Мікробіологічна діагностика ешерихіозів

Збудник Escherichia coli входить до родини Enterobacteriaceae, роду Escherichia. Матеріалом для дослідження є випорожнення, блювотні маси, слиз із зіву і носа, перитонеальна рідина, а у летальних випадках – вміст кишечника, кров й органи (печінка, селезінка).

Мікробіологічну діагностику ешерихіозів проводять бактеріологічним методом.

Бактеріологічний метод є основним методом діагностики, оскільки лише виділивши чисту культуру мікробів та вивчивши їх властивості, зокрема антигенні, можна віддиференціювати патогенні варіанти кишкових паличок від непатогенних й встановити остаточний діагноз захворювання.

Матеріал, який досліджують (частіше випорожнення) висівають на середовище Ендо, ставлять в термостат при t 37°С. Через 24 години враховують ріст мікробів на цьому середовищі, відбирають не менш як 10 колоній червоного кольору з металевим блиском і ставлять реакцію аглютинації на склі з полівалентною ОК-колі сироваткою (сумішшю сироваток, що включають антитіла до патогенних варіантів кишкових паличок).

Частину колоній, що дали позитивний результат реакції аглютинації та залишились, пересівають на скошений агар чи середовище Ресселя. Наступного дня враховують ріст й зміни в середовищі Ресселя, перевіряють вирощену культуру мікробів на чистоту шляхом мікроскопії мазка, пофарбованого за Грамом. Для вивчення біохімічних властивостей роблять висів на «строкатий» ряд Гіса. Антигенні властивості вивчають у реакції аглютинації, яку ставлять спочатку з полівалентною ОК сироваткою, а потім з кожною із сироваток, що входять до складу полівалентної.

За наявності аглютинації з однією із сироваток ставлять розгорнуту реакцію з цією ж сироваткою (див. додаток). Реакцію аглютинації ставлять з живою культурою для встановлення В-антигену і з нагрітою культурою для встановлення О-антигену. Для цього змивають ізотонічним розчином хлориду натрію ріст зі скошеного агару й отриманий звись прогрівають 1 годину на водяній бані, що кипить. Реакцію ставлять з діагностичною сироваткою, розведеною від 1:50 до її титру. Реакція вважається позитивною у розведенні сироватки до титру, вказаного на ампулі, чи напівтитру.

Серологічний метод діагностики коліентеритів не має широкого використання.

Для виявлення О-антитіл до ентеропатогенних кишкових паличок в сироватці, яка досліджується, може бути використана реакція пасивної гемаглютинації (РПГА) (див. додаток). В якості антигену в цій реакції використовують еритроцити, сенсибілізовані 48-годинною культурою E. Coli, кип’яченої на протязі 2 годин. Реакція дозволяє відрізнити хворих від бактеріоносіїв. В перших звичайно виявляються антитіла - у других ні.

Біохімічна активність і морфологічні властивості кишкової палички

Глюкоза	Лактоза	Мальтоза	Маніт	Цукроза	Утворення індолу	Утворення сірководню	Розріджен ня желатини	Середовище Сімонса	Спороутво рення	Рухливість	Фарбування за Грамом
кг	кг	кг	кг	–	±	+	+	–	–	+	––

Схема „Мікробіологічна діагностикаи ешерихіозів”

Матеріал для дослідження

Висів на диференційно-діагностичне середовище Ендо

Постановка реакції аглютинації на склі

полівалентною ОК - колі сироваткою

(10 колоній )

Облік росту колоній на середовищі Ендо

Інкубація у термостаті при t- 37° C 18 – 24 год.

Постановка розгорнутої реакції аглютинації з живою та грітою культурою для визначення О та В антигенів

Висів у строкатий ряд Гісса для вивчення біохімічних властивостей

Постановка реакції аглютинації з моно рецепторними колі - сироватками

Постановка реакції аглютинації з полівалентною

ОК - колі сироваткою

Мікроскопія мазків, що фарбовані за Грамом (перевірка на чистоту )

Облік росту й змін на середовищі Ресселя

Пересів

колонії на середовище Ресселя

Інкубація у термостаті при t-37° C, 18 - 24год.