Серологическая диагностика

Антитела выявляются в серологических реакциях через 2-3 недели пос­ле заражения. Для этого используют РСК, ELIS А, РА. В соответствии с «Методическими указаниями по серологической диаг­ностике лихорадки Ку животных» (1996) в РФ используют реакцию дли­тельного связывания комплемента, ИФА, РСК.

Реакция связывания комплемента. В РСК применяют антиген из I фазы C.burneti. Исследуемые сыворотки крови разводят 1:10, инактивируют в водяной бане при 56-58° С в течение 30 мин. Контрольную позитивную сыворотку не инактивируют. Средой раз­ведения служит 0,85%-ный раствор натрия хлорида (рН 7,0-7,4). Берут 2%-ную взвесь эритроцитов барана, гемолизин в удвоенном титре. Комплемент разводят 1:10 и титруют в разведениях 1:20, 1:25, 1:30, 1:35, 1:40, 1:50, 1:60, в присутствии антигена в рабочем разведении при общем объеме компонен­тов 0,5 мл. В опыт берут комплемент в удвоенном титре. Испытуемые и кон­трольную негативную сыворотки исследуют в разведении 1:10 (с антигеном и без него), контрольную позитивную — в разведениях с 1:10 до предельного титра. Остальные контроли проводят как обычно при РСК. Первая фаза РДСК длится 18-20 часов при 4-6° С и 20 минут при комнатной температу­ре, вторая фаза — 30 минут в водяной бане при 37-38° С. Результаты реак­ции учитывают через 18-20 часов выдерживания пробирок при 4-6° С при условии задержки гемолиза в контроле с позитивной сывороткой до ее пре­дельного титра и при полном гемолизе с негативной сывороткой.

Результат реакции оценивают как положительный при задержке гемо­лиза с испытуемой сывороткой (1:10) на 3-4 креста, сомнительный — задержка гемолиза на 1-2 креста. При сомнительных результатах сыво­ротку крови от таких животных исследуют повторно через 15-21 день. При повторном получении сомнительного или отрицательного результата животное признают здоровым.

Непрямой вариант ИФА. Используют при сенсибилизации планшет антиген для РДСК из I фазы возбудителя лихорадки Ку. ИФА по чувствительности превосходит РДСК.

Реакция микроагглютинации. При помощи данной реакции выявляют антитела в молоке (индивидуаль­ные пробы, сборное молоко), сыворотке крови. Молоко до исследования хра нят при 4-8°С или консервируют 0,1% формалинa. В качестве антигена при­меняют очищенную суспензию C.burneti в I фазе, окрашенную гематоксили­ном. Реакцию проводят в капиллярах. Капилляр заполняют молоком, затем антигеном (см. «Реакция микропреципитации»), капилляры закрепляют в пла­стилине, инкубируют при 37° С в течение 5 часов или 24 часа при комнатной температуре. В молоке, содержащем агглютинины к возбудителю, слой сли­вок приобретает сине-черный цвет — положительный результат.

Лабораторная диагностика инфекционного гидроперикардита животных

Трансмиссивная, остро протекающая инфекционная болезнь, преимущественно крупного рогатого скота, овец и коз, характеризуется септицемией и лихорадкой, не­рвными явлениями и скоплением экссудата в полости тела и сердечной со­рочке. Распространена в Центральной, Восточной и Южной Африке. Пере­дается через иксодовых клещей рода Аblуоmа, в организме которых сохра­няется до 3 лет. Возбудитель — Cowdria ruminantum, род Cowdria (вид перенесен в род Ehrlichia, семейство Rickettsiaceae). Лабораторная диагностика основывается на результатах бактериоскопического исследования мазков из материала и данных биопробы.

Бактериологическое исследование

Прижизненно для постановки биопробы берут стерильно и дефибринируют кровь через 2-4 дня после начала лихорадки. Возбудитель отличается низ­кой устойчивостью, выживает при комнатной температуре не более пяти часов, при -70° С — до двух лет. Одним из вариантов сохранения возбуди­теля до постановки биопробы является введение интраперитонеально мате­риала мышам, в организме которых возбудитель сохраняется достаточно долго (30 суток) без признаков заболевания мышей. Посмертно объектом исследования являются крупные сосуды (аорта, яремная вена), в эндотелии которых наиболее часто обнаруживается возбудитель, а также серое вещество головного мозга, почки, в капиллярах которых также присут­ствуют риккетсии. Возбудитель может быть обнаружен у клещей.

Микроскопическое исследование исходного материала. Из нескольких мест интимы яремной вены, аорты делают соскобы, готовят мазки. Также готовят гистосрезы из почек, коры мозга (аммоновых рогов). Рекомендуется готовить мазки — отпечатки из кусочков ткани мозга путем раздавливания между предметными стеклами. У клещей исследуют эпите­лий кишечника. Препараты фиксируют метанолом, окрашивают по Романовскому-Гимза. Возбудитель локализуется в вакуолях цитоплазмы кле­ток эндотелия, имеет коккоидную (0,3 мкм), палочковидную (0,3 х 0,5 мкм) или диплококковую форму, цвет клеток от синего до пурпурного. Для выявления возбудителя используют РИФ и ПЦР.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Возбудитель удается культивировать в перевиваемой линии клеток эндоте­лия сосудов теленка, где его выявляют микроскопически, в РИФ и ПЦР.

Биопроба. Проводят на овцах, иммунных к вирусной лихорадке овец, так как вирус может помешать интерпретации результатов. Заражение осуществляют внут­ривенно. Инкубационный период составляет около 11 дней. Животных уби­вают через 2-4 дня после появления лихорадки и исследуют на наличие возбудителя. При доставке в лабораторию мышей, инокулированных в полевых условиях, их убивают через 4-21 день, селезенку растирают в бульоне и вводят внутривенно овцам. Биопробу можно проводить на мышах с учетом результата по сероконверсии.

Серологическая диагностика

Серологическая диагностика из-за малой специфичности (ЭЛИЗА) малоэф­фективна.

Лабораторная диагностика эрлихиозов

Возбудители эрлихиозов относятся к семейству Rickettsiaceae, трибе Ehrlichiae, роду Ehrlichiae. Эрлихии не патогенны для человека, вызывают заболевания животных, некоторые из них приспособились к обитанию в организме членистоногих, для других представите­лей векторы не установлены. На бесклеточных питательных средах и кури­ных эмбрионах эрлихии культивировать не удается, лабораторные живот­ные устойчивы. Наиболее значимы в патологии животных следующие виды эрлихии: Ehrlichia phagocytophila (вид перенесен в род Anaplasma) — вы­зывает лихорадочное заболевание крупного рогатого скота (клещевая ли­хорадка), овец и диких животных, вектор Ixodes ricinus, заболевание мо жет сопровождаться абортами, снижением удоев, животные худеют; Ehrlichia equi — возбудитель лошадиного эрлихиоза, распрост­ранен в основном в США, вектор не известен, болезнь проявляется лихо­радкой, отеками конечностей; Ehrlichia canis — возбу­дитель тропического риккетсиоза собак (тропическая панцитопения собак), вектор Rhipicephalus sanguineus. Лабораторная диагностика в основном базируется на результатах микроскопического исследования материала, применяют иммунологические методы диагностики и изоляцию возбудите­ля, а также серодиагностику.