Метод поляризационной флюорометрии.

Этот метод по своему принципу близок к методу конкурентного связывания, поскольку там также идет конкуренция между мечеными и немечеными соединениями за At, но исследование поляризации света флюоресценции позволяет определять количество флюоресцирующего соединения, образовавшего комплекс механически, не отделяя его от свободной формы. В этом методе меченые соединения получают, присоединяя к молекуле определяемого вещества молекулу флюоресцеина - вещества, способного ярко светится зеленым светом при освещении его синим светом. Физически явление флюоресценции заключается в том, что молекула вещества, поглощая квант света, переходит в возбужденное состояние, в котором находится очень небольшой промежуток времени, а затем возвращается в исходное состояние, испуская при этом квант света с длиной волны, которая несколько больше, чем у света, который используется для возбуждения флюоресценции. Если за время, прошедшее между поглощением света и его испусканием, молекула флюорофора не изменила своего положения в пространстве, то свет флюоресценции будет поляризован в той же плоскости, в которой поляризован и возбуждающий свет. Если же молекула успела повернуться на некоторый угол, то соответственно изменяется и плоскость поляризации излучаемого света. Поэтому исследование поляризации флюоресценции называют молекулярной вискозиметрией, она позволяет оценить скорость вращения молекул исследуемого вещества. В связи с тем, что большие молекулы комплекса Ag-At вращаются значительно медленнее, чем небольшие молекулы определяемого вещества, меченого флюоресцеином ,метод позволяет определять одно из них в присутствии другого.

Нормальная величина.

Нормальная величина - это величина сравнения для значений, полученных при исследовании лабораторных параметров. Совокупность результатов, полученных для популяций здоровых людей, может быть описана статистическими методами в виде:

1. симметричного распределения, соответствующего нормальному распределению Гаусса. Нормальные значения предоставляются как Х+2SD и включают в себя 95% исследуемой популяции;

2. несимметричного распределения.

Исследование формы распределения большого числа биохимических параметров показывает, что соответствие в популяции их распределения с распределением Гаусса является, скорее, исключением, чем правилом.

Исследования распределение концентрации кальция, альбумина, фосфатов, магния, общего белка, мочевины, щелочной фосфатазы показали, что только распределение альбумина соответствовало симметричному характеру. Причем, асимметрия распределения весьма разнообразна. Часто невозможно при помощи математических способов (например, логарифмирования) привести его к Гауссовскому. В таких ситуациях лучше применять непараметрические методы, которые не зависят от типа распределения. Наиболее часто применяют метод перцентильных границ: N-ый перцентиль определяется как значение переменной (число наблюдений), ниже которой находится N-ый процент наблюдений.

Например, 10 перцентиль означает наблюдение, ниже которого находится 10% (более низких значений) наблюдений, 50 перцентиль - это значение, ниже которого лежит 50% наблюдений, то есть составляет средние значение, или модальную величину. Норму представляют как диапазон значений, которые находятся в границах между 2,5 и 97,5 перцентиля в совокупности результатов популяции здоровых людей. Дополнительно указывается наиболее часто встречаемое значение параметра (модальное значение), которое позволяет определить характер асимметрии (право- или левосторонний).

Варианты понятия «норма»:

1. Широко популяционная норма.

Подбор популяции на основании критерия здоровья включает:

• физиологический критерий (артериальное давление, ЖЕЛ и др.);

• возраст, пол;

• экологические факторы;

• характер питания;

• генетические критерии (группа тканей (крови),характер изоэнзимов).

2. Узкопопуляционная норма:

• зависимость от возраста - педиатрические и гериатрические нормы.

3. индивидуальная норма:

• индивидуальная биологическая вариабельность выражена меньше, чем у всей популяции.

4. Внутрилабораторная норма:

• нормальные значения не являются абсолютными величинами и зависит от методики исследования.

Диагностически значимые границы величин лабораторных параметров:

• границы нормальных величин делят людей на группы здоровых и больных. Ошибочная оценка фальшиво позитивных результатов приводит к назначению ненужных дополнительных анализов или к задержке в лечении;

• децизионные уровни концентраций, при которых меняется способ лечения, например, проведение диализа или переливания крови;

• критические значения, указывающие на опасность для жизни пациента.

Нормальные значения биохимических параметров крови, сыворотки или плазмы определяются для материала, взятого натощак после специальной подготовки. Поэтому, интерпретация результатов неотложного анализа не может заключаться в простом сравнении с нормальными величинами.

Коллегия американских патологов требует, чтобы в каждой американской больнице каждый врач был ознакомлен со списком анализов критической группы и с самими критическими величинами.

Группа параметров, имеющих наивысший информационный приоритет (критическая группа) - глюкоза, Nа, K, Ca, TCO2, Mg, Pi, Cl, осмоляльность плазмы, мочевина, Ht, Hb, протромбовое время, pCO2, pH, pO2.

В педиатрии эта группа несколько шире и помимо вышеназванных параметров включает в себя дополнительно альбумин, NH+4, общий белок, белок в ликворе, билирубин, тромбоциты, эритроцитарные индексы, энзиматические тесты.

Термин «референтные значения» в современной литературе сменил ранее употребляемый термин «норма». Это статистическое понятие, соответствующее 95% исследуемой группы референтных индивидов. Большинство индивидов в здоровой популяции характеризуется величиной данного параметра, приближенного к средней величине (симметричное, Гауссовское распределение) или к модальной величине (величине, наиболее часто представленной в несимметричном распределении). Результаты исследований с пограничными значениями показателей следует интерпретировать очень осторожно. Такие и исследования следует повторить. В случае воспроизведения результата следует назначить углубленное обследование.