Вопрос 2. Реакция преципитации и ее виды.
Реакция преципитации (РП)– это формирование и осаждение из раствора комплекса растворимого молекулярного антигена (преципитиногена) с антителами (преципитинами) в виде помутнения, называемогопреципитатом. Он образуется при смешивании антигенов и антител в эквивалентных количествах; избыток одного из них снижает уровень образования иммунного комплекса.
Для РП используются коллоидные растворы антигена. Преципитиноген – это молекулярный продукт разрушенных клеток микроорганизмов, например, бактериальный белок, полисахарид, вытяжки из инфицированных органов. Степень разведения преципитиногена обычно велика – 1: 1млн и более.
Преципитирующие сыворотки изготавливают централизованно путем гипериммунизации животных (кроликов, коз, ослов) взвесью бактерий, фильтратами бульонных культур, солевыми экстрактами микроорганизмов или сывороточными белками. Титр преципитирующей сыворотки, в отличие от титра других диагностических сывороток, определяется максимальным разведением антигена, который дает преципитацию с этой сывороткой. Преципитирующие сыворотки выпускаются с титром не ниже 1:100000.
Существует несколько модификаций постановки реакции преципитации:
1. Реакция кольцепреципитации – наслаивание раствора антигена на преципитирующую сыворотку в специальных преципитационных пробирках.
Если в качестве антигенов в реакции кольцепреципитации использовать прокипяченные и профильтрованные экстракты органов и тканей, то такая реакция называется реакцией термопреципитации (реакция Асколи при сибирской язве).
Недостатками реакции кольцепреципитации являются нестойкость преципитата (кольца), который исчезает даже при легком встряхивании, а также невозможность установить количество разных антигенов, участвующих в формировании преципитата.
2. Реакция преципитации в гелеоснована на взаимодействии гомологичных антител и антигенов в агаровом геле с образованием видимых полос преципитации. Антитело и антиген в результате встречной диффузии в гель образуют макромолекулярные иммунные комплексы в виде белых мутных полос.
При наличии в растворе нескольких антигенов они диффундирую независимо друг от друга, при этом количество полос равно количеству антигенов. Серологически родственные антигены образуют полосы преципитации, сливающиеся друг с другом, полосы разнородных антигенов перекрещиваются.
Антиген, используемый в реакции, должен быть концентрированным, а сыворотки – с высоким титром антител. В качестве геля используют прокипяченный и остуженный 0,8-1% раствор специального агара.
Вопрос 3. Реакция гемолиза.
Реакция гемолиза – это растворение эритроцитов при взаимодействии с антителами-гемолизинами в присутствии комплемента.
Гемолизины получают путем иммунизации кроликов эритроцитами барана, полученная таким образом сыворотка называется гемолитической. Комплемент – это белковые фракции сыворотки крови морской свинки.
Реакция гемолиза проявляется растворением (гемолизом) эритроцитов барана, при этом взвесь эритроцитов в физиологическом растворе превращается в прозрачную ярко-красную жидкость (лаковая кровь).
АГэ+АТгс+К= гемолиз