- •Предмет, завдання і методологія біотехнології рослин
- •Історія розвитку методу культури клітин, тканин та органів рослин
- •Організація і обладнання біотехнологічної лабораторії
- •Посуд, інструменти і матеріали
- •Миття посуду
- •Методи стерилізації посуду
- •Методи стерилізації інструментів
- •Контрольні запитання і завдання
- •Живлення культури тканин
- •Мінеральне живлення
- •Вуглеводневе живлення
- •Вітаміни
- •Стимулятори росту
- •Фітогормони
- •Рослинні екстракти
- •РН – середовища
- •Приготування живильних середовищ
- •Стерилізація живильних середовищ
- •Стерилізація рослинного матеріалу
- •Контрольні запитання і завдання
- •Культура ізольованих органів і зародків
- •Контрольні запитання і завдання
- •Культура ізольованих клітин і тканин
- •Культура калюсних тканин
- •Особливості калюсних клітин
- •Генетика калюсних клітин
- •Культура клітинних суспензій
- •Культивування ізольованих клітин
- •Методи оцінки результатів
- •Мікроклональне розмноження рослин
- •Методи мікроклонального розмноження рослин
- •Етапи мікроклонального розмноження рослин
- •Контрольні запитання і завдання
- •Кріоконсервація клітин рослин
- •Контрольні запитання і завдання
- •Клітинна селекція
- •Спонтанні та індуковані мутанти
- •Контрольні запитання і завдання
- •Культура рослинних клітин і речовини вторинного синтезу
- •Фактори, які впливають на вихід продуктів
- •Компоненти середовища
- •Фізичні фактори
- •Селекція і відбір
- •Утворення вторинних речовин в культурах рослинних тканин
- •Глікозиди
- •Контрольні запитання і завдання
- •Культура ізольованих протопластів і соматична гібридизація
- •Виділення і очистка ізольованих протопластів картоплі
- •Виділення протопластів із мезофілу листка
- •Виділення протопластів із культури клітин
- •Культивування ізольованих протопластів
- •Умови культивування протопластів
- •Злиття ізольованих протопластів
- •Селекція соматичних гібридів
- •Генетична трансформація
- •Вектори для генетичної трансформації рослин
- •Плазміди агробактерій як вектори для трансформації
- •Вектори на основі днк-вмісних вірусів рослин
- •Методи перенесення чужинних генів у рослини
- •Трансгени і екологія
- •Контрольні запитання і завдання
- •Практичний курс Приготування і стерилізація живильних середовищ
- •Таблиця 8
- •Робота 1. Приготування маточних розчинів для середовища Мурасиге і Скуга (мс)
- •Робота 2. Приготування середовища Мурасиге і Скуга (мс). Стерилізація середовища автоклавуванням
- •Робота 3. Стерилізація рідких середовищ пропусканням через бактеріальний фільтр (холодна стерилізація)
- •Стерилізація рослинного матеріалу Робота 4. Стерилізація насіння і вирощування асептичних рослин
- •Робота 5. Стерилізація бульб, коренеплодів і кореневищ
- •Робота 6. Стерилізація листків
- •Робота 7. Стерилізація меристем
- •Калюсна культура Робота 8. Отримання первинного калюсу із різних експлантатів асептичних рослин
- •Робота 9. Дослідження явища фізіологічної полярності
- •Робота 10. Отримання перевивної калюсної культури
- •Робота 11. Дослідження впливу співвідношення ауксин:цитокінін у живильному середовищі на ріст калюсної тканини та її тип
- •КлітиннА суспензіЯ Робота 12. Отримання клітинної суспензії з калюсної тканини
- •Мікроклональне розмноження рослин Робота 13. Мікроклональне розмноження рослин живцями
- •Робота 14. Стебловий органогенез із листкових дисків тютюну
- •Таблиця 15 Середовища для мікроклонального розмноження тютюну та моркви (1 л середовища)
- •Робота 15. Ризогенез із листкових дисків тютюну
- •Робота 16. Прямий ембріогенез
- •Хід роботи
- •Робота 17. Непрямий ембріогенез
- •Культура ізольованих протопластів вищих рослин Робота 18. Виділення і культивування ізольованих протопластів вищих рослин
- •Словник термінів
- •Список літератури
Робота 7. Стерилізація меристем
Мета роботи: підібрати оптимальні умови стерилізації апікальних меристем суниці, отримати стерильну культуру суниці.
Матеріали і обладнання: рослини суниці, мильний розчин, концентрований розчин “Білизни”, стаканчики для стерилізуючих розчинів, мірний циліндр, стерильна дистильована вода, пробірки з живильним середовищем МС з додаванням 0,8 мг/л БАП, чашки Петрі зі стерильним фільтрувальним папером, стерильні чашки Петрі, нейлон, пінцети, очні пінцети, скальпелі, очні скальпелі, леза, препарувальні голки, спиртівка, спирт, бінокулярний мікроскоп, ламінар-бокс.
ХІД РОБОТИ
1. Приготувати розчини “Білизни” різної концентрації ( робота 4 ).
2. З вусиків суниці зрізати верхівки довжиною 1,5-2 см.
3. Експлантати промити проточною, а потім мильною водою.
4. Очистити бруньки від покривних листків і лусок і загорнути у нейлонові мішечки по 10 штук у кожний.
5.Мішечки з рослинним матеріалом помістити у стаканчики з стерилізуючими розчинами відповідної концентрації на відповідний час ( табл. 11 ).
6. Промити рослинний матеріал у трьох порціях стерильної дистильованої води (по 5 хв у кожній порції).
7. Стерильним пінцетом перенести один мішечок до стерильної чашки Петрі. Акуратно його розгорнути пінцетами.
Таблиця 11
№ п/п |
Концентра-ція “Білизни” |
Тривалість стерилізації (хв) |
Загальна кількість експланта-тів (штук) |
Кількість асептичних експлантатів через 6 днів |
Кількість рослин-регенеран-тів через 30 днів | |
штук |
% | |||||
|
1:4 |
10 15 30 |
|
|
|
|
|
1:3 |
10 15 30 |
|
|
|
|
|
1:2 |
10 15 30 |
|
|
|
|
|
1:1 |
10 15 30 |
|
|
|
|
8. Стерильним пінцетом перенести один експлантат у стерильну чашку Петрі, яка встановлена на столику бінокулярного мікроскопа, який попередньо стерилізувався УФ променями у ламінар-боксі.
9. Під бінокулярним мікроскопом, притримуючи верхівку пагона очним пінцетом, очним скальпелем відділити покривні листки і листкові примордії. Меристему з одним-двома листковими примордіями і субапікальною тканиною відділити стерильним лезом. Цю операцію проводять із кожним експлантатом.
10. Ізольовану меристему стерильним пінцетом перенести на живильне середовище.
11. Пробірки з рослинним матеріалом культивувати при температурі 23-260С, освітленні 2-3клк, 16-годинному фотоперіоді, відносній вологості 70-75%.
12. Через 4-6 днів перевірити стерильність рослинного матеріалу. Через 25-30 днів мають вирости рослинки суниці.
Результати представити у таблиці 11.
Як рослинний матеріал у даній роботі можна використовувати пагони смородини, гвоздики, гербери, троянди, хризантеми, антуріума та інших рослин.