решітки. Розроблені різні конструкції, які працюють як за однопроменевою (одноканальною), так і за двопроменевою(двоканальною) схемами.

На рис. 23.1.1 показана принципова блок-схема, що включає основні вузли, що забезпечують роботу спектрофотометру.

Рис. 23.3.4. Спектофотометри серії Specord 200, 205, 210, 250

ОБЛАДНАННЯ ТА МАТЕРІАЛИ: Спектрофотометр або фотоелектроколориметр, кювети, пробірки, фільтрувальний папір.

РЕАКТИВИ: розчини фенолу, аніліну, тирозину (концентрація розчинів за завданням викладача), 5·10-5 М розчин рибофлавіну.

ДОСЛІД 1. ВИВЧЕННЯ СПЕКТРІВ ПОГЛИНАННЯ РОЗЧИНІВ ФЕНОЛУ, АНІЛІНУ, ТИРОЗИНУ, РИБОФЛАВІНУ

В кювету до мітки наливають3 мл розчину досліджуваної речовини, в іншу – 3 мл дистильованої води(нульовий розчин). При використанні спектрофотометра за однопроменевою схемою в світловий потік в кюветному відділенні поперемінно вводять кювету з розчином порівняння (нульовий розчин) і кювету з аналізованим розчином. До кюветного відділення спектрофотометрів, що працюють за двопроменевою схемою, встановлюють одночасно обидві кювети: кювету з нульовим розчином в канал порівняння, а кювету з аналізованим розчином – у вимірювальний канал.

Записують спектр поглинання для розчинів фенолу, аніліну, тирозину в області від200 до 300 нм, для рибофлавіну – від 350 до 500 нм. Зробити аналіз одержаних спектрів і ідентифікувати речовину.

256

ДОСЛІД 2. ВИЗНАЧЕННЯ СПЕКТРУ ЗА ОКРЕМИМИ ДОВЖИНАМИ ХВИЛЬ.

Розчин рибофлавіну наливають в кювету і вставляють її в кюветне відділення фотоелектроколориметру. Змінюючи світлофільтри (довжину хвилі l, нм), визначають поглинання світла (А) і заносять дані в табл. 23.3.2.

За отриманими результатами будують спектр поглинання рибофлавіну в координатах: поглинання (А) від довжини хвилі (l) (рис. 23.3.5), і відмічають lmax рибофлавіну.

Рис. 23.3.5. Шкала координат для побудови спектру поглинання рибофлавіну

Таблиця 23.3.2

Визначення спектру за довжинами хвиль

257

ДОСЛІД 3. ВИЗНАЧЕННЯ НЕВІДОМОЇ КОНЦЕНТРАЦІЇ ВІДОМОЇ РЕЧОВИНИ ЗА ДОПОМОГОЮ КАЛІБРУВАЛЬНОГО ГРАФІКУ

Побудова калібрувального графіка за поглинанням світла(А) розчинами різних концентрацій відомої речовини дає змогу швидко знайти концентрацію цієї речовини у невідомому розчині по величині поглинання нею світла. Для цього в 6 пробірок (або поперемінно в кювету) наливають розчини рибофлавіну різної концентрації і вимірюють інтенсивність поглинання світла (А) при lmax, визначеній в попередньому досліді, і дані заносять до табл. 23.3.3. За одержаними даними будують калібрувальний графік (рис. 23.3.6).

Таблиця 23.3.3

Розведення рибофлавіну

Рис. 23.3.6. Приклад побудови калібрувального графіку

Базовий розчин рибофлавіну розбавляють у довільній пропорції (у 4 – 8 разів) у дистильованій воді і визначають інтенсивність поглинання світла на фотоелектроколориметрі (спектрофотометрі) при lmax.

258