Питательные среды такие же как и при лабораторной диагностике актинобациллезной пневмонии свиней.

Лабораторная диагностика гемофилеза кур

Гемофилез кур (инфекционный насморк, кориза) — инфекционная болезнь, характеризующаяся катаральным воспалением слизистых оболочек носовой полости, подглазных синусов, конъюнктивы. Часто наблюдается смешанное течение гемофилеза и микоплазмоза. Восприимчивы куры всех возрастов, но наиболее — 1-16-недельного возраста, 3-5-дневные цыплята устойчивы. Возбудитель — бак­терия Haemophilus paragallinarum, род Haemophilus, семейство Pasteurellaceae. Лабораторная диагностика основана на результатах бак­териологического исследования.

Бактериологическое исследование

Стерильным ватным тампоном собирают слизь и экссудат из полостей сину­сов, пробы экссудата из трахеи и воздухоносных мешков. Материал берут от 2-3 кур, не подвергавшихся лечению антибиотиками, на стадии остро­го течения (1-2-е сутки проявления клинических признаков). Материал транспортируют в термосе со льдом.

Микроскопическое исследование исходного материала

Из проб материала готовят мазки, окрашивают по методу Грама и одним из методов для выявления капсулы. В мазках из исследуемого материала H.paragailinarum имеет форму небольших, нередко коккоподобных грамотрицательных палочек, окруженных капсулой.

Выделение и идентификация культуры возбудителя

Культивирование. Возбудитель — факультативный анаэроб, температурный оптимум 37-38°С, рН 7,2-7,6, проявляет потребность при культивировании в NAD, сыворотке крови (лучше использовать куриную сыворотку), повышенном содержании СО₂ в атмосфере.

Исследуемый материал высевают на 10%-ный кровяной агар в чаш­ках Петри (кровь овцы, кролика, курицы, крупного рогатого скота) с последующим посевом «культуры-баккормилки» (стафилококк, кишечная палочка). Можно использовать кровяной агар Левинталя, сывороточно-дрожжевой агар. Поскольку материал обычно контаминирован сопутствующей микрофлорой, целесообразно применять селективные пи-тательные среды. Посевы инкубируют при 37-38° С в течение 24-48 часов в эксикаторах в атмосфере 10% СО₂.

На кровяном агаре с «баккормилкой» возбудитель формирует вокруг штриха питающей культуры мельчайшие сателлитные, негемолитические колонии. На «шоколадном агаре», агаре Левинталя и сывороточно-дрож-жевом агаре через 48 часов культивирования возбудитель формирует круг­лые, выпуклые, с гладкой поверхностью, полупрозрачные, сероватые, диа­метром до 1 мм колонии. В жидких питательных средах возбудитель растет со слабым равномерным помутнением питательной среды.

Морфология клеток возбудителя в культуре. В мазках из подозрительных колоний, бульонных культур клетки H.paragailinarum имеют форму коккобактерии, полиморфных палочек, нитей, грамотрицательные, жгутиков нет. При окраске по методу Гинса или другими методами обнаруживается капсула.

Идентификация H.paragailinarum на уровне рода и вида. Для отнесения выделенной культуры к роду Haemophilus используют те же критерии, что и для Н. parasuis. Основную сложность в процессе идентификации представляет дифференциация Н. paragallinarum и Pasteurella avium (прежнее наименование Haemophilus avium). P. avium no морфологическим, тинкториальным, культуральным признакам сходна с Н. paragallinarum и также зависит от V-фактора.

С целью дифференциации двух указанных видов бактерий у выделен­ных культур исследуют зависимость роста от наличия сыворотки крови, образование пигмента, способность синтезировать каталазу, фосфатазу, расщеплять трегалозу, галактозу, мальтозу, маннит, сорбит, сахарозу, па-тогенность для кур (см. табл. 75).

Таблица 75 - Дифференциальные признаки H. paragallinarum и P. avium

Признаки	Н. paragallinarum	P.avium
Потребность в NAD	+	D
Каталаза	_ -	+ 1)
Фосфатаза	+	-
Потребность в сыворотке крови	+	—
Интенсивность роста на питательных средах	скудный рост	интенсивный рост
Образование пигмента (чаще желтого)	-	+
Образование кислоты из: Д-маннита Д-галактозы2) мальтозы Д-сорбита сахарозы трегалоза	+ - + + + -	- +(медленно) - - - +
Патогенность для кур	+	-

d— 21 -79% штаммов положительные.

^1)- слабая реакция.

²⁾-для роста возбудителя необходимо добавлять в средуNAD(10 мкг/мл)

или дрожжевой экстракт (10%).

От других видов пастерелл H.paragallinarum легко отличить по потреб­ности в NAD. Этот признак исследуют посевом культуры на сывороточный или кровяной агар с последующим высевом «баккормилки» или нанесени­ем на поверхность питательной среды бумажного диска, пропитанного NAD (10 мг/мл). Через 24 часа инкубирования сателлитный рост дают только культуры Н. paragallinarum и P. avium, остальные пастереллы и другие родные виды бактерий растут с одинаковой интенсивностью по всей по­верхности питательной среды (NAD-зависимость отсутствует).

Серологическая идентификация Н. paragallinarum

Вид антигенно неоднороден, подразделяется в РА на ряд сероваров. Биопромышленность РФ соответствующие диагностические сыворотки не выпускает.

Биопроба. Применяют для определения патогенных свойств выделенной культуры NAD-зависимых бактерий. Культуру выращивают в желточном мешке 6-7-дневных развивающихся куриных эмбрионов или на оптимальной плот­ной питательной среде. Биопробу проводят на 2-3 клинически здоровых wpax восприимчивого возраста. Содержимое желточного мешка вводят курам интраназально в дозе 0,1-0,2 мл. Клинические признаки болезни Выявляются через 24-48 часов, но иногда инкубационный период составляет 6-7 суток.

Питательные среды такие как и при лабораторной диагностике актинобациллезной пневмонии свиней.

Лабораторная диагностика актинобациллезной пневмонии свиней

Актинобациллезная пневмония свиней - инфекционная болезнь свиней преимущественно двух-трехмесячного возраста и откормочных животных, характеризуется развитием фибринозногеморрагической некротизирующей пневмонии и фибринозного плеврита. Возбудитель — грамотрицательная бактерия Actinobacillus pleuropneumoniae, относящаяся к роду Actinobacillus, семейства Pasteurellaceae.

Лабораторная диагностика основывается на результатах бактериоло­гического исследования. Серологические реакции используют как Методы групповой диагностики для оценки эпизотической ситуации.

Бактериологическое исследование

Для исследования стерильно отбирают фрагменты пораженной легочной ткани на гра­нице с нормальной тканью, а также средостенные лимфатические узлы, экссудат из грудной полости, пораженную легочную плевру Материал транспортируют в термосе со льдом или в замороженном виде.

Микроскопическое исследование исходного материала

Мазки из материала окрашивают по Граму и одним из методов для выявле­ния капсул. В положительных случаях в препарате обнаруживают корот­кие, вплоть до кокковидных, грамотрицательные палочки с закругленны­ми концами, чаще располагающиеся парно, единично, реже — в виде ко­ротких цепочек, обладают капсулой. Типичные по морфологии коккобактерии имеют средние размеры 0,3-0,4 х 0,4-0,5 мкм.