носія і при розділенні компонентів проби утворюються мігруючі зони внаслідок різної швидкості руху іонів проби.

Для обробки електрофореграми використовують забарвлення, або застосовують фотометричний метод. На рис. 23.12.2 показано розділення білків сироватки.

Для визначення амфолітів(амінокислоти, пептиди) використовують ізоелектричне фокусування. Для цього буферними сумішами створюють градієнт рН. Відомо, що в ізоелектричній точці (рН, при якому молекула амфоліту стає електронейтральною) речовина в електричному полі не рухається. Таким чином при ізоелектричному фокусуванні можна досягти досить хорошого ефекту розділення амфолітів, оскільки лише вони мігрують до ізоелектричної точки і концентруються в ній.

Рис. 23.12.2. Електрофореграма білків сироватки з фотометричним визначенням

В практиці досліджень знайшла застосування ідея поєднання елементів газової хроматографії і електрофорезу. Таке поєднання називають капілярним електрофорезом. Це дозволяє розширити можливості двох методів розділення.

Використовують електрофорез в біології, біохімії для аналізу сумішей амінокислот, пептидів, білків, нуклеїнових кислот і інших біополімерів.

23.12. Комбіновані методи аналізу

Газорідинну хроматографію (ГРХ) застосовують в комбінації з різними методами аналізу. Це дозволяє розширити діапазон досліджень, а також більш достовірно вияснити хімічну будову молекул

289

компонентів суміші, що розділяється, їх ідентифікацію. Застосовують ГРХ в сполученні з ІЧ-спектроскопією, з хромато-мас-спектрометрією, електрофорезом і ін.

При використанні ІЧ-спектроскопії для ідентифікації або визначення компонентів суміші, що розділяється в ГРХ поступають таким чином. Потік рухомої фази при виході з колонки не направляється в детектор, а окремий компонент конденсують в кюветі(або окремо, а потім переносять до кювети) для запису ІЧ-спектру поглинання рідини, що утворилась внаслідок конденсації. Оскільки маса виділеного компоненту

ефективність розділення, об’єднують з мас-спектрометричним аналізом. Такий комбінований аналіз дозволяє отримувати детальну інформацію про будову молекул, що дає можливість встановити структурну формулу досліджуваної речовини. Суть цього комбінованого методу така. Досліджувана газоподібна проба з хроматографу, минаючи детектор, надходить до мас-спектрометру, де і аналізується. Іонізація молекул окремого компоненту здійснюється електронним . пучкомЕнергія електронів може регулюватися в межах10 – 100 електрон-вольт. Під дією електронного удару із молекули вибиваються електрони. При цьому молекула фрагментується – вона розпадається на окремі позитивно заряджені частки з різною масою. Фрагментація молекулярного іону протікає в основному таким чином, що утворюється карбонієвий іон з парним числом електронів і виділяється радикал

Спостерігається, наприклад, що молекули складних альдегідів під дією електронного удару утворюють два іони з виділенням атому гідрогену

R

Позитивні іони, що утворились, фокусуються у іонний пучок і прискорюються, проходячи між пластинками з високою різницею потенціалів. Внаслідок цього іони з різною масою набувають різної швидкості. Потім ці іони потрапляють в магнітне поле, під дією якого во-

290

ни по різному відхиляються в залежності від їх маси і розділяються на пучки, кожний з яких включає лише частки однакової маси. Детектор мас-спектрометру реєструє ці пучки у вигляді мас-спектру. Процеси в мас-спектрометрі протікають в глибокому вакуумі(10-5 – 10-7 мм.рт.ст.),

тому газ-носій відкачують перед надходженням елюату -до мас спектрометру.

291