4. Возбудитель листериоза

Возбудитель листериоза был выделен в 1892 г. Лусетом от больных кроликов. В 1927 г. Пири выделил возбудителя при септическом заболевании крысоподобных грызунов с типичным поражением печени и назвал его «листерелла», но в 1940 г. он переименовал его на «листерия». По современной классификации листерии внесены в 14-ю секцию (неспорообразующие грамположительные палочки) отдельным родом Listeria, в котором насчитывается пять видов. Основной вид – Listeria monocytogenes – вызывает болезнь у животных многих видов и человека. Характеризуется септическими явлениями, поражением центральной нервной системы и генитального аппарата.

Морфология. L. monocytogenes – полиморфная палочка с закругленными концами, длиной 0,5-3 мкм и шириной 0,3-0,5 мкм; подвижная, грамположительная. В мазках палочки располагаются одиночно или под углом в виде римской цифры V. Спор и капсул не образуют.

Культивирование. Листерии – факультативные аэробы. Оптимум температурного роста на питательных средах с рН 7,2-7,4 составляет 36-38 ⁰С, однако они могут расти при температуре от 4 до 45 ⁰С. На МПА образуют мелкие, круглые, выпуклые, прозрачные колонии диаметром от 0,2-0,4 до 2 мм. В МПБ вызывают помутнение среды с образованием слизистого осадка. Листерии хорошо растут на печеночных средах с добавлением 1 % глюкозы и 2-3 % глицерина. В качестве элективных сред используют МПБ с 0,05 % теллурита калия или 0,01-0,02 % теллурита калия в водном растворе глицерина и растворе флоримицина или полимиксина. На кровяном агаре вокруг колоний образуется зона гемолиза.

Биохимические свойства. Листерии ферментируют с образованием кислоты без газа глюкозу, левулезу, рамнозу и салицин, замедленно сахарозу, крахмал и глицерин; некоторые культуры разлагают лактозу и мальтозу. Не ферментируют арабинозу, дульцит, инулин и сорбит, не образуют индола и сероводорода, не разжижают желатин, не восстанавливают нитраты в нитриты, дают положительную пробу на каталазу.

Антигенная структура. Листерии имеют два антигена: соматический (О) и жгутиковый (Н). Различают две серологические группы, объединяющие различные в антигеном отношении листерии. Установлено 16 основных серологических групп, многие из которых подразделены на подгруппы. Наиболее часто выделяют 1-й и 4-й серотипы листерий.

Устойчивость. Листерии устойчивы во внешней среде. В почвах они сохраняют жизнеспособность от 6 до 11 месяцев и размножаются в почвенных экстрактах; в воде – в течение года и более, в навозе – до 7 месяцев, в силосе – более года, в мясе – до года. В бульонных культурах листерии погибают при 100 ⁰С через 10-15 минут, при 55 ⁰С – через 1 ч; 2,5 % раствор формальдегида обезвреживает их через 20 минут, 2,5 % раствор гидроксид натрия, раствор хлорной извести с содержанием 2 % активного хлора – через 20 минут.

Патогенность. Листерии патогенны для многих видов млекопитающих, в том числе грызунов, хищных и копытных, а также для птиц. Из домашних животных листериоз зарегистрирован у овец, коз, свиней, крупного рогатого скота, лошадей, кроликов, кур, уток и др.

Патогенез. В зависимости от места внедрения возбудитель распространяется в организме различными путями: гематогенным, лимфогенным и нейрогенным. Различают септическую и нервную формы болезни. При септической форме, которую чаще наблюдают у молодняка, листерии заселяют все органы и ткани организма, вызывая дегенеративные изменения в паренхиматозных органах. Нервная форма проявляется менингоэнцефалитом, при этом листерии обнаруживают только в головном и спинном мозге. У беременных животных листерии вызывают гибель плодов и аборты. Патогенное действие листерии обусловливается за счет выделения экзо- и эндотоксинов.

Эпизоотологические данные. К листериозу наиболее восприимчив крупный и мелкий рогатый скот, лошади, свиньи, кролики, куры, гуси, индейки, утки, меньше пушные звери. К листериозу восприимчив и человек. Листериоз относится к сапрозоонозам (сапронозам), его возбудитель может существовать и как сапрофит, и как паразит.

Источник возбудителя – больные животные, выделяющие возбудителя с истечениями из носа, половых органов при абортах, с калом, мочой, молоком. Опасные распространители листериоза – мышевидные грызуны. Листериоз относится к сапронозам. Основной путь заражения – алиментарный, через поврежденную кожу, конъюнктиву, слизистую оболочку носовой и ротовой полостей.

Листериоз проявляется спорадически, реже эпизоотически; отмечена стационарность. Болезнь у овец носит сезонный характер (с января по май). Летальность при нервных формах листериоза может составлять 98-100 %, при септических формах – 50 %.

Предубойная диагностика. Клиническая картина проявляется в трех формах: в виде поражения центральной нервной системы (нейролистериоз); в виде желудочно-кишечной септицемии с поражением внутренних органов; в виде воспаления плаценты (плацентит) с последующим абортом. На мясокомбинатах постановка диагноза затруднена из-за сходства клинических признаков болезни с другими заболеваниями. У крупного рогатого скота и овец преобладает энцефалитная форма с выраженным симптомокомплексом энцефалита и менингита. У овец она напоминает ценуроз. У животных повышается температура тела, нарушается координация движений, угнетение сменяется буйством, наступают параличи отдельных частей тела (ушная раковина, верхнее веко, конечности), животное дрожит, овцы часто упираются головой или телом в стенку, у свиней, кроме перечисленных признаков, появляются кашель, истечение из носовой полости, одышка.

Послеубойная диагностика. Значительных изменений в тушах и внутренних органах не обнаруживают. Они проявляются очаговыми размягчениями мозгового вещества с образованием участков некроза (очаговый гнойный энцефаломиелит и менингит с наличием лимфоцитов, одноядерных макрофагов, нейтрофилов). В отдельных пораженных нейронах видны листерии. Мозговые оболочки в зоне поражения воспалены, вокруг кровеносных сосудов скопление лимфоцитов в виде клеточных муфт.

Септическая форма характеризуется обычно мелкоочаговым коагуляционным некрозом печени, почек, легких, селезенки, лимфатических узлов с явлениями кариорексиса и скоплением вокруг омертвевшей ткани гистиоцитов, лимфоидных элементов. На слизистых и серозных оболочках застойные явления, кровоизлияния. У свиней обнаруживают отек легких, катаральное воспаление слизистой желудка и тонких кишок.

Окончательный диагноз ставят на основании лабораторных исследований и биопробы животных.

Лабораторная диагностика. Диагноз ставят на основании выделения культуры листерии из патологического материала. Для исследования в лабораторию направляют трупы мелких животных или голову (головной мозг), паренхиматозные органы, абортированный плод и его оболочку. Для прижизненной диагностики направляют кровь или сыворотку крови с целью серологического исследования, а также истечения из половых органов абортировавших самок, молоко из пораженных долей вымени.

Вначале проводят микроскопическое исследование тонких мазков-отпечатков из патологического материала, которые окрашивают по Граму, а также с использованием флюоресцирующих антител.

Из органов и головного мозга делают обильные посевы на питательные среды, а также на кровяной агар и селективные среды. Рекомендуется часть материала сохранять в холодильнике в течение 30 суток для проведения повторных исследований при отрицательном результате первичного посева.

Посевы инкубируют в термостате при 37 ⁰С, ежедневно просматривая в первые 3-4 суток; при отсутствии роста наблюдение продолжают до 2 недель.

Выделенные культуры исследуют на подвижность, изучают их ферментативные свойства на средах Гисса, ставят пробу на каталазу. Проводят дифференциацию от возбудителя рожи свиней, делая высев на среду с метилротом или нейтральротом в смеси с метиленовым синим, листерии обесцвечивают среды, возбудитель рожи свиней – нет. Ставят капельную РА на стекле с поливалентной листериозной агглютинирующей сывороткой. Затем с помощью серогрупповых сывороток определяют серогруппу выделенной культуры.

Специфические свойства листерии проверяют также с помощью конъюнктивальной пробы на морских свинках или внутрикожной пробы на морских свинках или кроликах.

Конъюнктивальная проба. На конъюнктиву глаза морской свинки наносят 2 капли испытуемой бульонной культуры с последующим легким массажем век ватным тампоном. На 2-4 сутки вирулентные листерии вызывают гнойный кератоконъюнктивит. При внутрикожной пробе через 48 ч развивается воспаление с последующим некрозом участка кожи и образованием струпа (табл. 1).

Для типирования культур используют также листериозные бактериофаги, включающие два монофага L2A и L4A.

Таблица 1.

Дифференциальные признаки возбудителей листериоза и рожи свиней

Показатель	Листерии	Бактерии рожи
Подвижность	подвижны	неподвижны
Проба на каталазу	положительная	отрицательная
Салицин	разлагает	не разлагает
Индикаторные среды	обесцвечивает	не обесцвечивает
РА с позитивной листериозной сывороткой	положительная	отрицательная
Конъюнктивная проба на морских свинках	положительная	отрицательная

Серологическая диагностика. Сыворотку животных исследуют в РА и РСК. Для РА применяют два антигена (1 и 2 серогрупп), представляющие собой взвесь листерии, инактивированных кипячением. РА признается положительной при наличии агглютинации с оценкой не менее чем на два креста в разведениях сыворотки 1:200 для овец, коз и свиней, для лошадей и крупного рогатого скота 1:400, для кроликов 1:50.

Биологическая проба. Наиболее чувствительны белые мыши и кролики. Заражают внутрибрюшинно или внутривенно в дозе 0,3-0,5 мл суточной бульонной культуры.

Специфическая профилактика. Переболевшие животные приобретают иммунитет. С профилактической целью применяют сухую живую вакцину из штамма АУФ. После однократного ее введения у крупного рогатого скота, свиней и овец создается иммунитет продолжительностью до 1 года, у кроликов и норок – до 6 месяцев.

Листерии чувствительны к антибиотикам тетрациклинового ряда (окситетрациклин, хлортетрациклин), ампициллину.

Ветеринарно-санитарная оценка и мероприятия. Патологически измененные внутренние органы, кишки и кровь, а также головы от больных листериозом животных во всех случаях направляют на утилизацию с обработкой при температуре не менее 100 ⁰С или на проварку при этой же температуре в течение 1 ч.

Подлежат утилизации также туши со всеми внутренностями при дистрофических или других патологических изменениях в мускулатуре. При отсутствии патологических изменений тушу и внутренние органы выпускают для переработки на вареные и варено-копченые изделия или проваривают.

Молоко больных листериозом животных после пастеризации в течение 30 минут при 80 ⁰С можно использовать в пищу.

Листериоз птиц. Голову и пораженные органы утилизируют. Тушки и непораженные органы проваривают. Пух и перо уничтожают.

Помещение, в котором производился убой листериозных животных, дезинфицируют горячим (70 ⁰С) 3 % раствором едкой щелочи или раствором хлорной извести, содержащей не менее 2 % активного хлора. Инструменты обезвреживают погружением на 2 ч в 10 % раствор кальцинированной соды. Шкуры дезинфицируют в крепком рассоле, содержащем консерванты и антимикробные средства (кремнефтористый натр, медный купорос) по специальной прописи.