3. Методика определения групп крови.

Определение групп крови может проводиться тремя способами:

- по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам (редко)

- по стандартным отмымым эритроцитам с известной групповой принадлежностью (редко)

- с помощью моноклональных антител анти-А и анти-В (часто)

Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам

Суть метода сводится к обнаружению в испытуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных сывороток. Для этих целей используется реакция агглютинации.

Для проведения пробы необходимы:

- стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп I(0), II(A), III(B) двух различных серий (они должны быть четко промаркированы и помечены определенными цветами)

- белые фарфоровые или эмалированные тарелки или другие пластинки со смачиваемой поверхностью, маркированные, согласно группам крови.

- изотонический раствор хлорида натрия

- иглы, пипетки, стеклянные палочки (предметные стекла).

Техника проведения реакции.

1. Под соответствующими обозначениями группы крови на тарелку наносят сыворотку I, II, III групп в объеме 0,1 мл.

2. Кровь для исследований берут из пальца. Сухой стеклянной палочкой на пластину в 6 точек последовательно переносят 6 капель исследуемой крови величиной примерно с булавочную головку 0,01 мл, каждую рядом с каплей стандартной сыворотки. Затем их осторожно перемешивают между собой стеклянными палочками с закругленными краями.

3. Смешав капли, тарелку периодически покачивают. Агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд. Но наблюдение следует вести не менее 5 минут, так как возможна более поздняя агглютинация, например с эритроцитами группы А2 (II).

4. В те капли, где произошла реакция, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают результаты реакции.

Реакция агглютинации может быть положительной или отрицательной

· При положительной реакции в течение первых 10-30 секунд наблюдают в смеси видимые невоору-женным глазом мелкие красные зернышки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов.

· При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет.

Если все сыворотки дали положительную реакцию, значит, испытуемая кровь содержит оба агглютиногена - А и В. Но в таких случаях, чтобы исключить неспецифическую реакцию агглютинации, следует провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной сывороткой группы АВ (IV).

Определение групп крови с помощью моноклональных антител анти-А и анти-В (цоликлоны анти-А и анти-В)

Цоликлоны анти-А и анти-В применяют для определения группы крови человека по системе АВ0 путем выявления антигенов А и В в эритроцитах стандартными антителами, содержащимися в цоликлонах.

Техника проведения:

· Цоликлоны анти-А и анти-В наносят на белый планшет по одной большой капле (0,1 мл) под соот-ветствующими надписями: анти-А или анти-В. Рядом с каплями антител следует нанести по одной маленькой капле исследуемой крови. После перемешивания компонентов наблюдают за реакцией агг-лютинации в течение 2-3 минут. После оценивают результаты

· Возможны следующие варианты реакции агглютинации:

- агглютинация отсутствует с цоликлонами анти-А и анти-В, значит кровь не содержит агглютиногенов А и В – исследуемая крови I(0) группы

- агглютинация наблюдается с цоликлонами анти-А, значит эритроциты содержат агглютиноген А – исследуемая кровь группы II(A)

- агглютинация наблюдается с цоликлонами анти-В, значит эритроциты содержат агглютиноген В – исследуемая кровь группы III(B)

- агглютинация наблюдается с цоликлонами анти-А и анти -В, значит эритроциты содержат агглютиногены А и В – исследуемая кровь группы IV(A, B)

· В четвертом случае для исключения неспецифической агглютинации производят дополнительное исследование с изотоническим раствором хлорида натрия. Большую каплю изотонического раствора смешивают с маленькой каплей крови. Отсутствие агглютинации подтверждает принадлежность исследуемой крови к IV(A,B) группе

Определение группы крови по стандартным отмытым эритроцитам с известной групповой принадлежностью

- из вены берут 3-4мл крови и центрифугируют

- на тарелку, разделенную на секторы, наносят по капле сыворотки, к которой добавляют каплю стандартных эритроцитов (в 5 раз меньше капли сыворотки), перемешивают углом предметного стекла покачивают тарелку около 3 минут

- добавляют по капле изотонического раствора NaCl, продолжают смешивать и через 5 минут оценивают результат

Возможные результаты:

1. Агглютинация отсутствует с эритроцитами I(0) группы и определяется с эритроцитами II(a) и III(B) групп – исследуемая кровь I(0) группы

2. Агглютинация отсутствует с эритроцитами I(0) и II(A) групп и определяется с эритроцитами III(B) группы – исследуемая кровь II(А) группы

3. Агглютинация отсутствует с эритроцитами I(0) и III(B) групп и определяется с эритроцитами II(А) группы – исследуемая кровь III(B) группы

4. Агглютинация отсутствует с эритроцитами I(0), II(A), III(B) групп – исследуемая кровь IV(A, B) группы