Вопрос 5. Возбудитель холеры – холерный вибрион (Vibrio cholerae)
Vibrio cholerae - вид бактерий рода Vibrio, семейства Vibrionaceae, представители которых вызывают холеру и другие острые кишечные инфекции. Различают 2 биовара: Vibrio cholerae cholerae и Vibrio cholerae eltor.
Морфологические признаки.
Вибрионы - прямые или изогнутые грамотрицательные палочки. Подвижные (монотрихи). Спор не образуют. В лабораторных культурах могут иметь вид кокков, под действием пенициллина образуют L-формы.
Чистая культура V.cholerae. Окраска по Граму
Культуральные признаки.
Vibrio cholerae - факультативные анаэробы. Оптимум роста (в отличие от других бактерий) при pH 8,5-9,0. Растут на простых питательных средах: щелочной агар, пептонная вода. На плотных средах образуют прозрачные колонии с ровными краями, маслянистые, в проходящем свете голубоватые. Колонии старых культур желтеют и грубеют. На жидких средах Vibrio cholerae дают пленку.
Антигенная структура. Холерные вибрионы обладают О- и Н-антигенами.
По О-антигену выделяют свыше 200 сероваров. Vibrio cholerae cholerae и Vibrio cholerae eltor относятся к О1 серогруппе. О-антиген состоит из 3-х субъединиц: А, В, С. Сочетания субъединиц АВ называется сероваром Огава, АС – Инаба, АВС – Гикошима. Вибрионы, неагглютинирующиеся О-сыворотками, называются неаглютинирующимися вибрионами (НАГ-вибрионы), у них О-антиген либо утрачивается, либо меняет свою структуру. В последнее время выделяются вибрионы О139 серогруппы, которые принято считать возбуди телями эпидемической холеры.
Н-антигены являются общими для большинства вибрионов.
Биохимические признаки.
Холерные вибрионы биохимически очень активны.
Диагностическими признаками являются:
- способность разлагать маннозу и сахарозу и не разлагать арабинозу,
- разжижать желатину с образованием «воронки», свернутую сыворотку и молоко,
- способность к гидролизу казеина,
- способность свертывать плазму кролика,
- разлагать белки до аммиака и индола.
Факторы патогенности.
1. экзотоксин (холероген) - обусловливает нарушение водно-солевого обмена, цитотоксическое действие, вызывающее гибель эпителия тонкой кишки,
2. эндотоксин - вызывает угнетение фагоцитоза, понижение кровяного давления; инфекционно-токсические явления,
3. пили - адгезия к клеткам слизистой оболочки,
4. муциназа – разжижает слизь и обеспечивает достижение поверхности эпителия,
5. нейраминидаза – усиливает связь холерогена с эпителием слизистой оболочки кишечника.
6. фибринолизин, гиалуронидаза - ферменты агрессии.
Патогенез.
Холера – острая особо-опасная карантинная кишечная инфекция, характеризуется поражением тонкой кишки, нарушением водно-солевого обмена (диареей, резким обезвоживанием организма) и интоксикацией. Антропоноз.
Источник инфекции – больной человек или вибриононоситель.
Резервуаром холерного вибриона в природе является вода.
Механизм заражения – фекально-оральный, среди путей передачи преобладает водный, однако возможны алиментарный и контактно-бытовой пути.
Холерный вибрион неустойчив к нагреванию, действию солнечных лучей, дезинфицирующих веществ. Чувствителен к кислотам.
Входные ворота инфекции – слизистая оболочка тонкого кишечника.
Холерный вибрион проникает в слизистую оболочку тонкой кишки, прикрепляется к энтероцитам, колонизирует слизистую оболочку и выделяет токсины, которые обусловливают клинические симптомы болезни.
Инкубационный период – от нескольких часов до 5 дней (в среднем -2-3 дня).
В течении болезни выделяют 3 этапа:
Холерный энтерит – характеризуется болями в животе, диареей. Стул носит характер «рисового отвара» (обильные бесцветные испражнения со сладковатым запахом),
Холерный гастроэнтерит – диарея и рвота, уменьшение диуреза, судороги,
Холерный алгид – снижение температуры тела, цианоз, нарушение водно-солевого обмена, ослабление сердечно-сосудистой деятельности. При неправильном лечении летальность может достичь 60%
Микробиологическая диагностика проводится в лаборатории особо-опасных инфекций.
Особенности диагности:
- ориентировочный диагноз должен быть поставлен через 2 час. после получения материала, окончательный – не позднее чем через 36-48 час.
- для исключения возможной ошибки все методы должны быть повторены трижды.
Материал для исследования: фекалии, рвотные массы, пищевые продукты, вода.
Методы диагностики:
1. бактериоскопический (ориентировочный) – готовят препарат «висячая капля», в котором определяют наличие подвижных вибрионов при темнопольной микроскопии – первый ответ.
2. бактериологический (основной) – материал засевают на пептонную воду и щелочной агар.
Через 5-6 час на пептонной воде появляется голубоватая пленка, из нее:
- делают препарат «висячая капля»,
- ставят реакцию агглютинации на стекле с О1-сыворотками,
- ставят нитрозоиндоловую пробу (добавляют несколько капель серной кислоты и в положительном случае появляется розовое окрашивание из-за образования нитрозоиндола) – второй ответ,
- пересевают на 2-ю пептонную воду.
На щелочном агаре колонии появляются через 10-12 час. Идентификацию проводят по 5-6 однотипным колониям на основании:
- чувствительности к холерному фагу,
- агглютинабельности противохолерной О1-сывороткой и типовыми сыворотками Огава и Инаба,
- гемолитических и биохимических свойств,
- реакции Фогеса-Проскауэра (вибрионы выращивают в глюкозо-фосфатном бульоне, затем добавляют альфа-нафтол в р-ре щелочи; при наличии ацетилметилкарбинола наблюдается рубиново-красное окрашивание)
- гематоксилинового теста (культуру выращивают на бульоне с глюкозой, гексамином (уротропином) и индикатором бромтимоловым синим. В положительном случае цвет среды меняется с зеленого на желтый)
3. для экспресс-диагностики холеры используют реакцию иммобилизации, РИФ, ПЦР.
Реакция иммобилизации – вибрионов холерными сыворотками и типовыми холерными фагами – капли испражнений или материала с поверхности пептонной воды обрабатывают холерной О1-сывороткой, сыворотками Огава и Инаба или типовыми холерными фагами. Готовят из них препараты «висячая капля», которые изучают в темном поле. В положительном случае вибрионы перестают двигаться через 3-5 мин.
Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) – мазки из исследуемого материала обрабатывают флюоресцирующей противохолерной сывороткой и изучают в люминесцентном микроскопе. В положительном случае обнаруживаются вибрионы с желто-зеленым светящимся ободком.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – обнаружение ДНК возбудителя в материале.
Серодиагностика – применяется для ретроспективной диагностики, выявления носителей и оценки напряженности иммунитета..
Материал – сыворотка крови. Реакции – реакция агглютинации и реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). Диагностический титр антител 1:80-1:320.
Лечение проводят в двух направлениях:
Восполнение потери жидкости и электролитов введением изотонических солевых растворов,
Антибиотикотерапия – тетрациклины, хлорамфеникол, а также фторхинолоны.
Профилактика
Выявление больных и их лечение,
Выявление носителей и их санация,
Карантинные мероприятия.
Специфическая профилактика по эпидемическим показаниям холерной вакциной, которая состоит из холероген-анатоксина и химического О-антигена сероваров Огава и Инаба