид хламидий	Характер вызываемой патологии. Виды поражаемых животных
С. psittaci	Аборты лошадей, коз, свиней, коров, овец, вульвовагиниты крупного рогатого скота. Энтериты, артриты телят. Энтериты, артриты телят. Энцефаломиелит крупного рогатого скота (спорадический). Пневмония свиней, коз, овец, крупного рогатого скота, кошек. Офтальмия крупного, мелкого рогатого скота, свиней. Пситтакоз (орнитоз) птиц с явлениями пневмонии. Аэросаккулит, перикардит, энцефалит, Конъюнктивит, энтерит. Пневмонии, аборты, конъюнктивиты человека.
С. trachomatis	Поражения у человека органов зрения (трахома, конъюнктивит с включениями- паратрахома), репродуктивных органов (уретриты, сальпингиты, цервициты, эпидидимиты и др.).

Методы диагностики, позволяющие четко дифференцировать виды хла­мидий у животных, пока в полном объеме недоступны диагностическим лабораториям. Наиболее перспективным методом видовой идентификации хламидий представляется в этом плане полимеразная цепная реакция.

Лабораторная диагностика хламидиозов основана на детекции возбу­дителя в ПЦР, микроскопическом обнаружении клеток возбудителя в окрашенных мазках, идентификации в препаратах из исследуемого материа­ла при помощи серологических реакций (МФА, ELISA), выделении возбу­дителя путем заражения куриных эмбрионов и лабораторных животных с последующей идентификацией хламидий в органах и тканях при помощи вышеуказанных методов, а также на результатах исследований сывороток крови в серологических реакциях. Работы по диагностике антропозоонозных хламидиозов проводят только в лабораториях, которые имеют специ­альное разрешение режимной комиссии СЭС.

Бактериологическое исследование

В случае абортов берут кусочки плаценты, абортированные плоды целиком или паренхиматозные органы, а также сычуг, образцы влагалищной слизи не позднее 1-2 дней после аборта. Образцы слизи отбирают ватно-марлевыми тампонами, которые потом помещают в пробирки с физиологическим раство­ром, содержащим 500 мкг/мл стрептомицина. При наличии конъюнктивитов соскобы с конъюнктивы берут затупленным скальпелем с предварительной ее обработкой 0,5% раствором дикаина, готовят мазки, фиксируют для ок­раски по Романовскому-Гимза или МФА и иммунопероксидазным методом. От павших или вынужденно убитых животных отбирают кусочки па­ренхиматозных органов, лимфатических узлов, образцы слизи носовой по­лости, трахеи, тонкого отдела кишечника, головного мозга и мозговых оболочек. При наличии у больных животных артритов направляют также синовиальную жидкость. У животных-производителей принудительно по­лучают пробы эякулята. Материал для исследования берут в первые два часа после гибели или аборта животного. Флаконы с материалом помеща­ют в термос со льдом и доставляют в лабораторию не позднее 24 часов после взятия. Оптимальным является помещение и доставка материала в термосе со льдом в специальной транспортной среде Spenser&Jonson (1983): сахароза — 74,6 г; КН₂Р0₄ — 0,512 г; К₂НР0₄ — 1,237 г; L-глутаминовая кислота — 0,721 г; феноловый красный — 0,015 г; ванкомицин — 100 мг; нистатин — 50 мг; стрептомицин —100 мг; гентамицин — 50 мг; дистилли­рованная вода — 1000 мл. При помощи КОН устанавливают рН 7,0 и сте­рилизуют фильтрацией. Среду разливают по 4 мл во флаконы и хранят при -20° С. В этой среде хламидий остаются жизнеспособными при комнатной температуре до 30 дней, при 4° С — до 34 дней. Для таких же целей мож­но использовать среду 199 с 5% фетальной сыворотки крови крупного рогатого скота или сахарозо-фосфатный буферный раствор с фетальной сывороткой (5-10%), с добавлением стрептомицина (100-200 мкг/мл), нистатина (25 мкг/мл), канамицина (100 мкг/мл). Возможна иная комби­нация антибиотиков: гентамицин — 20 мкг/мл, нистатин — 25 мкг/мл, ван комицин —100 мкг/мл. Реакцию сред устанавливают 7,0-7,1. Сахарозо-фосфатный буфер готовят по следующей прописи: 1-й раствор содержит 68,46 г сахарозы в 100 мл дистиллированной воды, 2-й раствор — 2,088 г безводной соли К₂НР0₄ в 60 мл дистиллированной воды, 3-й раствор — 1,088 г безводной соли КН₂Р0₄ в 40 мл дистиллированной воды. Все три раствора объединяют, доводят объем дистиллированной водой до 1000 мл, соляной кислотой доводят рН до 7,0-7,1, стерилизуют при 115° С в тече­ние 15 минут, хранят при 4° С.

Для серологических исследований берут с интервалом в две недели пар­ные пробы крови от клинически больных или подозрительных по заболева­нию животных.