Вопрос 4. Реакция связывания комплемента.

Реакция связывания комплемента (РСК) применяется для обнаружения антител в сыворотке крови или для выявления антигена в материале от больного. Она основана на том, что при взаимодействии антигена с антителом, образуется комплекс, который адсорбирует (связывает) комплемент. Однако эта реакция происходит в пробирках без видимых проявлений. Для обнаружения результатов реакции в качестве индикаторной системы используют реакцию гемолиза.

Таким образом, в РСК используют две системы: специфическую, в которой определяют возможность образования иммунного комплекса антиген-антитело-комплемент, и индикаторную (гемолитическую) систему, которая состоит из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки.

Проведение реакции включает две фазы: в первой – проводят раздельную инкубацию специфического и индикаторного комплексов. Во второй фазе смешивают их, что позволяет определить локализацию комплемента по наличию или отсутствию гемолиза эритроцитов.

Если в сыворотке пациента присутствуют антитела, происходит связывание комплексом антиген-антитело комплемента и реакция гемолиза будет отрицательной. Если антитела отсутствуют в сыворотке пациента, комплемент свяжется гемолитической системой, результатом чего будет гемолиз.

Схема РСК с сывороткой больного
Схема РСК с сывороткой здорового

Вопрос 5. Вакцины: классификация, применение.

Вакцины – это биопрепараты, приготовленные из микробов или их антигенов, которые применяют для профилактики инфекционных заболеваний. На введение вакцины организм отвечает формированием искусственного активного иммунитета, обусловленного выработкой антител или клонов лимвоцитов.

Выделяют следующие типы вакцин:

-1) Живые, приготовленные из живых аттенуированных штаммов микроорганизмов. Вакцинные штаммы способны размножаться в организме человека и вызывать бессимптомную или слабо выраженную инфекцию. Живые вакцины обеспечивают высокую напряженность, прочность и длительность иммунитета (от 1 года до 7 лет), их вводят в организм однократно и простыми методами: через рот, через верхние дыхательные пути, накожно, подкожно.

По способу получения вакцинных штаммов,живыевакцины подразделяют на: аттенуированные, дивергентные и векторные.

Аттенуированные штаммы (ослабленные) для вакцины возникают под воздействием необычной для микроба температуры культивирования, изменения состава питательной среды, антибиотиков, пассирования через организм животных; такими способами получены вакцины для профилактикитуберкулеза, чумы, туляремии, сибирской язвы, бруцеллеза, Ку-дихорадки.

Дивергентные вакцины получены путем подбора генетически близких условно-патогенных микроорганизмов, имеющих общие антигены с патогенными микробами. Таким путем полученаоспенная, сыпнотифозная, туберкулезная вакцины.

Векторные вакцины получают методом генной инженерии, встраивая в геном вакцинного штамма ген чужеродного антигена. Например,вакцина против гепатита Вполучена в результате введения в оспенную вакцину гена, кодирующегоHBsантиген вируса гепатита В.

- 2) Убитые (корпускулярные), которые содержат инактивированные разными способами микроорганизмы.

Для инактивации применяют способы, незначительно изменяющие их антигенную структуру:

- нагревание при температуре 56-58^о 1 час,

- добавление формалина, фенола, ацетона, спирта,

- облучение ультрафиолетовыми лучами,

- обработку ультразвуком.

Эффективность убитых вакцин ниже, чем живых. Их вводят обычно подкожно 2-3 раза с интервалом в 10 дней с последующей ревакцинацией через 1 нед-3года. Убитые вакцины применяют для профилактики брюшного тифа, коклюша, лептоспироза.

- 3) химические (субклеточные и субвирионные) – приготовлены из высокоочищенных антигенов микробных клеток, которые извлекаются химическими методами, например, методом ферментативного переваривания с помощью трипсина с последующим осаждением спиртом. Выделенные антигены осаждают на адъювантах (гидроокись алюминия, фосфат кальция), которые усиливают иммунный ответ, образуют депо антигенов и стабилизируют их.

К субклеточным вакцинам относятся менингококковые и пневмококковые вакцины, приготовленные из полисахаридных антигенов капсул;

к субвирионным - гриппозная на основе гемагглютитина и нейраминидазы.

К химическим вакцинам можно отнести анатоксины – препараты, которые получают из бактериальных токсинов. Они полностью лишены токсических свойств, но сохраняют иммуногенность.

Для получения анатоксина в фильтрат питательного бульона, в котором выращивали бактерии-продуценты экзотоксина, добавляют 0,3-0,4% р-р формалина и выдерживают 3-4 недели в термостате при 37-40⁰. Затем анатоксины адсорбируют на адъювантах. Анатоксины применяют для профилактики дифтерии, столбняка, стафилококковой инфекции.

4) синтетические – получены на основе олигопептидов и олигосахаридов – это комплексные макромолекулы, состоящие из антигенной детерминанты, полученной искусственным путем, адъюванта и неприродных полимерных носителей антигена – иммунопотенциаторов. Синтетические вакцины разрабатываются для профилактики сальмонеллеза, коли-бактериоза.

5) генно-инженерные – получены на основе продуктов синтеза рекомбинантных систем: в геном бактерий, вирусов или эукариотических клеток встраивается ген, кодирующий протективные антигены патогенного микроба. При размножении таких рекомбинантных клеток, наряду с собственными антигенами вырабатываются антигены необходимые для получения вакцины. Например, субъединичная вакцина для профилактики гепатита В, получена из антигенов этого вируса, выделяемых рекомбинантными дрожжевыми клетками.