Определение подлинности
1. По удельному вращению (растворы препаратов в этилацетате вращают плоскость поляризованного луча влево, спиртовые растворы –вправо).
2. УФ-спектрофотометрия
3. Щелочной гидролиз
Хлорамфеникол и хлорамфеникола стеарат - желтое окрашивание, переходящее в красно-оранжевое.
Хлорамфеникол при дальнейшем нагревании в щелочной среде образует кирпично-красный осадок аци-формы n-нитрофенилпропандиола -1,3:
Эта реакция позволяет подтвердить наличие в молекуле хлорамфеникола нитрофенильного радикала, аминогруппы и ковалентно связанного атома хлора.
4. Реакция с солями тяжелых металлов
(за счет наличия в молекуле спиртового гидроксила и вторичной алифатической аминогруппы)
Хлорамфеникол (с раствором сульфата меди) - синий осадок, который растворяется в н-бутаноле, окрашивая его слой в фиолетовый цвет.
5. Гидрирование (цинковой пылью, в кислой среде) нитрогруппы в молекуле хлорамфеникола до аминогруппы.
1-n-аминофенил-2-
ацетиламинопропандиол-1,3
На этой реакции основаны многие способы идентификации и количественного определения хлорамфеникола.
Далее 1-n-аминофенил-2-ацетиламинопропандиол-1,3 диазотируют и превращают в азокраситель. В качестве азосоставляющих используют: β-нафтол, α-нафтиламин или др. амины или фенолы.
Например, в результате азосочетания с β-нафтолом образуется азокраситель красного цвета.
7. Реакция образования шиффовых оснований
Предварительное гидрирование вещества (цинком в хлороводородной кислоте) до ароматического амина с последующей конденсацией с n-диметиламинобензальдегидом до образования окрашенной соли основания Шиффа.
Хлорамфеникол в этих условиях приобретает ярко-оранжевое окрашивание.
8. Реакция на ионы
Препараты подвергают гидролитическому расщеплению, затем фильтрат подкисляют азотной кислотой, после чего проводят реакцию на хлорид-ион.
9. Частные реакции:
ХЛОРАМФЕНИКОЛА СТЕАРАТ
Гидролитическое расщепление в присутствии концентрированной хлороводородной кислотой. - образование маслянистых капель стеариновой кислоты, затвердевающих на поверхности жидкости при охлаждении.
хлорамфеникола стеарат
хлорамфеникол стеариновая кислота
Хлорамфеникола натрия сукцинат
нагревание с резорцином и концентрированной серной кислотой – образование желтого раствора, имеющий в УФ - свете желтовато-зеленую флуоресценцию.
Доброкачественность
Хлорамфеникол – примесь исходных и промежуточных продуктов синтеза (ТСХ)
Хлорамфеникола стеарат – примесь свободной стеариновой кислоты (не более 3 %) (метод нейтрализации по фенолу)
Хлорамфеникола натрия сукцинат – примесь свободного хлорамфеникола (не более 5%) (метод диффузии в агар).
Количественное определение
1. Нитритометрия (хлорамфеникол)
после предварительного гидрирования в кислой среде цинковой пылью:
2. Бромид-броматометрия (хлорамфеникол)
Предварительно хлорамфеникол гидрируют в кислой среде цинковой пылью. Остаток цинка удаляют фильтрованием и к фильтрату добавляют избыток 0,1М раствора бромата калия в присутствии бромидов. Количество непрореагировавшего титранта устанавливают с помощью иодида калия. Выделившийся йод оттитровывают 0,1М раствором тиосульфата натрия.
3. Осадительное титрование (хлорамфеникол)
Прямое титрование раствором CuSO4 (Ind - мурексид)
Аргентометрия
Меркуриметрия