Дослід Контроль

Фізіологічний розчин

Чиста досліджувана бактеріальна культура

Механізм реакції аглютинації на склі

+

=

Облік

Додаток Г

Постановка розгорнутої (об'ємної) реакції

аглютинації Грубера

Реакція виконується в пробірках, кількість яких залежить від титру діагностичної аглютинуючої неадсорбованої сироватки.

Діагностичну аглютинуючу неадсорбовану сироватку заздалегідь розводять фізіологічним розчином від 1:100 до її титру, вказаного на ампулі. Наприклад, якщо титр сироватки 1:800, то достатньо 5 пробірок (5-а контрольна).

Мірною піпеткою вносять однаковий об'єм фізіологічного розчину в ряд пробірок (1,2,3,4,5) (I).

Діагностичну аглютинуючу неадсорбовану сироватку, заздалегідь розведену 1:50 (II), в такому ж об'ємі, як і фізіологічний розчин, вносять піпеткою в 1-у пробірку. (Тут розведення сироватки вже відповідає 1:100).

З 1-ї пробірки в такому ж об'ємі розведену фізіологічним розчином та ретельно перемішану сироватку піпеткою переносять в 2-у пробірку, з 2-ї пробірки в 3-ю і т.д., окрім останньої 5-й пробірки, де залишається лише фізіологічний розчин (контроль антигену). З передостанньої пробірки половину рідини видаляють для створення однакового об'єму рідини у всіх пробірках. Таким чином готують послідовні двократні розведення сироватки. За допомогою фізіологічного розчину роблять змив з досліджуваної добової бактерійної культури, що виросла на скошеному агарі (III-IV). Змив (IV), що містить певну кількість мікробних тіл в 1 мл, піпеткою вносять по 2 краплі у всі пробірки.

Штатив з пробірками струшують і поміщають в термостат при 37° С на 2 години.

Попередній облік реакції проводять через 2 години (для виявлення жгутикових антигенів (Н). Остаточний результат реакції враховують через 18-24 години при кімнатній температурі (для виявлення соматичних антигенів (О).

Облік реакції проводять неозброєним оком без струшування пробірок. У разі позитивної реакції на дні пробірки утворюється осад (агглютинат), надосадна рідина залишається прозорою.

Осад може бути у вигляді пластівців (Н-аглютинація) або зерен (О-агглютінация), або пластівців і зерен разом.

Негативна реакція – вміст пробірок каламутніє, осад відсутній.

Рідина така ж, як і в 5-й контрольній пробірці (контроль антигену).

Реакція аглютинації Грубера вважається позитивною, якщо аглютинат утворюється в розведеннях діагностичної імунної неадсорбованої сироватки до титру або напівтитру.

Схема постановки розгорнутої (об'ємної) реакції аглютинації Грубера

Контроль аг

1

2

3

4

5

Механізм розгорнутої (об'ємної) реакції аглютинації Грубера

=

+

Облік

Додаток Д

Постановка реакції аглютинації типу Відаля

Спочатку готують послідовні двократні розведення сироватки крові обстежуваного. Для цього мірною піпеткою вносять однаковий об'єм фізіологічного розчину (I) в ряд пробірок (1,2,3,4,5). Заздалегідь розведену 1:50 сироватку крові обстежуваного (II) в такому ж об'ємі, як і фізіологічний розчин, піпеткою вносять в 1-у пробірку. Одержуємо розведення сироватки 1:100.

З 1-ї пробірки в такому ж об'ємі ретельно змішану фізіологічним розчином сироватку піпеткою переносять в 2-у пробірку, з 2-ї пробірки в 3-ю і т.д., крім 5-ї пробірки, де залишається лише фізіологічний розчин (контроль діагностікуму). З передостанньої пробірки половину рідини видаляють для отримання однакового об'єму рідини у всіх пробірках. У кожну пробірку піпеткою вносять по 2 краплі антигенного бактерійного діагностікуму (III). Штатив з пробірками струшують і поміщають в термостат при 37 ºС на 2 години й залишають при кімнатній температурі. Остаточний облік реакції проводять через 18-24 години.

Облік реакції проводиться неозброєним оком без струшування пробірок. Для точнішого обліку реакції використовують аглютиноскоп.

У разі позитивної реакції на дні пробірки утворюється осад (аглютинат), надосадна рідина залишається прозорою.

У разі негативної реакції вміст пробірок каламутний, осад відсутній. Рідина така ж, як і в 5-й контрольній пробірці (контроль антигена).

Для інтерпритації одержаних результатів реакції необхідно знати діагностичні титри при тому або іншому захворюванні. Використовуючи парні сироватки обстежуваного, можна стежити за динамікою наростання титрів антитіл.

Титром специфічних антитіл в досліджуваній сироватці є останнє (максимальне) її розведення, при якому ще спостерігається чітка аглютинація.

Схема постановки реакції аглютинації типу Відаля