- •Государственное образовательное учреждение
- •Лабораторно-практическое занятие № 1
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •1.1.Биуретовая реакция
- •1.2.Нингидриновая реакция
- •1.3.Ксантопротеиновая реакция
- •1.4.Реакция Фоля
- •Лабораторно-практическое занятие № 2
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •1.Реакции осаждения белков
- •1.1.Высаливание белков сульфатом аммония
- •1.2.Необратимые реакции осаждения белков
- •1.2.1. Осаждение белков при нагревании
- •1.2.2. Осаждение белков минеральными кислотами
- •1.2.3. Осаждение белков органическими кислотами
- •1.2.4.Осаждение белков солями тяжелых металлов
- •2.Количественное определение белка биуретовым методом
- •Лабораторно-практическое занятие № 3
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •3.1.Выделение муцина из слюны и изучение его свойств
- •3.2.Выделение казеина из молока
- •3.2.1.Осаждение казеина и доказательства его белковой природы
- •3.2.2.Доказательство наличия простетической группы в казеине
- •3.3. Доказательство химической природы гемопротеинов
- •Лабораторно-практическое занятие №4
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •4.1. Воздействие температуры на неорганический катализатор и фермент
- •4.2.Специфичность действия ферментов
- •4.3.Влияние рН на активность ферментов
- •Лабораторно-практическое занятие №5
- •Литература
- •5.1. Эффект активирующего и ингибирующего влияний на ферменты
- •Лабораторно-практическое занятие № 6
- •Лабораторно-практическое занятие № 7
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •7.1. Сопоставление редокс-потенциалов рибофлавина и метиленового синего
- •7.2. Качественное определение активности сукцинатдегидрогеназы мышц
- •7.3. Действие пероксидазы крови
- •Лабораторно-практическое занятие № 8
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •8.1. Количественное определение пировиноградной кислоты в моче
- •Лабораторно-практическое занятие № 9
- •Лабораторно-практическое занятие №10
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •10.1. Определение концентрации глюкозы в крови глюкозооксидазным методом
- •Лабораторно-практическое занятие №11
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •11.1. Выявление пентозурии пробой Биаля
- •11.2. Выявление фруктозурии пробой Селиванова
- •Лабораторно-практическое занятие №12
- •Литература
- •Лабораторная работа Изучение состояния углеводного обмена методом нагрузок
- •12.1. Проба на толерантность к глюкозе
- •12.2. Выявление мукополисахаридозов пробой с толуидиновым синим
- •Лабораторно-практическое занятие №13
- •Лабораторно-практическое занятие №14
- •Литература
- •14.1. Качественные реакции на жёлчные кислоты (реакция Петтенкофера).
- •Лабораторно-практическое занятие №15
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •15. Исследование содержания таг в плазме крови
- •15.1. Ферментативный метод определения содержания таг в плазме крови
- •Лабораторно-практическое занятие №16
- •Литература
- •16.1. Метод определения содержания общего хс в сыворотке крови с помощью холестеролоксидазной реакции
- •16. 2. Определение содержания хс лпвп
- •16. 3. Определение содержания хс лпонп и хс лпнп
- •Практическое занятие №17
- •Лабораторно-практическое занятие №18
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •18.1. Обнаружение крови в желудочном соке
- •18.2. Реакция на молочную кислоту в желудочном содержимом
- •18.3. Определение активности аланин-аминотрансферазы
- •Лабораторно-практическое занятие №19
- •Лабораторная работа
- •19.1. Количественное определение мочевины в крови
- •19.2. Качественная реакция на наличие фенилпировиноградной кислоты в моче
- •Лабораторно-практическое занятие №20
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •20.1. Качественная реакция на мочевую кислоту
- •20.2. Количественное определение мочевой кислоты в моче и крови
- •Лабораторно-практическое занятие №21
- •Литература
- •Практическое занятие №22
- •Лабораторно-практическое занятие № 23
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •23.3.1. Качественная реакция на токоферолы с концентрированной азотной кислотой
- •Лабораторно-практическое занятие №24
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •24.1. Диазореакция на витамин в1
- •24. 2. Доказательство восстанавливающих свойств витамина в2
- •24. 3. Реакция витамина в6 с хлорным железом
- •24. 4. Качественная реакция на витамин с с раствором йода
- •24. 5. Количественное определение витамина с в продуктах питания с 2,6-дихлорфенолиндофенолом
- •24.5. 1. Определение содержания витамина с в картофеле
- •Лабораторно – практическое занятие № 25
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •25.1. Открытие йода в щитовидной железе
- •25.2. Цветные реакции на инсулин
- •25.2.1. Ксантопротеиновая реакция
- •Лабораторно – практическое занятие № 26
- •Лабораторная работа
- •26.3. Качественная реакция на фолликулин (эстрон)
- •Практическое занятие № 27 Коллоквиум по теме: «Биологически активные вещества»
- •Лабораторно-практическое занятие № 28
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •28.1. Доказательство присутствия глюкозы в моче
- •28.1.1. Проба Троммера на глюкозу в моче
- •28.1.2. Проба Фелинга на глюкозу
- •28.1.3. Полуколичественное определение глюкозы в моче
- •28.2. Открытие кетоновых тел в моче
- •28.2.1. Проба Легаля на кетоновые тела
- •28.2.2. Проба Либена на кетоновые тела
- •Лабораторно-практическое занятие № 29
- •Литература Основная:
- •Лабораторная работа
- •28.1. Освобождение крови от белков
- •28. 2. Доказательство присутствия гемоглобина в моче
- •28.2.1. Бензидиновая проба на гемоглобин
- •28.2.2. Определение наличия Hb с помощью комбинированных тест-полосок
- •Лабораторно-практическое занятие № 30
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •Лабораторно-практическое занятие № 31
- •Лабораторно-практическое занятие № 32
- •Литература
- •1. Количественное определение глюкозы в крови
- •2. Проба на толерантность к глюкозе
- •3. Количественное определение холестерина в сыворотке крови
- •4. Количественное определение общей и свободной кислотности желудочного содержимого
- •5. Количественное определение билирубина по методу Йендрашека
- •6. Количественное определение кальция в сыворотке крови
- •7. Количественное определение неорганических фосфатов в крови
- •8. Определение физико-химических свойств мочи
- •9. Количественное определение пировиноградной кислоты (пвк) в моче
- •10. Количественное определение белков в плазме крови
- •11. Количественное определение мочевины в крови
- •1. Цветные реакции на аминокислоты, пептиды, белки:
- •2. Необратимые реакции осаждения белков (денатурация):
- •3. Доказательство наличия белка в моче (проба Геллера)
- •4. Доказательство наличия глюкозы в моче
- •5. Доказательство наличия кетоновых тел в моче
- •6. Доказательство наличия билирубина в моче
- •7. Доказательство наличия крови в моче (кале, желудочном содержимом)
- •13. Доказательство наличия молочной кислоты в желудочном содержимом
- •Лабораторно-практическое занятие № 33
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •33.1. Определение кальция в сыворотке крови по методу де Ваарда
- •33.2. Качественный анализ мочи
- •33.2.1. Определение рН, доказательство наличия белка, глюкозы, кетоновых тел, уробилина и крови с помощью комбинированных тест-полосок.
- •33.2.2. Качественная реакция на кровяные пигменты
- •33.2.3. Качественные реакции на желчные пигменты
- •Лабораторно-практическое занятие № 34
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •34.1. Унифицированный метод определения сиаловых кислот
- •Лабораторно-практическое занятие № 35
Литература
Основная:
Лекции «Биохимия тканей: соединительной, мышечной, нервной. Биохимия иммунитета».
Биологическая химия : Учебник / Е.С. Северин, Т.Л. Алейникова, Е.В. Осипов, С.А. Силаева. – М. : ООО «Медицинское информационное агентство», 2008. – С. 343 - 362.
Березов Т.Т. Биологическая химия: Учебник. – 3-е изд., перераб. И доп./ Т.Т.Березов, Б.Ф.Коровкин. – М.: Медицина, 1998. – С.625-679.
Николаев А.Я. Биологическая химия / А.Я.Николаев. – М.:Мед. инф. агентство, 2004. – С. 452-474.
Гомбоева А.Ц. Биохимия тканей / А.Ц.Гомбоева, Л.П. Никитина. – Чита, 2004. – 51с.
Ситуационные задачи по биохимии: Учебное пособие для студентов лечебного и педиатрического факультетов // Л.П.Никитина, А.Г.Гомбоева, Н.В.Соловьева и др. – 2-е изд., испр. И доп. – Чита, 2003.- С.30-32.
6. Патохимия наследственных болезней. Учебное пособие для студентов лечебного и педиатрического факультетов // Никитина Л.П., Гомбоева А.Ц., Соловьева Н.В. – Чита, 2008. – С.101-111.
Дополнительная:
Биохимия / Под ред. Е.С.Северина. – М.:ГЭОТАР-МЕД, 2005 (2003). – С. 616-636.
Николаев А.Я. Биологическая химия / А.Я.Николаев. – М.:Мед. инф. агенство. -2004. – С. 452-474.
3. Биохимия. Тесты и задачи: Учеб. Пособие для студ. Мед. вузов / Под ред.
Е.С.Северина. – М.: ВЕДИ, 2005. – С.335-347.
4. Биохимия (в вопросах и ответах) (Учебное пособие для студентов мед. вузов в вопросах и ответах) / Т.П.Вавилова, О.Л.Евстафьева. – М.: ВЕДИ, 2005.- С.105-115.
5. Биохимия. Краткий курс с упражнениями и задачами / Под ред. Член-корр. Е.С.Северина, А.Я.Николаева. – М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001. – С. 162-173; 387-390.
6. Клиническая биохимия / под ред. В.А.Ткачука. – М.:ГЭОТАР-МЕД, 2002. – С.32-57.
7. Щербак И.Г. Биохимия: Учебник. – СПб.: СПбГМУ, 2005. – С. 353-412.
8. Адгезивные белки межклеточного матрикса. Их роль в межклеточных взаимодействиях и развитии опухолей. Возрастные и патологические изменения соединительной ткани при старении. (Методичка для самостоятельной работы).
9. Медиаторы: ацетилхолин, катехоламины, серотонин, ГАМК, гистамин, глицин. Физиологически активные пептиды мозга (Методичка для самостоятельной работы).
Лабораторная работа
34.1. Унифицированный метод определения сиаловых кислот
Принцип метода. При нагревании гликопротеидов плазмы с трихлоруксусной кислотой отщепляются сиаловые кислоты, которые в свою очередь гидролизуются с образованием свободной нейраминовой и уксусной кислот. Резорцин в присутствии солей меди дает с нейраминовой кислотой синее окрашивание.
Ход определения
К 0,1 мл плазмы или сыворотки прилейте 1,9 мл раствора трихлоруксусной кислоты, поставьте на 7 мин в кипящую водяную баню для гидролиза, затем охладите и отфильтруйте через бумажный фильтр. К 0,5 мл прозрачного фильтрата добавьте 0,5 мл воды и 1 мл резорцинового реактива, закройте стеклянными пробками и поставьте вновь на кипящую водяную баню еще на 15 мин. После этого охладите, прилейте 3 мл экстрагирующего реактива, встряхните и оставьте на 15 мин для расслоения фаз. Окраска переходит в верхний слой, который отделите и измерьте на ФЭКе при длине волны 575-590 нм в кювете с длиной оптического пути 0,5 см против холостой пробы, при постановке которой к 1 мл воды добавьте 1 мл резорцинового реактива. Остальные процедуры те же, что и в опыте. Для построения калибровочного графика возьмите по 1 мл калибровочных растворов, приготовленных согласно таблице, добавьте по 1 мл резорцинового реактива и обработайте также, как в опыте.
Расчет проведите по калибровочному графику.
Калибровочные растворы. Основной раствор содержит 0,5 мг ацетилнейраминовой кислоты в 1 мл воды. Из него готовят калибровочные растворы.
Основной раствор ацетил- нейрам. Кислоты, мл |
Вода, мл
|
Содержание
|
Соответствует концентрации в плазме | |||
мкг |
нмоль |
мг/л |
| |||
0,1 |
0,9 |
50 |
162 |
200 |
0,65 |
|
0,2 |
0,8 |
100 |
324 |
400 |
1,29 |
|
0,3 |
0,7 |
150 |
485 |
600 |
1,94 |
|
0,4 |
0,6 |
200 |
647 |
800 |
2,59 |
|
0,5 |
0,5 |
250 |
809 |
1000 |
3,24 |
|
Нормальные величины. В норме величины сиаловых кислот составляют в системе СИ 2,0-2,33 ммоль/л независимо от того, выражаются результаты определения в свободной нейраминовой кислоте или же в ее ацетилированной форме — сиаловых кислотах. Содержание нейраминовой кислоты в весовых единицах колеблются 620-730 мг/л.
Клиническое значение. Уровень сиаловых кислот возрастает при самых разнообразных воспалительных процессах, а также при опухолях, инфаркте миокарда.
Контроль выполнения лабораторной работы
1. Почему при нагревании гликопротеинов с ТХУ отщепляются сиаловые кислоты?
2. Строение и биологическая роль сиаловых кислот.
Темы рефератов:
1. Изменения соединительной ткани при старении, коллагенозах.
2. Биохимические изменения при мышечных дистрофиях и денервации мышц.
3. Нарушения обмена биогенных аминов при психических заболеваниях.
4. Предшественники катехоламинов и ингибиторы моноаминооксидазы в лечении депрессивных состояний.