Дифференциация бруцелл

Вид бруцелл	Потреб-ность в С02	Образо-вание H2S	Рост в средах с красителями			Агглютинация моноспецифическими сыворотками			Лизис фагом Тб
			Основной фуксин (1:50000)	Тионин (1:25000)	А		М
В. melitensis	–	–	+	–	–		+	–
В. abortus	+	+	+	–	+		–	+
В. suis	–	+	–	+	+		–	–
В. ovis	+	–	+	+	–		–	–
В. neotomae	–	+	–	–	+		–	–
В. canis	–	–	–	+	–		–	–

Примечание. «+» – интенсивный рост; «–» – отрицательный рост.

Биопроба. Осуществляют на морских свинках (не менее двух), сыворотка которых в разведении 1:5 отрицательно реагирует в РА с бруцеллезным антигеном. На 15, 25 и 40 сутки после заражения берут кровь, из которой получают сыворотку и исследуют ее в пробирочной РА в титрах от 1:10 до 1:80. Результат считают положительным, если сыворотка реагирует в титре 1:10 и выше. Для выделения культуры морских свинок убивают и делают посевы из лимфоузлов, селезенки, печени и костного мозга.

Серологические методы. Применяют пробирочную реакцию агглютинации (РА), реакцию связывания комплемента (РСК), реакцию длительного связывания комплемента (РДСК), пластинчатую реакцию агглютинации с роз бенгал антигеном (роз бенгал проба – РБП) и кольцевую реакцию с молоком (КР).

РА ставят в объеме 1 мл с единым бруцеллезным антигеном для РА, РСК и РДСК. Сыворотки крови овец, коз, буйволов, оленей и собак исследуют в разведениях 1:25, 1:50, 1:100, 1:200; крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов – 1:50, 1:100, 1:200 и 1:400. РА считают положительной при наличии агглютинации с сыворотками крови крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов, начиная с разведения 1:100 (100 ME); овец, коз, буйволов, оленей и собак – с 1:50 (50 ME) с оценкой не менее чем на два креста. Сомнительной – при наличии агглютинации только в разведении 1:50 (50 ME) с сыворотками крови крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов и 1:25 (25 ME) – с сыворотками овец, коз, буйволов, оленей и собак с оценкой не менее чем на два креста.

РСК – специфичный и высокочувствительный метод диагностики бруцеллеза животных. Ее показания более постоянны и сохраняются дольше: комплементсвязывающие антитела появляются позже, чем агглютинины. Эта реакция позволяет выявить большее количество больных в стадах с давней инфекцией. РСК применяют при диагностике бруцеллеза у вышеперечисленных видов животных, а также свиней.

РДСК – более чувствительный тест, чем РСК. При инфекционном эпидидимите баранов используют только РДСК с овисным антигеном. РСК и РДСК считают положительными при задержке гемолиза на 2-4 креста в одном или двух разведениях (1:5 или 1:10) и полном гемолизе эритроцитов в контрольной пробирке (без антигена). Сомнительной – при задержке гемолиза с оценкой в один крест.

РБП используют для исследования сывороток крови крупного ротатого скота, овец, коз, лошадей, свиней, буйволов, верблюдов и оленей. Реакцию проводят при температуре 18-30 ⁰С с бруцеллезным антигеном, окрашенным бенгальским розовым, на пластинках с лунками. При положительной реакции в течение 4 минут появляются мелкие или крупные хлопья агглютината розового цвета.

КР ставят с цельным свежим или консервированным формалином молоком коров и антигеном – взвесью убитых бруцелл, окрашенных в синий цвет гематоксилином. При наличии в молоке специфических антител происходит агрегация антигена, образовавшийся комплекс адсорбируется сливками молока и поднимается с ними вверх, образуя четкое, окрашенное кольцо. Проводится реакция в уленгутовских пробирках, в которые вносят по 0,05 мл антигена, добавляют 1 мл молока и содержимое тщательно смешивают, выдерживают при 37-38 ⁰С в течение 1 ч. Результаты учитывают визуально и оценивают в крестах: +++ — четко выраженное синее кольцо в верхней части молока, остальная часть молока белая; ++ – достаточно выраженное синее кольцо, столбик молока синеватого цвета. Пробы, давшие реакцию с оценкой три и два креста, считают положительными. Эта реакция показательна для проверки благополучия стад (ферм) по бруцеллезу крупного рогатого скота и молока на рынках.

Для выявления бруцелл непосредственно в патологическом материале, а также в объектах окружающей среды предложен прямой метод иммунофлюоресценции (РИФ); непрямой метод позволяет обнаружить антитела в сыворотке крови больных, переболевших или вакцинированных животных.

Аллергический метод. Для аллергической диагностики бруцеллеза овец, коз и свиней используют бруцеллин ВИЭВ, изготовляемый из неагглютиногенного и авирулентного штамма В. abortus В-1. У овец и коз применяют пальцебральную пробу, свиньям препарат вводят внутрикожно с наружной стороны ушной раковины. У животных, больных бруцеллезом, на месте введения бруцеллина развивается воспалительная реакция.

Специфическая профилактика. Противобруцеллезный иммунитет формируется медленно в две фазы: первая фаза – инфекционный, или нестерильный, иммунитет; вторая – постинфекционный, или стерильный, иммунитет. Нестерильный иммунитет обусловлен присутствием возбудителя в организме.

В сыворотке крови больных животных накапливаются вначале IgM, затем IgG, а также неполные (IgA и IgG) антитела. Роль антител в механизме защиты при бруцеллезе неэффективна: присутствие их в организме не препятствует бактериемии. Но они имеют большое диагностическое значение. В первой фазе отмечается угнетение макрофагальной реакции и фагоциты не способны переваривать бруцелл, что и приводит к диссеминации возбудителя по всему организму.

Иммунитет при бруцеллезе клеточный и обеспечивается Т-системой лимфоцитов. Для бруцеллеза характерно развитие гиперчувствительности замедленного типа (аллергия). Инфекционный иммунитет переходит в постинфекционный постепенно и сопровождается освобождением организма от возбудителя, в результате чего может наступить самовыздоровление.

Для специфической профилактики бруцеллеза предложены живые вакцины. Применяют живую вакцину из штамма 19 В. abortus. Этот штамм выделили в 1923 г., в процессе десятилетнего пассирования культуры на картофельном агаре, т.е. был селекционирован иммуногенный мутант. Вакцинация профилактирует аборты и распространение бруцеллеза в стаде, однако сопровождается длительной серопозитивностью привитых животных, что не вполне удовлетворяет практику.

У нас в стране кроме указанной вакцины широко применяют сухую живую вакцину из слабоагглютиногенного штамма 82 . abortus против бруцеллеза крупного рогатого скота; живую вакцину из штамма Рев-1 бруцелл вида мелитензис – против бруцелеза мелкого рогатого скота. Во ВГНКИ разработана инактивироанная адъювант-вакцина из штамма В. abortus KB 17/100, которая создает напряженный иммунитет у крупного рогатого скота, не обладает реактогенными и абортогенными свойствами, не вызывая при этом образования S-аглютининов у вакцинированных животных, что важно для серологической диагностики.

Ветеринарно-санитарная оценка и мероприятия. Туши от убоя животных всех видов с клиническими признаками или патологоанатомическими изменениями бруцеллезного характера обезвреживают проваркой.

Санитарную оценку мяса и других продуктов убоя животных, не имеющих клинических признаков и патологоанатомических изменений, свойственных бруцеллезному процессу, но дающим положительные реакции на бруцеллез, проводят в соответствии с действующей инструкцией по борьбе с данным заболеванием (с учетом вида животных и видовой принадлежности бруцелл). Кость при обвалке мяса всех видов животных с клиническими или патологическими признаками бруцеллеза направляют на вытопку пищевых жиров или производство сухих животных кормов.

Говяжьи и свиные уши и ноги, говяжьи губы и свиные хвосты предварительно перед проваркой должны быть ошпарены или опалены, бараньи и свиные головы опалены, желудки ошпарены. Вымя от коров, овец и коз, положительно реагирующих на бруцеллез, но не имеющих клинических признаков бруцеллеза и патологических изменений в туше и органах, выпускают после обезвреживания проваркой. При наличии же клинических признаков бруцеллеза или патологоанатомических изменений бруцеллезного происхождения вымя направляют на утилизацию.

Кишки, пищеводы и мочевые пузыри, полученные от животных, положительно реагирующих на бруцеллез, выдерживают в 1 % солевом растворе, содержащем 0,5 % соляной кислоты, в течение 48 ч при 15-20 ⁰С и жидкостном коэффициенте 1:2. При получении этих органов от убоя животных, имеющих клинические признаки бруцеллеза, их направляют на утилизацию.

Кровь от животных, клинически больных и положительно реагирующих при исследовании на бруцеллез, разрешается использовать на изготовление кормовой муки или технических продуктов.

Шкуры, рога и копыта, полученные от убоя всех видов животных, клинически больных бруцеллезом и реагирующих на бруцеллез, выпускают после дезинфекции.

Молоко от коров, положительно реагирующих на бруцеллез, перерабатывают на топленое молоко или кипятят в течение 5 минут, после чего используют только внутри хозяйства. Молоко, полученное от коров оздоравливаемого стада, запрещается направлять на рынок, в столовые и на маслозавод. Его обезвреживают путем пастеризации в хозяйстве при 70 ⁰С в течение 30 минут или при 85 ⁰С – 20 с. Если нет пастеризатора, то молоко кипятят, после чего вывозят на маслозавод или используют внутри хозяйства.

При поступлени на рынок молока полученное от коров, положительно реагирующих на бруцеллез, его проверяют кольцевой пробой. Если получена положительная или сомнительная реакция, то молоко в продажу не допускают. Его уничтожают в лаборатории ветсанэкспертизы рынка в присутствии владельца и сообщают об этом главному ветеринарному врачу района (города), откуда поступило молоко. Об уничтожении молока и молочных продуктов составляют акт в двух экземплярах, один из которых выдается владельцу, другой остается в документах лаборатории.