Питательные среды

Триптический соевый кровяной агар со спектомицином. Соевую муку смешивают с дистиллированной водой в соотношении 1:3 и, помешивая, кипятят в течение 15-20 минут. Остужают до 40°С, при помощи 20%-ного едкого натра доводят рН до 8,0, вносят фарш поджелу­дочной железы крупного рогатого скота (10%) и 2% хлороформа (объем/ объем). Емкость закрывают резиновой пробкой, перемешивают через 0,5-1-2 часа и далее ежедневно в течение 3-4 дней. Контролируют рН и под­держивают его на уровне 7,8-8,0. Через три недели (после формирования осадка) определяют содержание аминного азота, устанавливают добавле­нием дистиллированной воды его уровень 140-160 мг%, доводят рН до 7,2-7,4, вносят 1% пептона, 0,5% натрия хлорида, 0,25% глюкозы. Смесь кипятят 2-3 минуты, фильтруют, добавляют 2% агара. Затем емкости с питательной средой переносят в герметический настольный бокс, в течение Пяти минут через среду пропускают свободный от кислорода СО₂ или азот, вносят в среду 0,05% солянокислого L-цистеина, раствором бикарбоната натрия (5%) устанавливают рН на уровне 7,2-7,4. Флаконы со средой закрывают пробками из силиконовой резины и стерилизуют при 110°С в течение 30 минут. Перед использованием среду расплавляют, переносят в настольный бокс, пропускают через нее стерильный СО₂ или азот, после остывания агара до 42-45°С в него вносят спектиномицин (400 мкг/мл), 10% дефибринированной крови барана, разливают по чашкам Петри и ос-танляют в боксе до застывания. Слой агара в чашках должен быть толщи­ной около 0,5 см.

Кровяной агар со спектомицином на основе перевара Хоттингера

К перевару Хоттингера добавляют 0,001% резазурина (индикатор ОКВП), 0,5% натрия хлорида, 0,25% глюкозы, 1% пептона, 2% агара, кипятят, пропуская через среду азот или углекислый газ в течение 10-15 минут, устанавливают рН 7,0-7,2, вносят 0,05% солянокислого цистеина, автоклавируют при 110°С в течение 30 минут, охлаждают до 42-45°С, пропуская при этом через среду обескислороженный газ, вносят 10% стерильной дефибринированной крови барана (КРС) и 400 мкг/мл спенто-мкцниа. Среду разливают по культуральным сосудам в атмосфере СО₂ (см. выше).

Среда RGCA-SC (Holdeman L.V. et al., 1977). Глюкоза — 0,0248 г, целлобиоза — 0,0248 г, растворимый крахмал — 0,05 г, (NH₄)₂S0₄ — 0,1 г, раствор резазурина (0,025%) — 0,4 мл, дистил­лированная вода — 20 мл, раствор солей — 50 мл, рубцовая жидкость (Randolph, Bidogicals, Houston, Тех) — 0,05 г, раствор гемина (2) — 1 мл, раствор витамина К — 0,02 мл.

Среду разливают по 10 мл в пробирки, содержащие 0,2 г агара, и авто-клавируют. На последнем этапе среду в двух пробирках расплавляют, ох­лаждают до 50° С и добавляют в каждую из них следующие компоненты: стерильную, инактивированную (60° С, 4 часа) сыворотку крови кроли­ка — 1,5 мл; раствор кокарбоксилазы (тиаминпирофосфата 0,025%), сте­рилизованный фильтрованием — 0,2 мл; стерильный, предварительно вос­становленный бульон PY — 2,0 мл. Компоненты перемешивают и содержи­мое обеих пробирок выливают в чашку Петри. Среду хранят в анаэростате либо используют немедленно.

Для поддержания серпулин в лабораторных условиях используют сре­ды без селективных добавок. Применяют для этой цели кровяной агар со спектиномицином на основе перевара Хоттингера, триптиказо-соевого агара. Например, кровяной агар Хоттингера готовят следующим об­разом: к перевару Хоттингера добавляют 0,001% резазурина (индика­тор ОКВП), 0,5% натрия хлорида, 0,25% глюкозы, 1% пептона, 2% ага­ра, кипятят, пропускают через среду азот или углекислый газ в течение 10-15 минут, устанавливают рН 7,0-7,2, вносят 0,05% цистеина гид­рохлорида; автоклавируют при 110°С в течение 30 минут, охлаждают до 40-45°С, пропуская при этом через среду обескислороженный газ, после чего вносят 10% дефибринированной стерильной крови барана (КРС) и 400 мкг/мл спектомицина. Среду разливают в атмосфере угле­кислого газа.

Лабораторная диагностика кампилобактериозов

Кампилобактерии представляют собой грамотрицательные извитые бакте­рии, которые объединены в род Campylobacter, включающий 15 видов. Эко­логия и патогенные свойства видов, представляющих интерес для ветери­нарных бактериологов, представлены в таблице 87.

Лабораторная диагностика кампилобактериозов основана на резуль­татах бактериологического исследования. При генитальном кампилобак-териозе крупного рогатого скота дополняется данными по обнаружению секреторных антител во влагалищной слизи, у овец применяют как метод серологической диагностики пробирочную РА.

Бактериологическое исследование

Для диагностики генитального кампилобактериоза при бесплодии крупного рогатого скота берут слизь из шейки матки от 10-20 животных стада, препуциальные смывы у быков. Слизь получают с помощью полистироловых пипеток, соединенных со шприцом, или стерильным марлевым тампоном при помощи инструментов Жабоедова или Павловского.

Тампоны со слизью помещают в пробирки с 3-5 мл стерильного физиологического раствора. Если нет возможности произвести посевы материа­ла на месте, непосредственно после взятия, то его доставляют в лаборато­рию в термосе со льдом не позднее 6 часов.

Для получения смывов с препуция и транспортировки целесообразно использовать тиогликолатный бульон, транспортные среды.

При абортах крупного рогатого скота и овец (С. fetus subsp. fetus, С. jejuni) в лабораторию направляют абортированный плод, плодовые оболочки, плаценту (часть плаценты). От крупного плода берут желудок, голову, легкие, печень. При непригодности указанных материалов для иссле­дования направляют цервикальную слизь, взятую в первые 4 дня после аборта. В холодное время года плоды рекомендуется замораживать.

При подозрении на кампилобактериоз от коров и половозрелых телок в период полового покоя берут пробы влагалищной слизи для серологической диагностики при помощи следующего устройства. Используют стеклянную трубку с полированными концами длиной 40 см и диаметром 1-1,4 см. Через трубку пропускают прочную нитку. Один ее конец привязывают к марлевому тампону из куска марли размером 10х10 см, тампон втягивают внутрь цилиндра, концы которого и всю трубку в целом обертывают бумагой и сте­рилизуют в автоклаве (30 минут, 1 атм). Наружную часть половых органов промывают водой. Трубку освобождают от бумаги, вводят во влагалище до упора, металлическим стержнем выталкивают тампон, удаляют стержень и трубку, оставляя на 40-60 минут во влагалище тампон. По истечении указанного срока тампон за нитку извлекают и помещают в пробирку с 5 мл формалинизированного (0,3%) раствора натрия хлорида (3%). Пробирку зак­рывают резиновой пробкой, транспортируют в лабораторию. При задержке до 24 часов пробы лучше хранить и транспортировать в термосе со льдом.

Для диагностики кишечных кампилобактериозов при диареях животных, предположительно кампилобактериозной этиологии (С. jejuni и другие виды), для исследования берут фекалии, содержимое кишечника с помощью ректальных тампонов.

Таблица 90 - Экология и патогенные свойства кампилобактерий

Вид кампилобактерий	Хозяин	Патогенные свойства
1	2	3
С. fetus subsp. venerealis (син. Vibrio fetus sb. venerealis)	Крупный рогатый скот. Обитает в препуции клинически здоровых быков.	Вызывает генитальный кампилобактериоз крупного рогатого скота (энзоотический аборт). Возбудитель передается половым путем, при искусственном осеменении, у не иммунных коров вызывает катараль­ный и гнойный метрит, гибель эмбрионов в 2-4-недельном возрасте. На более поздней стадии развития плода аборты не характерны.
C. fetus subsp. fetus (син. С. fetus sb. intestinalis, Vibrio fetus sb. intestinalis)	Овцы. Комменсал кишечного тракта.	Возбудитель генитального кампилобактериоза овец, передается ораль­но-фекальным путем. Источником возбудителя являются животные-носители. Проявляется абортами во второй половине суягности.
	Крупный рогатый скот. Комменсал кишечного тракта.	Возбудитель спорадических абортов. Передается в основном орально-фекальным путем.
	Человек	Вид редко встречающийся при патологии.
C.jejuni(син. С.fetussb.jejuni,V.jejuni).	Является комменсалом кишечного тракта домашних, диких животных и птицы. По серотипам, за исключением людей, у этого вида хозяино-специфических антигенов нет.	Вызывает у животных энтерит с медленным мягким течением, у мо­лодняка более выражен. Клинически проявляется у собак, кошек, телят обычно до 14-дневного возраста. У овец, свиней и лошадей наблюдают энтериты этой этиологии реже, куры обычно не болеют. У овец и коз может вызвать спорадические аборты, у коров - маститы. У птицы яв­ляется причиной вибрионного гепатита. Возбудитель передается орально-фекальным путем. Является возбудителем острой кишечной инфекции у человека.
С. mucosalisС.hyointestinalis	Основной хозяин - свинья. Обитают в кишечном тракте здоровых свиней.	Возбудители кишечного аденоматоза у поросят 6-20-недельного возраста: пролиферация эпителия илеоцекума, одновременно развивается некротизирующий энтерит. Кампилобактерий лока­лизуются интрацеллюлярно, поэтому фекалии для лабораторно­го исследования брать нецелесообразно.
С. coli (син.V. jejuni /коли виб­рион).	Свиньи, человек	Комменсал кишечного тракта свиней. Может быть причиной легких диарей у свиней и энтеритов у человека. Нередко ассо­циируется с патологией, вызываемой у свиней S. hyodysenteriae.
С. sputorum биовар bubulus	Крупный рогатый скот	Комменсал генитального тракта коров и препуция быков, рас­сматривается как непатогенный вид.
С. sputorumбиоварfaecalis	Овцы, крупный рогатый скот	Обнаруживают в кишечном тракте, выделяют из вагины и спер­мы крупного рогатого скота. Рассматривается как непатогенный вид.
С. sputorum биовар sputorum	Человек	Комменсал ротовой полости. Рассматривают как непатогенный вид.
С. lari	Собаки, лошади, свиньи	Выделяют из фекалий. Патогенные свойства неизвестны.
С. upsaliensis	Собаки, человек	Изолируют от клинически здоровых особей и с симптомами диареи. Патогенные свойства неизвестны.
С. cryaerophila	Крупный рогатый скот, овцы, лошади	Выделяют из кишечного тракта здоровых животных, иногда из абортированных плодов.

Для транспортировки и хранения материала целесообразно применять среду Кэрри-Блер или ее модификационный вариант с добавлением эритрит агара. Готовую среду разливают высоким столбиком (почти до пробки) в цент­рифужные пробирки, стерилизуют, пробки пропитывают расплавленным парафином, хранят при комнатной температуре. Кампилобактерии в фекалиях, помещенных в среду, через двое суток сохраняют жизнеспо­собность при 4°С в 100% проб. В случае аденоматозного комплекса у свиней (С. mucosalis, С. hyointestinalis) берут участки пораженного кишечника. Фекалии для исследования не используют.

Для диагностики вибрионного гепатита (С. jejuni) в лабораторию на­правляют печень.