Робота 5. Стерилізація бульб, коренеплодів і кореневищ

Для отримання експлантатів використовують здорові бульби, коренеплоди або кореневища.

Мета роботи: оволодіти методикою стерилізації обпалюванням бульб, коренеплодів і кореневищ, отримати первинний калюс.

Матеріали і обладнання: бульби картоплі, мильний розчин, чашки Петрі з калюсним середовищем №1 ( табл.8 ), пінцети, скальпелі, пробкові свердла, спирт, спиртівка, ламінар-бокс, парафілм.

ХІД РОБОТИ

1. Бульби вимити проточною водою.

2. Обчистити бульби від шкірки.

3. Бульби вимити у мильному розчині, а потім ополоснути дистилятом.

4. У боксі бульбу на кілька секунд занурити у спирт, дати йому стекти і обпалити бульбу у полум’ї спиртівки.

5. Покласти обпалену бульбу у стерильну чашку Петрі.

6. Притримуючи картоплину стерильним пінцетом, скальпелем відрізати частину бульби.

7. Стерильним пробковим свердлом вичленити циліндр з бульби.

8. Циліндр тканини порізати скальпелем на диски, які помістити на середовище для калюсогенезу. Два крайні диски відкинути.

9. Чашки Петрі підписати і закрити парафілмом.

10. Чашки з експлантатами культивувати у термостаті без освітлення при 25⁰+1⁰С.

Як рослинний матеріал в даній роботі можна використати бульби топінамбура, коренеплоди моркви, кореневища женьшеню.

Робота 6. Стерилізація листків

Мета роботи: підібрати оптимальні умови стерилізації листків картоплі, отримати стерильну калюсну культуру.

Матеріали і обладнання: рослини картоплі, вирощені в теплиці, мильний розчин, 70%-й розчин спирту, стаканчики зі стерильною дистильованою водою, концентрований розчин “Білизни”, стаканчики для стерилізуючих розчинів, чашки Петрі зі стерильним калюсним середовищем №1 ( табл.8 ), чашки Петрі зі стерильним фільтрувальним папером, стерильні чашки Петрі, пінцети, скальпелі, спиртівка, спирт, ламінар бокс, парафілм.

ХІД РОБОТИ

1. Приготувати розбавлені розчини “Білизни”( робота 4 ).

2. Інтактні листки картоплі промити у проточній воді, витримати 1-2 хв. у мильному розчині, промити проточною, а потім дистильованою водою.

3. Промиті листки у боксі занурити у 70%-й етанол на 10-15 сек.

4. Рослинний матеріал помістити у стерилізуючий розчин з відповідною концентрацією “Білизни” і витримати відповідний час ( табл. 10 ).

5. Рослинний матеріал відмити у трьох порціях стерильної дистильованої води (витримати по10 хв.).

6. Для підсушування стерильним пінцетом перенести рослинний матеріал у стерильну чашку Петрі з фільтрувальним папером.

7. Стерильний листок розчленити на експлантати по 5-10 мм, які помістити на живильне середовище.

8. Чашку підписати і закрити парафілмом.

9. Чашки з рослинним матеріалом культивувати у термостаті без освітлення при 25⁰+1⁰С.

10. Через 4-7днів визначити оптимальні умови стерилізації. Життєздатність культури оцінити через 25-30 днів: по периметру життєздатного експлантата утвориться калюс.

Результати досліджень представити у таблиці 10.

Таблиця 10

№ п/п	Концентра-ція розчину “Білизни”	Тривалість стерилізації (хв)	Загальна кількість експлан-татів	Кількість асептичних експлантатів через7 днів		Кількість життєздатних експлантатів через 30 днів
				штук	%	штук	%
1 2 3	1:4	10 15 30
4 5 6	1:3	10 15 30
7 8 9	1:2	10 15 30
10 11 12	1:1	10 15 30