Микроскопическое исследование материала

Мазки фиксируют метанолом, окрашивают по Ромаиовскому-Гимза, Маккиавелло. Возбудитель в окрашенных препаратах имеет кокковидную фор­му или полиморфен (короткие палочки, кольцевидные структуры, иногда сложные колонии), локализуется в цитоплазме ретикулярных клеток лимфоидных тканей; по Ромаиовскому-Гимза окрашивается в голубой, Маккиавелло — голубой и розовый цвета. В циркулирующих лимфоцитах воз­будитель не выявляется, хотя кровь инфекционна.

Биопроба. На собаках путем заражения кровью или тканью селезенки можно прово­дить серийные пассажи возбудителя. Инкубационный период 6-12 дней. Серологическая диагностика

Используют РСК с антигеном из мезентериальных лимфатических узлов. Возможны перекрестные реакции с антителами против Е. canis, E. risticii и Е. sennetsu.

Лабораторная диагностика анаплазмоза крупного и мелкого рогатого скота

Анаплазмоз проявляется лихорадкой непостоянного типа, снижением удо­ев у лактирующих животных, анемией, истощением. Poд Anaplasma содержит четыре вида: A.marginale — возбудитель анаплазмоза крупного рога­того скота, восприимчивы другие виды животных; A.centrale — возбуди­тель легкой формы анаплазмоза крупного рогатого скота; A.ovis — возбу­дитель анаплазмоза овец и коз, может вызывать анаплазмоз в легкой форме у крупного рогатого скота. Род дополнен видами A phagocytophilum и А. platum, ранее отнесенным к эрлихиям. A.cuaditum — обуславливает забо­левание крупного рогатого скота. Ни один из перечисленных видов куль­тивировать на питательных средах не удалось. Лабораторная диагностика основана на результатах микроскопического исследования, идентифика­ции возбудителя методом флуоресцирующих антител, данных серологичес­ких исследований.

Бактериологическое исследование

Объектом исследования является кровь больных и подозрительных по забо­леванию животных.

Микроскопическое исследование материала

Мазки фиксируют метанолом (3-5 минут) или этанолом (20-25 минут), окрашивают по методу Романовского-Гимза (краска Гимзы 1-2 капли на 1 мл нейтральной или слабощелочной воды). Анаплазмы в основном располагаются по перефирии эритроцита, имеют округлую точковидную форму (0,2-1,2 мкм), темно-красный цвет. При внедрении возбудителя в эритроцит цитоплазматическая мембрана выпячивается внутрь, образу­ется вакуоль, в которой клетка возбудителя делится и формируется вклю­чение размером 0,3-0,4 мкм. Образование включений совпадает с ост­рой стадией болезни и периодом реконвалесценции (Приложение № 1 к «Инструкции по борьбе с анаплазмозом крупного и мелкого рогатого скота», 1970). Критерии дифференциации анаплазм от эпиритрозоонов, пироплазм, бабезий и тейлерий представлены в таблице 97. Для выявления анаплазм может быть использован метод прямого флуорохромирования акридиновым оранжевым, а при наличии антисыворо­ток — метод флуоресцирующих антител. При сомнительных результатах микроскопического исследования прибегают к серологическим методам диагностики.

Серологическая диагностика

Наличие анаплазмозного антигена позволяет для целей серологической ди­агностики анаплазмоза применять непрямой метод флуоресцирующих антител, РСК. В соответствии с утвержденной «Методикой постановки РСК для диагностики анаплазмоза крупного и мелкого рогатого скота» (1971) сыворотки крови, разведенные 1:5, включая контрольные позитивную и негативную, инактивируют при 58-60°С в течение 30 минут. Сыворотки крови при исследовании разводят от 1:5 до 1:1280. Эритроциты использу­ют в виде 2%-ной взвеси, гемолизин в тройном титре. Антигены из A.marginale готовит ВНИИЭВ. Комплемент берут в двойном количестве. РСК ставят в объеме 0,5 мл. Первую фазу РСК проводят при 37°С в течение 60 минут, вторую фазу — 20 минут. Задержку гемолиза на два креста и более считают положительным результатом РСК. Любой титр антител счи­тается диагностическим, титрование сывороток позволяет сделать заклю­чение о стадии носительства (титр до 1:40) или переболевания (более 1:40, вплоть до 1:1280).

Лабораторная диагностика эперитрозооноза

Из представителей рода Eperytrozoon в патологии животных важное значение имеют сле­дующие виды: E.ovis — вызывает у ягнят 2-10-месячного возраста забо­левание с выраженными клиническими симптомами, анемию, потерю веса; E.suis — возбудитель свиного эперитрозооноза, обычно протекающего субклинически, однако возможна анемия, эмбриональная смертность и абор­ты. Ни один вид эперитрозоонов на бесклеточных питательных средах куль­тивировать не удается. Лабораторная диагностика основана на результа­тах микроскопического и серологического исследований. В РФ регистрируется эперитрозооноз овец.

Бактериологическое исследование

От убитого или павшего животного (овцы) в лабораторию направляют ку­сочки селезенки, печени, лимфатических узлов, мазки крови.

(«Методические указания по лабораторным исследованиям на эперит­розооноз овец», 1985).