20.2. Количественное определение мочевой кислоты в моче и крови

Мочевая кислота у человека является конечным продуктом обмена пуриновых оснований, входящих в состав нуклеопротеидов. Образуется в печени и теряется с мочой. Количество образующейся мочевой кислоты и эффективность её выделения через почки влияет на содержание уратов в крови. Их повышенный уровень в данной биологической жидкости может быть вызван почечно-каменной болезнью, сахарным диабетом, усиленной активностью функции щитовидной железы. Значения урикемии зависят от клубочковой проницаемости и используются для мониторирования функции почек. Референсные величины в крови – 149 – 458 мкмоль/л.

С мочой выделяется за сутки 1,60 – 3,54 ммоль (270 – 600 мг) уратов. Дети теряют относительно больше мочевой кислоты, чем взрослые. Экскреция этого соединения также зависит от содержания пуринов в пище и интенсивности обмена нуклеопротеидов. Гипоурикурия, т.е. уменьшение выделения мочевой кислоты с мочой, отмечается при нефрите, почечной недостаточности. Гиперурекимия наблюдается при алиментарной (пищевой) лейкемии, усиленном распаде нуклеопротеидов.

Принцип метода. Среди известных способов определения концентрации мочевой кислоты наиболее точным является ферментативный метод, который основывается на способности уриказы расщеплять данное соединение до аллантоина, СО₂ и Н₂О₂. Количество выделившегося пероксида водорода определяется по реакции Триндера – образованию хромогена желтого цвета за счет протекания катализируемой пероксидазой реакции Н₂О₂ с 4-аминоантипирином и 3,5-дихлор-2-гидроксибензолсульфонатом. Окраска прямо пропорциональна концентрации мочевой кислоты в анализируемой биологической жидкости.

Реактивы.

Рабочий раствор, содержащий следующие ингридиенты: буфер PIPES, 4-аминоантипирин, гексацианоферриат калия, пероксидазу, уриказу.

Стандарт - раствор мочевой кислоты известной концентрации.

Ход определения

К 1 мл рабочего раствора добавьте 0,02 мл сыворотки крови или мочи (опытная проба), перемешайте и выдержите 5 минут при 37⁰С. Параллельно приготовьте «стандартную пробу» и «бланк», для чего в первом случае вместо сыворотки возьмите 0,02 мл раствора мочевой кислоты, с известной концентрацией, а во втором - аналогичный объем воды. Через 5 минут измерьте оптическую плотность растворов опытной и стандартной проб против бланка при 546 нм. Расчет произведите по формуле:

С_оп=Е_оп/Е_ст*С_ст

где – С_ст – концентрация стандартного раствора мочевины; Е_оп – оптическая плотность опытного раствора; Е_ст – оптическая плотность стандартного раствора мочевой кислоты.

Контроль выполнения лабораторной работы

1. Как вычисляется содержание мочевой кислоты в анализируемом образце?

2. С какой целью можно использовать качественную реакцию на мочевую кислоту?

Темы рефератов:

1. Биосинтез дезоксирибонуклеотидов. Применение ингибиторов синтеза дезоксирибонуклеотидов для лечения злокачественных опухолей.

2. Этиология и патогенез подагры.

3. Молекулярная патология митохондриальной ДНК.

4. Болезни репарации ДНК.

5. Пероксисомные болезни.