- •Государственное образовательное учреждение
- •Лабораторно-практическое занятие № 1
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •1.1.Биуретовая реакция
- •1.2.Нингидриновая реакция
- •1.3.Ксантопротеиновая реакция
- •1.4.Реакция Фоля
- •Лабораторно-практическое занятие № 2
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •1.Реакции осаждения белков
- •1.1.Высаливание белков сульфатом аммония
- •1.2.Необратимые реакции осаждения белков
- •1.2.1. Осаждение белков при нагревании
- •1.2.2. Осаждение белков минеральными кислотами
- •1.2.3. Осаждение белков органическими кислотами
- •1.2.4.Осаждение белков солями тяжелых металлов
- •2.Количественное определение белка биуретовым методом
- •Лабораторно-практическое занятие № 3
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •3.1.Выделение муцина из слюны и изучение его свойств
- •3.2.Выделение казеина из молока
- •3.2.1.Осаждение казеина и доказательства его белковой природы
- •3.2.2.Доказательство наличия простетической группы в казеине
- •3.3. Доказательство химической природы гемопротеинов
- •Лабораторно-практическое занятие №4
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •4.1. Воздействие температуры на неорганический катализатор и фермент
- •4.2.Специфичность действия ферментов
- •4.3.Влияние рН на активность ферментов
- •Лабораторно-практическое занятие №5
- •Литература
- •5.1. Эффект активирующего и ингибирующего влияний на ферменты
- •Лабораторно-практическое занятие № 6
- •Лабораторно-практическое занятие № 7
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •7.1. Сопоставление редокс-потенциалов рибофлавина и метиленового синего
- •7.2. Качественное определение активности сукцинатдегидрогеназы мышц
- •7.3. Действие пероксидазы крови
- •Лабораторно-практическое занятие № 8
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •8.1. Количественное определение пировиноградной кислоты в моче
- •Лабораторно-практическое занятие № 9
- •Лабораторно-практическое занятие №10
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •10.1. Определение концентрации глюкозы в крови глюкозооксидазным методом
- •Лабораторно-практическое занятие №11
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •11.1. Выявление пентозурии пробой Биаля
- •11.2. Выявление фруктозурии пробой Селиванова
- •Лабораторно-практическое занятие №12
- •Литература
- •Лабораторная работа Изучение состояния углеводного обмена методом нагрузок
- •12.1. Проба на толерантность к глюкозе
- •12.2. Выявление мукополисахаридозов пробой с толуидиновым синим
- •Лабораторно-практическое занятие №13
- •Лабораторно-практическое занятие №14
- •Литература
- •14.1. Качественные реакции на жёлчные кислоты (реакция Петтенкофера).
- •Лабораторно-практическое занятие №15
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •15. Исследование содержания таг в плазме крови
- •15.1. Ферментативный метод определения содержания таг в плазме крови
- •Лабораторно-практическое занятие №16
- •Литература
- •16.1. Метод определения содержания общего хс в сыворотке крови с помощью холестеролоксидазной реакции
- •16. 2. Определение содержания хс лпвп
- •16. 3. Определение содержания хс лпонп и хс лпнп
- •Практическое занятие №17
- •Лабораторно-практическое занятие №18
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •18.1. Обнаружение крови в желудочном соке
- •18.2. Реакция на молочную кислоту в желудочном содержимом
- •18.3. Определение активности аланин-аминотрансферазы
- •Лабораторно-практическое занятие №19
- •Лабораторная работа
- •19.1. Количественное определение мочевины в крови
- •19.2. Качественная реакция на наличие фенилпировиноградной кислоты в моче
- •Лабораторно-практическое занятие №20
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •20.1. Качественная реакция на мочевую кислоту
- •20.2. Количественное определение мочевой кислоты в моче и крови
- •Лабораторно-практическое занятие №21
- •Литература
- •Практическое занятие №22
- •Лабораторно-практическое занятие № 23
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •23.3.1. Качественная реакция на токоферолы с концентрированной азотной кислотой
- •Лабораторно-практическое занятие №24
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •24.1. Диазореакция на витамин в1
- •24. 2. Доказательство восстанавливающих свойств витамина в2
- •24. 3. Реакция витамина в6 с хлорным железом
- •24. 4. Качественная реакция на витамин с с раствором йода
- •24. 5. Количественное определение витамина с в продуктах питания с 2,6-дихлорфенолиндофенолом
- •24.5. 1. Определение содержания витамина с в картофеле
- •Лабораторно – практическое занятие № 25
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •25.1. Открытие йода в щитовидной железе
- •25.2. Цветные реакции на инсулин
- •25.2.1. Ксантопротеиновая реакция
- •Лабораторно – практическое занятие № 26
- •Лабораторная работа
- •26.3. Качественная реакция на фолликулин (эстрон)
- •Практическое занятие № 27 Коллоквиум по теме: «Биологически активные вещества»
- •Лабораторно-практическое занятие № 28
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •28.1. Доказательство присутствия глюкозы в моче
- •28.1.1. Проба Троммера на глюкозу в моче
- •28.1.2. Проба Фелинга на глюкозу
- •28.1.3. Полуколичественное определение глюкозы в моче
- •28.2. Открытие кетоновых тел в моче
- •28.2.1. Проба Легаля на кетоновые тела
- •28.2.2. Проба Либена на кетоновые тела
- •Лабораторно-практическое занятие № 29
- •Литература Основная:
- •Лабораторная работа
- •28.1. Освобождение крови от белков
- •28. 2. Доказательство присутствия гемоглобина в моче
- •28.2.1. Бензидиновая проба на гемоглобин
- •28.2.2. Определение наличия Hb с помощью комбинированных тест-полосок
- •Лабораторно-практическое занятие № 30
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •Лабораторно-практическое занятие № 31
- •Лабораторно-практическое занятие № 32
- •Литература
- •1. Количественное определение глюкозы в крови
- •2. Проба на толерантность к глюкозе
- •3. Количественное определение холестерина в сыворотке крови
- •4. Количественное определение общей и свободной кислотности желудочного содержимого
- •5. Количественное определение билирубина по методу Йендрашека
- •6. Количественное определение кальция в сыворотке крови
- •7. Количественное определение неорганических фосфатов в крови
- •8. Определение физико-химических свойств мочи
- •9. Количественное определение пировиноградной кислоты (пвк) в моче
- •10. Количественное определение белков в плазме крови
- •11. Количественное определение мочевины в крови
- •1. Цветные реакции на аминокислоты, пептиды, белки:
- •2. Необратимые реакции осаждения белков (денатурация):
- •3. Доказательство наличия белка в моче (проба Геллера)
- •4. Доказательство наличия глюкозы в моче
- •5. Доказательство наличия кетоновых тел в моче
- •6. Доказательство наличия билирубина в моче
- •7. Доказательство наличия крови в моче (кале, желудочном содержимом)
- •13. Доказательство наличия молочной кислоты в желудочном содержимом
- •Лабораторно-практическое занятие № 33
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •33.1. Определение кальция в сыворотке крови по методу де Ваарда
- •33.2. Качественный анализ мочи
- •33.2.1. Определение рН, доказательство наличия белка, глюкозы, кетоновых тел, уробилина и крови с помощью комбинированных тест-полосок.
- •33.2.2. Качественная реакция на кровяные пигменты
- •33.2.3. Качественные реакции на желчные пигменты
- •Лабораторно-практическое занятие № 34
- •Литература
- •Лабораторная работа
- •34.1. Унифицированный метод определения сиаловых кислот
- •Лабораторно-практическое занятие № 35
3. Доказательство наличия белка в моче (проба Геллера)
В пробирку налейте 1 мл конц. НNО3 и осторожно по стенке наслоите 1 мл исследуемой мочи. На границе жидкостей присутствие белка обусловливает появление белого кольца.
В норме с мочой выделяется протеинов 25-70 мг/сутки, что практически не регистрируется. Протеинурия может появиться при болезнях почек из-за повышенной проницаемости почечных клубочков или вследствие органического повреждения нефрона, при некрозе, гемолизе эритроцитов, при поражениях мочевыводящих путей и половых органов.
4. Доказательство наличия глюкозы в моче
Существуют скрининг-тесты: Аg-phan, Реntaphan и т.д.; с помощью полосок из них, которые помещают в исследуемую мочу, доказывается наличие глюкозы, если их окраска изменяется. О её присутствии говорит и положительная реакция Троммера, которая проводится следующим образом:
К 1 мл исследуемой мочи добавьте несколько капель 1 % раствора сульфата меди и 0,5 мл 10% раствора NаОН, хорошо перемешайте и доведите до кипения верхний слой жидкости. Глюкоза, обладая восстанавливающими свойствами, восстанавливает Сu(ОН)2 (голубого цвета) вначале до СuОН (желтого цвета), который позднее распадается до Сu2О (оранжево-красного цвета).
В моче здорового человека глюкоза отсутствует, т.к. практически вся реабсорбируется в канальцах почек. Глюкозурия обычно появляется при гипергликемии (почечный порог 8,8-9,9 ммоль/л), которая может развиваться при сахарном диабете, гипертиреозе, синдроме Иценко-Кушинга, диффузных поражениях печени, феохромоцитоме и т. д.).
5. Доказательство наличия кетоновых тел в моче
Кетоновые тела (β-оксибутират, ацетоацетат, ацетон) – продукты неполного окисления высших жирных кислот (ВЖК) и кетогенных аминокислот. В моче здорового человека отсутствуют, т.к. полностью реабсорбируются. Однако при сахарном диабете, реже при гиперпродукции глюкокортикостероидов, при голодании (особенно у детей) может развиться кетонурия, что определяется с помощью различных проб.
а) Проба Легаля
В пробирку внесите 10 капель исследуемой мочи, добавьте 1-2 капли свежеприготовленного 10% раствора нитропруссида натрия и 3-4 капли 10% раствора NаОН. При наличии кетоновых тел появляется красно-бурое окрашивание.
б) Проба Либена
К 10 каплям исследуемой мочи добавьте 1-2 капли 10% раствора NаОН и по каплям - раствор Люголя (I2 в КI) до появления бледно-желтого взвешенного осадка с запахом йодоформа.
6. Доказательство наличия билирубина в моче
Соломенно-желтый цвет мочи здорового человека обусловлен уробилином (стеркобилином). При гипербилирубинемии, обусловленной увеличением концентрации его конъюгированной формы, этот жёлчный пигмент появляется в моче, что можно доказать следующими качественными реакциями:
а) Проба Розина
В пробирку прилейте 5 мл исследуемой мочи и осторожно наслоите 1% спиртовый раствор йода. На границе жидкостей в присутствии жёлчных пигментов появляется зеленое кольцо. Эта реакция основана на преобразовании билирубина под влиянием йода в биливердин зелёного цвета.
б) Проба Фуше
К 4 мл исследуемой мочи добавьте 2 мл 15% хлорида бария, взболтайте и отфильтруйте. Фильтр с осадком перенесите в чашку Петри, на него нанесите 2-3 капли реактива Фуше; в присутствии желчных пигментов появляются сине-зелёные пятна.