Лабораторная работа

28.1. Освобождение крови от белков

При клинических и биохимических анализах крови белки могут препятствовать определению низкомолекулярных веществ, таких как, например, глюкозы, хлоридов и др. Поэтому в клинической практике часто приходится освобождать биологические жидкости от протеинов.

Ход определения

В 5 пробирок налейте по 2 мл сыворотки. В первый сосуд добавьте 1-2 мл 10%-го раствора трихлоруксусной кислоты и встряхните; во вторую – 1 мл 10% метафосфорной кислоты, в третью – 1-2 капли концентрированной H₂SO₄, в четвёртую – 1-2 капли 3%-го раствора СН₃СООН и кипятите 1-2 минуты, в пятую прилейте 5 мл 4,5%-го ZnSO₄ и 1 мл 4% NaOH.

После чего отфильтруйте содержимое каждой пробирки. С каждым фильтратом проделайте пробу Геллера (на 1-2 мл концентрированной HNO₃ осторожно по стенке наслоите исследуемую жидкость) и пробу с сульфосалициловой кислотой (к 1-2 мл фильтрата добавьте 3-4 капли 20%-ной сульфосалициловой кислоты).

Отрицательные реакции на белки в фильтрате свидетельствуют о полноте освобождения от них исследуемой жидкости.

28. 2. Доказательство присутствия гемоглобина в моче

Гемоглобин в моче может появляться при усиленном гемолизе эритроцитов или реже – у лиц с ослабленной синтетической функцией печени (угнетение генеза гаптоглобина).

28.2.1. Бензидиновая проба на гемоглобин

Гемоглобин, как все соединения, полифункционален, поэтому при определённых условиях может проявлять свойства пероксидазы, то есть способен окислять бензидин с помощью кислорода из пероксида водорода.

Ход определения

В пробирку налейте 3-4 мл прокипячёной мочи, 0,5 мл раствора бензидина в уксусной кислоте и 3-4 капли 3%-го раствора Н₂О₂. После перемешивания жидкость окрашивается в сине-зелёный цвет, указывающий на присутствие Hb в моче.

28.2.2. Определение наличия Hb с помощью комбинированных тест-полосок

Комбинированными тест-полосками в моче можно доказать наличие глюкозы, кетоновых тел, белка, уробилиногена, гемоглобина.

Ход определения

Возьмите нецентрифугированную мочу. Тест-полоску опустите на 1 минуту в сосуд с мочой, после чего получившуюся окраску сравните со стандартной шкалой. Равномерный зелёный цвет свидетельствует о наличии гемоглобина, при его малых примесях в моче реакция может наступить через 1-2 минуты.

Контроль выполнения лабораторной работы

1. Почему в биохимических лабораториях, прежде чем провести анализ крови, вызывают осаждение белков?

2. Почему осаждение уксусной кислотой будет более полным после кипячения?

3. Объясните механизм осаждения протеинов.

4. Какой реактив более полно осаждает белки?

5. С помощью каких реакций можно доказать наличие гемоглобина в моче?

6. Объясните механизм бензидиновой пробы.

Темы рефератов:

1. Плазменные белки, особенности строения, биологическая роль.

2. Аутоиммунные болезни, краткая характеристика.

3. Трансплантационная несовместимость.

4. Железо, экология, пищевые источники, механизмы всасывания.

5. Роль железа в системе ПОЛ-АРЗ.

6. Факторы риска в развитии Fe-дефицитных анемий.

7. Основные звенья патогенеза гемохроматоза.

8. Гемофилии, причины, патогенез.

9. Причины и патогенез приобретённых коагулопатий.

10. Наследственные порфирии, патогенез.