35. Методы культивирования вирусов

Культивирование вирусов. Путем заражения лабораторных животных. Путем заражения куриных эмбрионов. Путем заражения клеточных культур, которые получают из нормальных или злокачественных клеток человека, или животных. Виды клеточных колоний: полуперевиваемые перевиваемые. ПРОДОЛЖЕНИЕ В 36 ВОПРОСЕ

36.Виды клеточных культур. Способ получения. Использование для диагностики и профилактики вирусных инфекций.

Для культивирования вирусов используют культуры клеток, куриные эмбрионы и лабораторных животных. Наиболее широкое применение нашли однослойные культуры трипсинизированных клеток, а также перевиваемые клеточные линии, которые получают из различных органов и тканей животных и человека.

Эмбриональные ткани обладают большей потенцией к росту, чем ткани взрослых животных.

Для культивирования вирусов в курином эмбрионе вируссодержащий материал вводят в амниотическую, аллантоисную Полость, желточный мешок, внутривенно, в мозг, в тело эмбриона, на аллантоисную мембрану.

Специфические поражения в куриных эмбрионах развивают­ся в виде очагового поражения, диффузного помутнения оболо­чек, отека с обильными язвами, участками некроза, кровоизли­яний, пустул, пузырьков и др. (рис. 24). Эти изменения эмбриона характеризуют специфический вирусный инфекцион-ный процесс. Репродукцию вируса в курином эмбрионе обнару­живают реакцией гемагглютинации. Культивирование вирусов проводят также в организме чувствительных лабораторных животных, особенно тех вирусов, которые не репродуцируются в культурах тканей и куриных эмбрионах.

37. Принципы и методы лабораторной диагностики вирусных инфекций.

При постановке диагноза инфекционной болезни, как и при диагностике любых других заболеваний, основываются на жалобах больного, анамнезе болезни, эпидемиологическом анамнезе, результатах осмотра, данных лабораторных и инструментальных исследований.

Из Эпидемиологического анамнеза мы можем выяснить, присуще ли заболеванию пациента заразительность ( болеет ли в настоящий момент или в определённые сроки до настоящего времени заболеванием со схожими симптомами люди из близкого окружения); в какие сроки укладывается инкубационный период заболевания (например, сыпь при эпидемическом сыпном тифе появляется на 4-6 день болезни, а при брюшном тифе на 8-10 день);

Из анамнеза заболевания : порядок возникновения клинических симптомов заболевания ( например, при пищевых токсикоинфекциях, сначала появляется рвота, затем диарея, при холере-наоборот, диарея предшествует рвоте).

Из анамнеза жизни пациента мы можем выяснить какими заболеваниями он переболел, тем самым можем сразу исключить из дифференциально-диагностического ряда ранее перенесённые инфекционные заболевания, сформировавшие специфический иммунитет (например, детские инфекции).

Процесс специфической лабораторной диагностики основан на выявлении возбудителя и ответной реакции организма человека в ходе инфекционного процесса. Он состоит из трех этапов: сбора материала, транспортировки и его исследования в лаборатории.

Лабораторные методы диагностики различны по чувствительности и специфичности. Чувствительность метода отражает вероятность того, что результат теста будет положительным у инфицированного пациента и определяется отношением общего числа положительных результатов к общему числу инфицированных пациентов.

Критерий специфичности отражает вероятность того, что результат теста будет положительным у неинфицированного пациента, и его вычисляют как отношение общего числа отрицательных результатов к общему числу неинфицированных пациентов.

38. Вирусы бактерий – фаги. Фаги вирулентные и умеренные, их взаимодействие с бактериальной клеткой. Профаг. Лизогения. Фаговая конверсия.

. Выделяют 5 основных типов бактериофагов в зависимости от типа нуклеиновых кислот (ДНК-содержащие и РНК-содержащие фаги), строения, типа симметрии:

• Нитевидные ДНК-содержащие фаги, которые лизируют клетки бактерий, несущих F-плазмиду.

• Фаги с аналогом отростка, РНК-содержащие И однонитевой ДНК-фаг.

• Фаги Т3 и Т7 с коротким отростком.

• Фаги с несокращающимся чехлом и 2-нитевой ДНК.

Головка Т-фагов имеет кубический тип симметрии, довольно ригидна, состоит из белковой оболочки, построенной из отдельных субъединиц и заключенного в ней ДНКового генома, размеры головки около 100нм. Геном фагов образован спирально упакованной двойной нитью ДНК.

Отросток (хвост) Т-фагов имеет длину около 100 нм, включает полый стержень, сконструированный по типу спиральной симметрии и мократительный чехол, присоелдиняющийся к воротничку, окружающему стержень головки. Чехол образован 120-140 белковыми молекулами.

Взаимодействие с бактериальной клеткой строго специфично, т.е. они способны инфицировать бактерии только определенного вида. Происходит в несколько этапов.

Адсорбция на бактерии происходит за счет наличия на поверхности бактериальной специфических рецепторов для бактериофага.

Внедрение вирусной ДНК (инъекция фага). После адсорбции происходит расщепление фрагмента клеточной стенки лизоцимом, который содержится в капсиде фага.

Репродукция фага. Происходит в 3 этапа: синтез фаговых белков, затем репликация нуклеиновых кислот, сборка фага.

Существует другой тип взаимодействия, которыйназывают интегративным или интегративной инфекцией. Вызывают его умеренные фаги. В случае интегративной инфекции ДНК вируса встраивается в геном бактериальной клетки – образуется профаг. Репликация вирусной ДНК происходит вместе с бактериальной, полноценного синтеза вирусспецифических белков и НК фактически не происходит. Бактерия приобретает новые свойства – происходит лизогенная (фаговая) конверсия. Бактерии, содержащие профаг, называют лизогенными.

Практическое применение бактериофагов.

Фаготипирование и дифференцировка бактериальных культур.

Эпидемиологические наблюдения – определение количества бактериофагов в водоемах позволяет оценить количество патогенных бактерий.