Выделение и идентификация культур возбудителей

Культивирование. Материал, взятый при респираторной патологии, в максимально сжатые сроки после поступления высевают на плотные среды Фрисс и Хейфлик. Па­раллельно материал засевают на аналогичные жидкие питательные среды. Материал, взятый тампонами, а также трахеальные и бронхиальные смывы засевают в бульон в трех разведениях (10¹ -10³), легочный гомогенат раз­водят до 10⁹. Посевы инкубируют при 37° С в СО₂-инкубаторах при высокой влажности. Бульонные посевы через 2-3 дня культивирования высевают на агаровые среды с последующей отвивкой выросших колоний на жидкие сре­ды. М. dispar лучше растет на жидких средах, при изоляции этого вида микоплазм до высева на плотные среды целесообразно провести несколько пас­сажей на жидких средах. У больных животных в материале доминируют па­тогенные микоплазмы, у здоровых животных преобладает смешанная микоплазменная микрофлора.

Материал, взятый из репродуктивных органов для изоляции уреаплазм, высевают на уреаплазменный агар и бульон. Крупные кусочки тканей об­жигают в спирте, разрезают и засевают штрихом на агаровую среду, мел­кие измельчают в нескольких миллилитрах бульона, оставляют на 5 минут, затем из надосадочной жидкости делают пять десятикратных разведений и засевают на агаровую среду. Из материала, взятого тампонами, делают 5-7 десятикратных разведений, которые высевают на уреаплазменный агар и бульон. Часть посевов инкубируют при 37°С в аэробных, другую — в анаэробных условиях в атмосфере Н₂ и СО₂. Наличие роста уреаплазм в бульоне устанавливают по защелочению рН в течение 1-7 суток инкуби­рования, при наличии которого производят высевы на агаровую среду. Следует иметь в виду, что защелочение среды может быть вызвано не толь­ко уреаплазмами. Посевы на агаре исследуют на наличие колоний в тече­ние 2-10 суток инкубирования.

При исследовании на микоплазмозные маститы образцы молока лучше высевать на агаровую среду Хейфлик.

Идентификация культур микоплазм

При идентификации микоплазм, выделенных из респираторных орга­нов, как экспресс-метод используют метод эпифлуоресценции с колониями в первичных посевах на агаровой среде или из разведений, высеянных на агар из бульона. После получения чистых культур путем трехкратного кло­нирования колоний идентификацию осуществляют на основании изучения ферментативных характеристик, чувствительности к дигитонину, а также при помощи серологических методов. Для дифференциации представите­лей родов Mycoplasma, Ureaplasma и Acholeplasma исследуют чувствитель­ность к дигитонину и наличие уреазы. Дальнейшее исследование фермен­тативной активности и культуральных признаков позволяет провести ви­довую идентификацию основных микоплазм (табл. 94).

Чистые культуры микоплазм, при наличии соответствующих антисы­вороток, могут быть идентифицированы методом флуоресцирующих ан­тител, в тесте ингибиции роста. Имеются сообщения об идентификации М. bovis в подимеразной цепной реакции, а также обнаружении и иденти­фикации микоплазм в гистосрезах легочной ткани методом флуоресциру­ющих антител.

Лабораторная диагностика микоплазмозов мелкого рогатого скота

В патологии овец и коз играют роль ряд видов рода Mycoplasma, а также при исследовании могут быть выделены некоторые представители родов Acholeplasma и Ureaplasma.

М. agalactiae является возбудителем контагиозного заболевания овец и коз — инфекционной агалактии, характеризующегося поражением молоч­ной железы, суставов и глаз.

М. mycoides subsp. capri является специфическим патогеном для коз, вы­бывает септицемию, артриты, маститы, может быть изолирован из легких при пневмониях. Данный вид микоплазм рассматривается как возбудитель кон­тагиозной плевропневмонии, но поскольку в экспериментальных условиях он проявляет низкую вирулентность, то, по мнению некоторых авторов, не может быть признан причиной классической контагиозной плевропневмонии коз.

Микоплазмы таксона F-38 в настоящее время рассматривают как ис­тинного возбудителя классической плевропневмонии коз, они отличают­ся от М. mycoides subsp. carpi, M. capricolum, M. mycoides subsp. mycoides типа LC большей требовательностью к питательным средам и антигенны­ми характеристиками. М. mycoides subsp. mycoides типа LC вызывает септицемию и полиартриты у молодняка коз, иногда пневмонию. У взрослых коз вызывает маститы, инфицированное молоко которых является причиной септицемии козлят. Микоплазмы типа LC часто выделяют из легких и плеврального экссуда­та животных с поражениями, напоминающими контагиозную плевропнев­монию коз. М. capricolum патогенна для овец и коз, вызывает заболева­ние, сходное с агалактийным синдромом и септицемическим заболевани­ем, обусловленным микоплазмами типа LC. M. ovipneumoniae патогенна для овец, вызывает в ассоциации с P. haemolytica пролиферативную экссудативную пневмонию. М. putrefaciens ассоциируется с маститами и агалактией коз, инфекция может также проявляться артритами, септицемией. М. conjunctivae известна как возбудитель инфекционного кератоконъюнктивита овец и коз. Микоплазмы таксона 2Дизолируют из генитального тракта овец с репродуктивными расстройствами, вульвовагинитами. Патогенность М. arginini, микоплазм таксонов G, U, V для овец и коз не установлена. A. oculi считается возбудителем кератоконъюнктивита коз. Уреаплазмы выделяют из урогенитального и репродуктивного трактов овец и коз, их роль в патологии не ясна.

Лабораторная диагностика микоплазмозов мелкого рогатого скота ос­нована на результатах бактериологического и серологического исследо­ваний.

Бактериологическое исследование

При подозрении на инфекции М. agalactiae, M. capricolum для исследова­ния берут пробы молока, синовиальную жидкость. От павших и убитых животных отбирают часть печени, селезенку, почку, регионарные лимфа­тические узлы, пораженную часть вымени, суставную жидкость, поражен­ный глаз. Пробы молока отбирают асептически, после сдаивания первых порций молока. Синовиальную жидкость получают путем пункции сустава при помощи стерильного шприца.

При поражении органов дыхания в лабораторию направляют части легких, экссудат грудной полости, регионарные легким лимфатичес­кие узлы, части печени, селезенки, пораженные глаза, пробы молока.

Во всех случаях при поражениях репродуктивного тракта берут пробы вагинальной слизи, органов зрения — конъюнктивальную жидкость.

Материал доставляют в лабораторию в термосе со льдом или в замо­роженном виде. В последнем случае допускается хранение материала в течение нескольких суток («Методические указания по лабораторной диагностике инфекционной агалактии овец и коз», 1984; «Методические указания по лабораторной диагностике инфекционной плевропневмонии коз», 1984).