8.Микроскопический метод исследования. Методы окраски микроорганизмов и их отдельных структур.

Окраска по Граму:

1. На фиксированный мазок наносят карболово-спиртовый раствор генцианового фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 2-3 минуты бумагу снимают пинцетом, а краситель сливают.

2. Наносят раствор Люголя на 1-2 минуты. 3. Наносят на препарат этиловый спирт на 30-60 секунд для обесцвечивания.

4. Промывают препарат водой. 5. Докрашивают мазок водным раствором фуксина в течение 1-2 минут,

промывают водой, высушивают и микроскопируют. Грамположительные бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет,

грамотрицательные – в красный цвет.

Окраска кислотоустойчивых бактерий по методу Циля-Нильсена:

1. На фиксированный мазок наносят карболовый раствор фуксина через полоску фильтровальной бумаги и подогревают до появления паров в течение 3-5 минут.

2. Снимают бумагу пинцетом, промывают мазок водой.

3. На мазок наносят 5% раствор серной кислоты или 3% раствор солянокислого спирта на 1-2 минуты для обесцвечивания.

4. Промывают водой.

5. Докрашивают мазок водным раствором метиленового синего в течение 3- 5 минут.

6. Промывают водой, высушивают и микроскопируют.

Окраска спор по методу Ожешки:

1. На нефиксированный мазок наносят 0,5% раствор хлористоводородной кислоты и подогревают на пламени горелки в течение 2-3 минут.

2. Кислоту сливают, препарат промывают водой, просушивают и фиксируют над пламенем горелки.

3. Окрашивают препарат по Цилю-Нильсену. Споры бактерий при этом приобретают красный цвет, а вегетативные формы – синий.

Изучение микробов в живом состоянии.

Клетки микроорганизмов в живом состоянии изучают методом раздавленной капли и методом висячей капли.

Метод раздавленной капли. На поверхность обезжиренного предметного стекла наносят каплю исследуемого материала или суспензию бактерий и покрывают ее покровным стеклом. Микроскопируют препарат с объективом х40.

Метод висячей капли. Препарат готовят на покровном стекле, в центр которого наносят каплю бактериальной суспензии. Затем предметное стекло с лункой, края которого предварительно смазывают вазелином, прижимают к покровному стеклу так, чтобы капля находилась в центре лунки. Препарат переворачивают покровным стеклом вверх.

9. Особенности строения спирохет. Виды,патогенные для человека.

Спирохеты — тонкие длинные извитые бактерии. Они состоят из наружной клеточной стенки, которая окружает цитоплазматический цилиндр. Поверх наружной мембраны прозрачный чехол гликозаминогликановой природы. Под наружной клеточной стенки располагаются фибриллы, закручивающиеся вокруг цитоплазматического цилиндра.

Фибриллы участвуют в передвижении спирохет, придавая клеткам вращательное, сгибательное и поступательное движение.

Спирохеты представлены тремя родами, патогенными для чело- века: Трипонема, Бореллия, Лептоспира.

Трепонемы имеют вид тонких штопорообразно закрученных нитей с 8—12 равномерными мелкими завитками. Вокруг протопласта трепонем расположены 3—4 жгутика. В цитоплазме имеются цитоплазматичеекие филаменты. Патоген- ными представителями являются трипонема палидум — возбудитель сифилиса, Т. pertenue — возбудитель тропической болезни .

Боррелии в отличие от трепонем, более длинные, имеют по 3—8 крупных завитков и 7—20 фибрилл. К ним относятся возбудитель возвратного тифа и возбудители болезни Лайма.

Лептоспиры имеют завитки неглубокие и частые в виде закрученной веревки. Концы этих спирохет изогнуты на- подобие крючков с утолщениями на концах. Образуя вторичные завитки, они приобретают вид букв S или С; имеют две осевые фибриллы. Патогенный представитель L, interrogans вызывает леп тоспироз при попадании в организм с водой или пищей, приводя к кровоизлияниям и желтухе.