6. Возбудитель лептоспироза

Лептоспироз – инфекционная природно-очаговая болезнь животных и человека, характеризующаяся кратковременной лихорадкой, анемией, желтухой, гемоглобинурией, геморрагическим диатезом, некрозом слизистых оболочек и кожи, атонией органов пищеварения, абортами. Болезнь может протекать бессимптомно. Возбудителя открыли Инад и Идо в 1914-1915 гг. Лептоспиры относят к семейству Leptospiraceae (leptos – тонкий, speira – виток, спираль) и роду Leptospira, который включает два вида: патогенный – L. interrogans и сапрофитный – L. biflexa. Патогенный вид представлен 183 сероварами, которые по составу антигенов объединены в 25 серологических групп.

В инфекционной патологии животных наибольшее значение имеют серогруппы Pomona, Tarassovi, Hebdomadis, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae, Canicola.

Морфология. Лептоспиры – спиралевидные бактерии диаметром 0,1-0,25 мкм и длиной от 6-15 до 30 мкм, образующие около 20 мелких, тесно расположенных первичных завитков и 1-2 вторичных, придающих клетке форму букв Г, S, С. Осевая нить состоит из двух фибрилл. В темном поле они имеют вид тонких серебристых нитей с утолщенными и загнутыми в виде крючков концами. У клеток некоторых штаммов концы прямые (бескрючковые лептоспиры).

Для лептоспир характерна активная подвижность, наиболее частый тип движения – вращательно-поступательный. Спор не образуют. Грамотрицательные, плохо окрашиваются анилиновыми красителями, по Романовскому-Гимзе – в красный цвет, фиксация мазка существенно изменяет их морфологию; используют также метод импрегнации серебром по Левадити.

Культивирование. Лептоспиры – хемоорганотрофные факультативно-анаэробные бактерии. Культивируют их в аэробных условиях при 28-30 ⁰С на специальных средах, содержащих 5-10 % сыворотки крови кролика или овцы, дистиллированную, водопроводную, колодезную воду или фосфатный буфер (рН 7,2-7,6): среды Уленгута, Терских, Ферворта-Вольфа, Любашенко и др. Рост лептоспир обычно проявляется через 7-20 суток, иногда 1-2 месяцев. Среда при этом не изменяется. На плотных средах (Кокса, ВГНКИ) образуют колонии S-, О- и R-форм. S-форма – типичная для патогенных штаммов, ее колонии прозрачные, в виде диска с ровным краем.

Биохимические свойства. Изучены недостаточно. Способность ферментировать углеводы отсутствует; образуют каталазу, оксидазу, липазу и другие ферменты.

Токсинообразование. Истинный экзотоксин лептоспиры не синтезируют. Они образуют эндотоксин и патогенные ферменты: гемолизин, фибринолизин, плазмокоагулазы, гиалуронидазы, липазы, лецитиназу, которые выделяются в результате лизиса лептоспир. Патогенностью обладают свежевыделенные штаммы лептоспир; при культивировании на питательных средах это свойство относительно быстро теряется.

Антигенная структура. Лептоспиры обладают белковым соматическим антигеном, определяющим их видовую специфичность. Поверхностные полисахаридные антигены служат критериями групповой и серовариантной дифференциации. Антигенные свойства лептоспир изучают в реакции микроагглютинации и методом иммуноадсорбционного анализа.

Устойчивость. В воде открытых водоемов патогенные лептоспиры сохраняются более 7-30 суток; будучи типичными гидрофилами, в почве, перенасыщенной водой, выживают до 280 суток; в свежем молоке – 8-24 ч; в почках убойных животных при 0-4 ⁰С – до 28 суток; в замороженном мясе погибают через 10 суток. Чувствительны к действию поваренной соли: в засоленном (4,8 % NaCl) мясе крупного рогатого скота погибают через 10 суток; в гипертоническом растворе поваренной соли (2,8 %) – через 15 минут.

При кипячении погибают моментально, при 56-58 ⁰С – в течение 25-30 минут. Быстро гибнут при высушивании и под воздействием прямого солнечного света. Растворы (0,1 % соляной кислоты, 0,5 % фенола) инактивируют лептоспиры за 20 минут.

Патогенность. К лептоспирозу наиболее восприимчивы крупный рогатый скот (серогруппы L. Pomona и L. Hebdomadis), свиньи (серогруппы L. Pomona и L. Tarassovi), овцы, лисицы, песцы, менее – лошади, козы, буйволы, верблюды, олени, ослы, собаки, кошки, куры. Болеет и человек. Основные носители лептоспир в природных очагах: серые и водяные полевки, ондатры, серые крысы, домовые мыши, землеройки.

К экспериментальному заражению наиболее чувствительны золотистые хомяки, крольчата-сосуны и молодые морские свинки.

Патогенез. Входными воротами возбудителя являются поврежденные кожа и слизистые оболочки. Патогенные лептоспиры благодаря активной подвижности преодолевают защитные барьеры организма и быстро проникают в кровь. Через 12 ч после заражения их обнаруживают в печени. Затем наступает генерализация инфекции (бактеремия), размножение и накопление лептоспир в печени, почках, надпочечниках, селезенке, легких, появляется лихорадка. К этому времени образуются антитела. Они инактивируют лептоспиры, и происходит их элиминация из крови и паренхиматозных органов. В почечных же клубочках и канальцах лептоспиры недоступны воздействию антител, где они активно размножаются и выделяются с мочой.

Лизис лептоспир сопровождается накоплением токсических веществ, под действием которых повышается проницаемость сосудов, лизируются эритроциты, происходят кровоизлияния, развиваются гематурия и желтуха, поражается нервная система. Токсикоз может привести к гибели животного.

Эпизоотологические данные. К лептоспирозу восприимчивы все сельскохозяйственные, домашние и многие виды диких животных, особенно в молодом возрасте, а также птица.

Различают природные и антропоургические очаги (связанные с деятельностью человека) лептоспироза. Источником инфекции в природных очагах являются грызуны, насекомоядные, парнокопытные, хищные млекопитающие многих видов, реже птицы, выделяющие патогенных лептоспир в окружающую среду с мочой.

В антропоургических очагах источником возбудителя являются больные и переболевшие животные-лептоспироносители (свиньи, крупный и мелкий рогатый скот, лошади, собаки, домовые мыши и крысы), а также больные люди, выделяющие возбудитель преимущественно с мочой и инфицирующие внешнюю среду, в том числе водоемы. У животных лептоспироз может протекать бессимптомно, а лептоспиры могут выделяться с мочой в течение многих месяцев.

Основные пути заражения – контактный и алиментарный. Лептоспироносителями являются мышевидные грызуны. Крысы и прочие грызуны являются основным резервуаром и источником распространения заболевания.

Лептоспироз – природноочаговая болезнь, ему свойственна энзоотичность; возникает в любое время года среди жвачных, в основном в пастбищный сезон.

Предубойная диагностика. У крупного рогатого скота появляется угнетенное состояние, связанность в движениях, отказ от корма, атония преджелудков, гемоглобинурия, желтушность слизистых оболочек, повышение температуры тела до 41,5 ⁰С, у некоторых животных отмечались некрозы кожи сосков вымени и стельные коровы абортируют.

У свиней заболевание чаще протекает бессимптомно или с проявлениями кратковременной лихорадки, абортов, рождением мертвых или нежизнеспособных поросят, некротическими поражениями на различных участках кожного покрова. При скрытой или атипичной форме болезни применяют бактериоскопию мазков-опечатков, серологические исследования (РНГА), разработанные Б.К. Ильясовым, Т.И. Тугамбаевым.

В целях своевременного выявления лептоспироза проводят исследование сыворотки крови животных в реакции микроагглютинации (РМА).

Послеубойная диагностика. Видимые слизистые оболочки желтушны, изредка кожа и подкожная клетчатка, сухожилия, фацсии – молочно-желтого цвета. Серозные оболочки также желтушны с точечными и полосчатыми кровоизлияниями. В грудной полости красновато-желтоватая жидкость.

Легкие иногда отечны с точечными кровоизлияниями под плеврой. Мышца сердца дряблая. Печень обычно дряблая, кровонаполненная, глинисто-желтая, неравномерно окрашена и на поверхности ее глинисто-желтые пятна различной величины. В корковом слое почек, эпикарде во многих случаях множественные точечные кровоизлияния, граница между корковым и мозговым слоями почек сглажена. У переболевших животных находят интерстициальный нефрит. Моча в мочевом пузыре красного цвета. Устанавливая дифференциальный диагноз, следует исключить пироплазмоз и острый некробактериоз печени. Эти болезни не сопровождаются некрозом кожи и слизистых оболочек.

При пироплазмозе, кроме того, селезенка бывает увеличенной, полнокровной, а при гнойном гепатите в печени множественные гнойные очаги.

Лабораторная диагностика. Материалом для исследования служат: кровь (лучше брать на 3-5 сутки болезни при повышенной температуре тела), моча, кусочки паренхиматозных органов, почка, транссудат из грудной и брюшной полостей, мочевой пузырь с содержимым, абортированный плод. Патологический материал отбирают не позже 2 ч после гибели животного. Мочу собирают при естественном мочеиспускании; в летнее время исследуется не позднее 3 ч после взятия.

Микроскопия. Исследуют мочу, цитратную кровь, тканевую суспензию из коркового слоя почки, печени, у плода – из всех органов. Микроскопию проводят в раздавленной капле с конденсором «темного поля». Типичные лептоспиры активно подвижны и имеют форму прямой или S-образной с загнутыми в виде крючков концами серебристо-белой нити. Лептоспир также можно обнаружить в срезах из органов после импрегнации серебром по методу Левадити.

Выделение культур. Материал засевают по 1-3 капли в 3-5 пробирок со специальной питательной средой и инкубируют при 28-30 ⁰С в течение 3 месяцев. Лептоспиры начинают размножаться через 7-20 суток, иногда через 1-2 и очень редко – 3 месяца. Наличие роста определяют темнопольной микроскопией раздавленных капель на 3, 5, 7, 10 сутки и далее через каждые 5 суток. При обнаружении размножения лептоспир делают пересев в 3-5 пробирок со свежей средой. Выделить культуры лептоспир удается не всегда.

Биологическая проба. Метод более чувствительный, чем культуральный; проводится с целью выделения и очистки культур лептоспир, определения их вирулентности и дифференциации от сапрофитов.

Заражают 20-30 суточных золотистых хомяков и крольчат-сосунов в возрасте 10-20 суток. Каждую пробу испытывают на двух животных; на 4-5 сутки убивают первого, на 14-16 сутки – второго, если оно не погибло раньше. Из сердца, печени и почек убитых или павших животных проводят посевы. Сыворотку крови убитого через 14-16 суток животного исследуют в реакции микроагглютинации (РМА) с лептоспирами 13 серогрупп. Положительная РМА в разведении 1:10 и выше указывает на наличие лептоспир в исследуемом материале.

Серологическое исследование. Для серологической диагностики лептоспироза используют РМА и реакцию агглютинации (РА). Пробы крови берут на 5-7 сутки болезни и при необходимости повторно через 7-10 суток. Следует учитывать, что антитела в крови у выздоровевших животных могут сохраняться до двух лет и более.

РМА ставят в лунках полистироловых пластин. В качестве антигенов используют живые 5-15 суточные культуры лептоспир 13-16 серогрупп. Сыворотку исследуют с антигенами каждой серогруппы в разведениях 1:5, 1:10 и т.д. до титра. В лунки вносят по 0,1 мл разведенной сыворотки и 0,1 мл антигена. Контролем служит антиген с физиологическим раствором (по 0,1 мл). Пластины выдерживают при 30 ⁰С в течение 1 ч; результаты учитывают в препаратах раздавленной капли в микроскопе с конденсором темного поля. Агглютинация проявляется в склеивании лептоспир и образовании «паучков», состоящих из нескольких десятков или сотен бактерий. Свободные концы лептоспир сохраняют подвижность. Оценивают реакции в крестах по 4-балльной системе: положительная – не менее чем два креста в разведении сыворотки 1: 50 и выше, при отсутствии агглютинации в контроле.

РА ставят на стеклянной пластинке, на которую наносят каплю разведенной 1:100 исследуемой сыворотки и добавляют равное количество антигена. Лептоспирозные антигены для РА выпускают шести серогрупп (для каждой отдельно), представляющие собой концентрированную взвесь лептоспир в альбуминовой питательной среде. При наличии в сыворотке специфических антител наступает агглютинация. Оценка результатов производится в крестах по 4 балльной системе. Положительной считают реакцию два креста и выше, сомнительной – один крест. Для выявления лептоспир в крови, моче, паренхиматозных органах, в тканях абортированного плода, в воде и почве предложен иммунофлюоресцентный метод.

Специфическая профилактика. После переболевания у животных формируется длительный и напряженный иммунитет. Он характеризуется серовариантной специфичностью, поэтому возможны реинфекции. Ведущее значение в невосприимчивости к лептоспирозу принадлежит антителам, и особенно IgG. Сыворотки иммунных животных обладают превентивными свойствами. Отмечается также длительное лептоспироносительство и вследствие этого инфекционный иммунитет.

Вакцинацию коров проводят за 1,5-4 месяцев, овец и свиноматок – за 1,5-2 месяцев до родов, колостральный иммунитет продолжается у телят до 2,5 месяцев, у ягнят и поросят до 3 недель.

Для активной иммунизации применяют депонированную поливалентную вакцину ВГНКИ против лептоспироза животных. Вакцину выпускают в двух вариантах: первый – из штаммов лептоспир серогрупп помона, тарассови, и ктерогеморрагия и каникола, второй – из серогрупп помона, тарассови, гриппотифоза и четырех сероваров группы гебдомадис. Иммунитет после вакцинации наступает через 14-20 суток и длится у молодняка до 6 месяцев, у взрослых животных – до одного года.

Для пассивной иммунизации и лечения больных животных ис­пользуют гипериммунную сыворотку против лептоспироза сельскохозяйственных и промысловых животных, которую получают из крови волов-продуцентов, иммунизированных культурами лептоспир. Иммунитет у животных, привитых сывороткой, сохраняется 10-14 суток.

Ветеринарно-санитарная оценка и мероприятия. Если есть дистрофические изменения в мускулатуре или ткани имеют желтушную окраску, туши и внутренние органы направляют на утилизацию. При отсутствии дистрофических изменений и желтушности мясные туши и внутренние органы направляют на проварку или перерабатывают на мясные хлеба. Измененные внутренние органы и кишечник утилизируют или уничтожают. Шкуру дезинфицируют.

Молоко больных животных обезвреживают кипячением и используют в корм животным в хозяйстве. Молоко клинически здоровых коров, сыворотка крови которых дает положительную РМА без нарастания титра, используют без ограничений.

Больных и подозрительных по заболеванию животных изолируют, лечат гипериммунными сыворотками и антибиотиками в дозах, указанных в наставлениях по применению.

Убой таких животных проводят на санитарной бойне с соблюдением мер личной профилактики. Послеубойную дезинфекцию помещения и инвентаря проводят 2-3 % раствором хлорной извести или формальдегидом, а затем смывают водой.