Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:

Сборник трудов областной научной конференции Молодые ученые – Кузбассу. Взгляд в XXI век. Медико-биологические науки

.pdf
Скачиваний:
0
Добавлен:
08.09.2026
Размер:
2 Мб
Скачать
"Молодые ученые – Кузбассу"
Медико-биологические науки
141
земель для Кузбасса особенно актуален, так как обеспеченность одного жителя Кемеровской области земельными ресурсами ниже среднего уровня по России.
Также остро стоит проблема радиоактивного загрязнения территории Кузбасса. С 1949-1986 годы на Семипалатинском полигоне было проведено не менее 350 атмосферных ядерных испытаний. Они серьезно изменили радиационную обстановку на территории Кемеровской области. В 1949 году после взрыва первой атомной бомбы её радиационное воздействие захватило юг Кузбасса до Белова. Доза облучения в Кемеровской области составила 7 бэр (предел 0,5 бэр в год). Кроме Семипалатинска есть ещё источники радиоактивного загрязнения; например, в 1984 году в Чебулинском районе по заказу МинГео СССР был произведен подземный ядерный взрыв, цели и задачи которого до сих пор не известны.
Промышленность по утилизации и переработке отходов в области находится в зачаточном состоянии. Полностью не решена проблема утилизации изношенных автомобильных покрышек. Переход населения на продукты питания, упакованные соответствующим образом, привел к повышению количества твердых бытовых отходов. Отсутствие не только заводов по переработке и утилизации бытового мусора, но даже хотя бы одного нормально обустроенного полигона по захоронению привело к тому, что населенные пункты замыкаются в кольцо санкционированных и несанкционированных свалок и отвалов.
С 1980 по 1991 годы в целях улучшения экологической ситуации в Кузбассе было принято более 100 постановлений на различных уровнях. В 1992 году в Кузбассе была проведена государственная экологическая экспертиза. По поручению правительства РФ от 16 марта 1992 года, Минэкологии приказом от 19 октября 1992 года образовало государственную экспертную комиссию, которая и провела государственную экспертизу экологической ситуации в Кузбассе. В заключении было отмечено: «Антропогенная нагрузка на окружающую среду в регионе вышла далеко за пределы экологической емкости территории Кемеровской области и в ряде её районов привела к деградации природы и резкому ухудшению состояния здоровья населения. Это единственный случай наличия столь неблагоприятной экологической обстановки на территории целого региона». Это полностью соответствует признакам зоны экологического бедствия, которые указаны в ст. 59 п. 1 Закона «Об охране окружающей природной среды». Однако комиссия не сочла возможным объявить Кузбасс зоной экологического бедствия, т.к. в законе не указан механизм реализации этого статуса. Экспертная комиссия
142 "Молодые ученые – Кузбассу"
Медико-биологические науки
предложила в качестве главной меры по выводу региона из экологического кризиса лишь длительный процесс модернизации наиболее опасных производств.
В то же время в 1992 году решением коллегии Министерства охраны окружающей среды РФ экологическая ситуация в Кемеровской области была определена как чрезвычайная. В исторически короткие сроки возможности самовосстановления окружающей природной среды и природных ресурсов были истощены. Это было вызвано интенсивной эксплуатацией природных богатств Кузбасса при полном игнорировании интересов окружающей среды и населения, проживающего на территории области. Также наличие большого количества предприятий черной и цветной металлургии, химической и оборонной промышленности, введение в строй энергоемких предприятий и суровый сибирский климат, потребовали строительства многочисленных тепловых энергетических станций и сотни небольших котельных. Это происходило на фоне огромных масштабов лесосводки, в результате чего было уничтожено около 43,2% лесных массивов.
В последние годы возникли новые аспекты загрязнения окружающей среды. Можно выделить её основные компоненты.
1. Загрязнение атмосферного воздуха. В связи с переходом на более дешевые, высокозольные марки углей теплоэнергетических станций и нарушением на них технологии происходит повышенный выброс в атмосферу сернистых соединений, окислов азота, углекислого газа, твердых частиц.
2. Загрязнение поверхностных водоисточников. Возрос объем сбросов неочищенных сточных вод, содержания взвешенных веществ нитратно­нитритной группы. Исследования подземных водоисточников, проведенные в последние годы, показали, что они так же загрязнены фенолами, нитрозоаминами, нитратами и нитритами и другими вредными веществами.
3. Отходы производства и потребления. В связи с реконструкцией угольной промышленности (в короткие сроки было закрыто более 25 нерентабельных угольных предприятий) была не только создана новая экологическая проблема, но и потребовалась интенсивная разработка новых угольных месторождений [7].
В сложившейся экологической ситуации наряду со снижением антропогенной нагрузки на окружающую среду необходимо провести ряд организационных мероприятий, направленных на ужесточение природоохранного законодательства и контроля за его соблюдением. Для Кемеровской области и подобных ей ресурсодобывающих регионов
"Молодые ученые – Кузбассу"
Медико-биологические науки
143
необходима разработка природоохранного Законодательства, с одной стороны, не противоречащего основным принципам охраны окружающей среды в РФ, но с другой стороны учитывающего особенности экологической ситуации в регионе. Необходимо сопровождать каждое действие хозяйствующего субъекта экологической экспертизой, финансово поддерживать и развивать экологические науки, укреплять и развивать системы экологического мониторинга, разрабатывать прогнозы экологической ситуации, поддерживать общественное экологическое движение и развивать систему экологического воспитания и образования подрастающего поколения.
Можно сказать, что сегодня разразилась экологическая катастрофа. Нам предстоит дышать отравленным воздухом, пить зараженную воду, получать повышенные дозы радиации, жить в бетонных коробках, есть ненатуральные продукты и т.д. Эпидемия экологического отравления уже охватила огромные территории и особенно заметна в тех регионах, которые получили название зон экологического бедствия. К сожалению, в таких зонах вырождение и вымирание населения, животного и растительного мира стали в настоящее время реальностью дня.
Сегодня напряженная экологическая обстановка, вызванная загрязнением окружающей среды, отрицательно сказывается на здоровье населения Кемеровской области. Средняя продолжительность жизни (55,4 лет) ежегодно снижается. Хронически болен каждый четвертый взрослый, и каждый шестой ребенок. Только 10% детей после школы здоровы, 40% имеют хронические заболевания.
Демографическая ситуация продолжает характеризоваться сокращением численности населения. Ежегодные потери в Кемеровской области составляют почти 30% всех ежегодных потерь демографического потенциала Западной Сибири, в то время как численность населения Кузбасса составляет лишь немногим более 20% общей численности населения Западной Сибири. Основными причинами смерти являются болезни системы кровообращения (у мужчин – 45,3%, у женщин – 55,0%), травмы, отравления, несчастные случаи (у мужчин 18,9%, у женщин – 1,1%), онкологические заболевания (у мужчин 14,3%, у женщин – 13,3%). На всей территории Сибири сохраняется устойчивая тенденция к постепенному росту смертности от злокачественных новообразований (ЗНО), при этом Кемеровская область принадлежит к территориям, где уровень смертности по этой причине выше средне регионального (200 чел на 100 тыс. населения). Среди группы инфекционной патологии более 80% всех смертных случаев приходится на туберкулез. Серьезная проблема
144 "Молодые ученые – Кузбассу"
Медико-биологические науки
Кузбасса – высокая смертность трудоспособного населения, особенно от травм, отравлений, несчастных случаев.
Заболеваемость новорожденных в Сибири выше, чем в среднем по Российской Федерации на 8,4%. В Кемеровской области заболеваемость этой группы детей значительно превышает среднесибирский уровень (на 87,9%), не происходит и существенного снижения младенческой смертности. Здесь ведущими остаются болезни перинатального периода и врожденные аномалии (на долю Кузбасса приходится не менее 60%). Уровень различных врожденных аномалий у новорожденных (более 30 детей на 1000 новорожденных), как одного из индикаторов неблагополучного состояния окружающей среды, в Кузбассе, в последние годы, стабильно превышает показатель по России. Также за последние годы увеличилась материнская смертность (на 38% выше, чем в среднем по РФ) [12, 13].
В целом, демографическая ситуация в Кемеровской области более неблагоприятна, чем по Российской Федерации. Показатели рождаемости и естественного прироста населения ниже, а показатели смертности выше, чем по России, практически по всем показателям.
Численность населения Кемеровской области на конец 1998 года составляла 3017,2 чел, из них детей до 14 лет – 592,6 чел, 15-17 лет – 153,3 чел, 18 лет и старше – 2271,3 чел. В этом же году на 1 тыс. населения было рождено 8,4 ребенка, а общая смертность составила 13,1 чел [13].
К сожалению, в регионе не отмечается никакого реального улучшения экологической обстановки и влияние неблагоприятных факторов окружающей среды, в особенности вредных химических веществ, на состояние здоровья населения по-прежнему очень значительно. Поэтому загрязненность окружающей среды представляет реальную угрозу для здоровья населения Кузбасса. Многолетнее пренебрежение экологическими аспектами хозяйственной деятельности, морально и физически устаревшая технология производств – все это привело к тому, что антропогенная нагрузка на окружающую среду в регионе вышла далеко за пределы экологической ёмкости территории Кузбасса и привела к деградации природы и резкому ухудшению состояния здоровья населения.
Литература
1. Баранник Л., Лузанов В. Лесазащита, но леса болеют//Кузбасс. -1994.
–23 апреля.
2. Данилова Р. Отрава из водопроводного крана//Кузбасс. –1994. –10
августа.
"Молодые ученые – Кузбассу"
Медико-биологические науки
145
3. Ильичев А.И., Виткин М.П., Калишев Н.В. Кузбасс. Ресурсы. Экономика. Рынок//Кузбасская энциклопедия. –Т.1. –Кемерово: Кемеровский полиграфический комбинат, 1995. –С. 13-98.
4. Казнин Ю. Радиологическая опасность – реальность Кузбасса, Сибири, России//Кузнецкий край. –1995. –18 мая.
5. Колтун В.З., Колесников Б.Н. Основные проблемы участия общественности в принятии экологически значимых решений//Экология и экономика. –Т. 2. Доклады. –Кемерово, 1997. –С. 235-237.
6. Кузнецов В.И. Эколого-экономическая оценка проблем ОАО ХК «Кузбассразрезуголь» при переходе к устойчивому развитию //Экологические проблемы угледобывающей отрасли в регионе при
переходе к устойчивому развитию. Труды международной научно­практической конференции. –Кемерово: Кузбассвузиздат, 1999. –Т.1. – С. 29.
7. Малахов С.М. Чрезвычайная экологическая ситуация в Кузбассе – возможные пути решения//Экологические проблемы угледобывающей отрасли в регионе при переходе к устойчивому развитию. –Т. 1. Труды Международной научно-практической конференции. –Кемерово, 1999. – С. 120-125.
8. Природа и экологическая проблема Кузбасса. –Кемерово, 1993.
9. Протоколы 1-3 заседания бюро Кемеровского областного комитета партии//ГАКО. П.75, оп.27, д. 36. –С. 2-3.
10. Протоколы 15, 16, 17 заседания бюро Кемеровского обкома партии//ГАКО. П.75, оп. 27, д. 52. –С. 2-4.
11. Протоколы 16, 17, 18 заседания бюро Кемеровского обкома КПСС//ГАКО. П.75, оп.10, д.292. –С. 25-26.
12. Соболева С.В. Смертность населения Кемеровской области на фоне
регионов Сибири//Экологические проблемы угледобывающей отрасли в регионе при переходе к устойчивому развитию. –Т. 1. Труды международной научно-практической конференции. –Кемерово. –1999.
С. 328-333.
13. Соболева С.В., Раднаева Д.Б. Демографическая ситуация Сибири как
индикатор социально-экономического развития региона//Экология и экономика. –Т.1. Материалы Всероссийской научно-практической конференции. –Кемерово. –1997. –С. 89-98.
14. Справки отдела химической промышленности о выполнении природоохранных мероприятий//ГАКО. П.75, оп. 26, д. 141. –С. 11-13.
15. Справки и отчеты по выполнению постановлений бюро Кемеровского обкома КПСС, снятых с контроля//ГАКО. П.75, оп. 12, д. 81. –С.98-99.
146 "Молодые ученые – Кузбассу"
Медико-биологические науки
Е.Г.Поленок
ОРИГИНАЛЬНЫЕ АФФИННЫЕ АДСОРБЕНТЫ С ИММОБИЛИЗОВАННЫМИ САЛИЦИЛАТНЫМИ ЛИГАНДАМИ ДЛЯ АФФИННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ ТИРОКСИНСВЯЗЫВАЮЩИХ БЕЛКОВ
Отдел иммунологии рака КемНЦ СО РАН
На сегодняшний день метод аффинной хроматографии является одним из основных методов хроматографического разделения тироксинсвязывающих белков (ТСБ). В качестве лигандов адсорбентов аффинного типа (ААфТ), как правило, используются тиреоидные гормоны, тироксин (Т
) и трийодтиронин (Т3) [1-3]. Впервые рецепторные белки
4
тиреоидных гормонов были очищены К.Латхам и соавт.[2] на ААфТ, в которых модифицированный диэфиром глютаровой кислоты Т
был
3
иммобилизован на BrCN-активированную аминогексил-сефарозу. Позднее О.В.Свиридов и соавт. [1,3] для очистки ТСБ применили эпоксиактивированную агарозу с иммобилизованным по аминогруппе Т
4
Эпоксиадсорбенты оказались наиболее перспективными, так как обладают большей устойчивостью химической связи между полимерным носителем агарозой и лигандом в отличие от BrCN-активированной агарозы. К тому же непосредственное присоединение лиганда Т
к BrCN-агарозе приводит
4
к возникновению стерических препятствий образованию комплекса лиганд-белок [1].
Важно отметить, что в литературе приводятся данные о способности ряда ароматических соединений взаимодействовать с ТСБ. Так, У.Рикенбахер и соавт.[4] показали, что полихлорированные бифенилы связывают транстиретин (преальбумин) в 3-8 раз сильнее самого Т
4
Подобные результаты были получены и ван ден Бергом [5] для других ТСБ. Имеются работы [6-8], где отмечается способность ряда лекарственных веществ (салицилаты, диклофенак, фенитоин и др.) конкурировать с Т
за связывание с ТСБ, которые, в перспективе, могут
4
использоваться в качестве лигандов аффинных адсорбентов.
Целью нашей работы является разработка эффективных методов синтеза групповых ААфТ с иммобилизованными салицилатными лигандами для аффинной хроматографии ТСБ.
В качестве лигандов ААфТ нами были синтезированы: гидразид салициловой кислоты (г-СК), гидразид п-йодсалициловой кислоты (г­иСК), гидразид дийодсалициловой кислоты (г-диСК). Монойодпроизводные салицилаты были получены из салициламида,
.
.
"Молодые ученые – Кузбассу"
Медико-биологические науки
147
дийодпроизводные - из метилсалицилата по общей схеме: навеску вещества (0,01 М) растворяли в
0,1 М NaOH и добавляли избыток 0,1 Н раствора йода. Смесь отстаивали 40 минут и подкисляли 10% раствором HCl до рН 4. Гидразиды производных салициловой кислоты (пСК) получали путем гидразинолиза
[9].
Анализ синтезированных пСК проводился методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) в системе толуол – этилацетат - муравьиная кислота в соотношении 5:4:1. Пятна веществ проявляли смесью хлорида железа (III) и феррицианида калия. УФ-спектры полученных веществ сняты в 96% спирте при концентрации 0,1 мкМ, с йодсодержащих пСК сняты также ПМР-спектры и ИК-спектры. Анализ на наличие функциональных групп проведен по качественным реакциям на ОН-группу с 1% раствором хлорида железа (III) (фиолетовое окрашивание), на гидразидогруппу с 0,1% раствором 2,4,6-тринитробензсульфокислоты - ТНБС (красно­вишневое окрашивание) и на наличие атомов йода путем сжигания вещества (выделение красно-бурых паров йода).
Эпоксиактивацию агарозных гелей осуществляли по описанной нами ранее методике [9,10] с использованием эпихлоргидрина (ЭХГ-агароза) и бисэпоксида 1,2-этиленгликоля (БЭП-агароза). Концентрация активных эпоксигрупп составила 17-24 мкМ/мл упакокованного геля. Синтезированные гидразиды пСК иммобилизовали на эпоксиагарозу по гидразидогруппе [13].В качестве контроля были синтезированы ААфТ с иммобилизованным Т
по методу [1].
4
Аффинную хроматографию ТСБ проводили по описанной в работе [10] методике. Количество несвязавшихся и адсорбированных белков
определяли спектрофотометрически при длине волны 280 нм ("Uvicord", Швеция). Концентрацию белка определяли по эмпирическим данным УФ­спектрофотометрии при длине волны 280 нм и 260 нм и вычисляли по формуле Вамбурга и Христиана [9]. Концентрацию лиганда ААфТ определяли по разнице между начальным и остаточным после посадки лиганда количеством эпоксигрупп фенолфталеиновой пробой [11].
Качественный анализ выделенных белковых фракций осуществляли электрофоретическими и иммунологическими методами: электрофорез в денатурирующих условиях в ПААГ, иммуноэлектрофорез по методу Грабар и Уильямс [12], двойная диффузия в геле по Оухтерлони [12]. Для иммуноэлектрофореза использовали антисыворотки против всех сывороточных белков, против иммуноглобулинов G,M,A (г. Нижний Новгород). В качестве маркеров молекулярных масс использовали
148 "Молодые ученые – Кузбассу"
Медико-биологические науки
альбумин (67 кД), овальбумин (43 кД), тяжелые и легкие цепи иммуноглобулинов G, M, A (75 кД, 63 кД, 55 кД, 25 кД).
Полученные нами пСК охарактеризованы физико-химическими параметрами, представленными в табл. 1. Йодсодержащие салицилгидразиды (ИСГ) значительно отличаются от своих несодержащих йод аналогов. Введение атома йода в молекулу салициловой кислоты значительно повышает температуру плавления вещества (табл.1). Различия между ИСГ и салицилатами прослеживается и по степени подвижности в силикогеле, определяемой методом ТСХ (табл.1). Так, г-иСК проявляется одним пятном в ТСХ со значением Rf 0,73, значительно отличаясь от несодержащих йод пСК (табл.1). Синтезированный г-диСК в ТСХ дает два пятна с Rf 0,57 и 0,67, что говорит о наличие смеси изомеров. Этот метод также использовали и для контроля чистоты полученных пСК.
Таблица №1
Физико-химические параметры производных салициловой кислоты.
УФ - спектр ИК - спектр
min max
ОН, νNH
ν
см
-1
СО
ν
см
-1
Вещество
Темпера-
тура
плавле-
ния, °С
ТСХ,
Rf
1.Салициловая
158-161 0,41 230 263 3346 1587
кислота (СК)
2.Гидразид салициловой
148-149 0,44 265 301
3307 3253
1626 1733
кислоты (г-СК)
3.Гидразид п-
йодсалицило­вой кислоты
213-215 0,73 275 318
3460 3345
1635 1670
(г-иСК)
4.Смесь
гидразидов дийод­салициловой
___
0,67
292 324
0,57
3326 3426
1626
кислоты (г-диСК)
5.Салициламид
3173
1607
140-142 0,66 251 304
6. п-иСалицил-
3374 3207
1653 1620
222-223 0,73 290 317
амид (п-иСА)
3466
1673
"Молодые ученые – Кузбассу"
Медико-биологические науки
149
УФ-спектры ИСГ и несодержащих йод пСК показывают четкий батохромный сдвиг длинноволновой полосы максимума салициламида (301 нм) и салицилгидразида (304 нм) до 317-318 нм для г-иСК и до 324 нм для смеси г-диСК, характеризующий наличие заместителей в пара­положении (табл.1). Для г-иСК в ПМР-спектре в зоне 6-9 м.д. обнаружены два сложных дублета (6,61 и 8,11 м.д.), характеризующих 1,4,6- замещение бензольного кольца. В смеси изомеров г-диСК в ПМР-спектре пока идентифицирован гидразид 3,5-дийодсалициловой кислоты. В ИК-
-1,
спектрах пСК наблюдаются колебания в области 3200-3600 см характерно для колебаний связи
1600-1800 см
-1
, характеризующие колебания νСО.
ОН и νNH (табл.1), а также в области
ν
что
В качественных реакциях на функциональные группы синтезированные пСК дают соответствующее окрашивание. ИСГ и несодержащие йод пСК с 1% раствором хлорида железа (III) дают фиолетовое окрашивание, что говорит о присутствии в молекуле веществ ОН-группы бензольного кольца. С 0,1% раствором ТНБС реагируют только гидразидопроизводные салициловой кислоты, окрашивая раствор в красно-вишневый цвет. Наличие йода в молекуле йод-пСК было доказано при сжигании веществ с выделением красно-бурых паров йода.
Таблица №2
Характеристика эпоксиактивированных агарозных гелей. Сорбент/ Парамет­ры
г - СК г - иСК г - диСК г - СК г - иСК г – диСК
ЭХГ - агароза БЭП - агароза
Концентра ция лиганда,
24 11 24 17 7 17
мкМ/мл Емкость ААфТ по белку,
0,42 0,16 3,4 0,15 0,2 0,6
мг/мл
Синтезированные лиганды иммобилизовали по гидразидогруппе на ЭХГ и БЭП-агарозу. Хроматографический скрининг полученных ААфТ выявил следующие закономерности. Увеличение расстояния между агарозой и лигандом от 3 атомов (ЭХГ-агароза) до 10 (БЭП-агароза) ведет к существенному снижению количества сорбируемого белка и, следовательно, снижается степень неспецифической сорбции на ААфТ, что видно из таблицы 2. Для ААфТ с иммобилизованным г-СК количество адсорбированного белка падает в 2,5 раза при переходе от ЭХГ ­активированного геля к БЭП - активированному. Однако, БЭП-
150 "Молодые ученые – Кузбассу"
Медико-биологические науки
активированные ААфТ с иммобилизованными г-диСК адсорбируют в 5-6 раз меньше белка по сравнению с аналогичными ЭХГ- активированными ААфТ. Вероятно, бисэпоксид 1,2- этиленгликоля в отличие от хорошо изученного бисэпокси-реагента Сандберга-Пората [11,13] является наиболее перспективным в синтезе ААфТ, благодаря оптимальной длине гидрофильной углеводородной цепочке, отсутствию гидрофобных и ионогенных групп. Эти свойства обеспечивают более прочную связь в системе агароза-лиганд и способствуют снижению неспецифической сорбции белков.
Количество сорбируемого белка варьирует и в зависимости от типа лиганда (табл.2). Так, ААфТ с иммобилизованным г-иСК адсорбирует значительно меньше белка по сравнению с ААфТ с г-СК независимо от типа активации агарозы. Для дийод-пСк наблюдается тенденция к резкому увеличению сорбции белка особенно для ЭХГ-агарозы (табл.2).
Электрофорез в денатурирующих условиях показал, что белковые фракции всех синтезированных ААфТ обязательно содержат 3 белка с молекулярными массами 67 кД, 55 кД и 25 кД. Иммуноэлектрофоретически доказано присутствие во всех белковых фракциях альбумина, что соответствует компоненту 67 кД, а также иммуноглобулина G, что соответствует компонентам 55 кД и 25 кД
(тяжёлые и лёгкие цепи). Классический ААфТ с иммобилизованным Т
4
сорбирует только три вышеуказанных белка, что согласуется с литературными данными [1,3]. Абсолютно идентичный классическому ААфТ состав белков имеет синтезированный нами оригинальный ААфТ с г-иСК независимо от типа активации, что позволит использовать этот лиганд в аффинной хроматографии ТСБ вместо дорогостоящего Т
. Кроме
4
перечисленных белков оригинальные ААфТ адсорбируют дополнительно еще белки с молекулярной массой 76 кД, 43 кД, 33 кД, 28 кД, что характерно для ЭХГ-активированных гелей с концентрацией лиганда более 20 мкМ/мл упакованного геля.
На основе полученных экспериментальных данных можно говорить о предпочтительном использовании в аффинной хроматографии ТСБ БЭП­активированных ААфТ, синтезированных с помощью бисэпоксида 1,2­этиленгликоля. БЭП- активированные ААфТ сорбируют в 2-5 раз меньше белка в отличие от ЭХГ- активированных аналогов, то есть обладают большей специфичностью. Полученные нами монойодпроизводные салициловой кислоты по хроматографическим характеристикам не уступают классическому лиганду Т
, который, в перспективе, можно будет
4
заменить производными салициловой кислоты. Применение синтезированных нами оригинальных лигандов позволяет упростить методы синтеза ААфТ для выделения и очистки ТСБ на основе легкодоступных лекарственных веществ, в частности, производных салициловой кислоты.
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]