Паракоагуляционные тесты

Для выявления растворимых фибрин-моно­мерных комплексов (РФМК) в КДЛ традицион­но использовали так называемые паракоагуляци-

онные («гельобразующие») тесты - этаноловый и протаминсульфатный. Однако из-за качественной оценки результатов они малоинформативны. Раз­личные модификации протаминсульфатного те­ста с количественным и полуколичественным представлением результата малоточны и плохо воспроизводимы. Протаминсульфат связывается с гепарином, поэтому у больных, получавших ге­парин, протаминсульфатный тест дает отрица­тельный результат. В настоящее время эти тесты можно считать устаревшими.

В последнее время стал активно использо­ваться паракоагуляционный ортофенантролино-вый тест. С помощью ортофенантролинового теста возможно не только качественное, но и ко­личественное определение РФМК. Гепаринотера-пия с содержанием гепарина в плазме крови до концентрации 10 ед/мл не влияет на результаты теста. Ортофенантролиновый тест более чувстви­телен, чем другие паракоагуляционные тесты. Однако при остро протекающих (катастрофичес­ких) формах ДВС с глубокой гипофибриногене-мией показатели паракоагуляционных тестов могут снижаться. Краткая характеристика и ди­агностическое значение представленных выше и дополнительных тестов активации системы гемо­стаза даны в табл. 34.

В табл. 35 суммированы наиболее вероятные изменения лабораторных тестов при некоторых патологических состояниях.

Рис. 128. Пул метаболитов фибриногена в норме. Из

обозначенных продуктов в крови присутствует только сам фибриноген, Все остальные метаболиты находятся в исче-зающе малых количествах

Рис. 129. Пул метаболитов фибриногена при ДВС-син­дроме. Количество фибриногена снижается, появляются продукты деградации фибрина (ПДФ), фибринопептиды (ФПА и ФПВ), растворимые фибрин-мономерные комплек­сы (РФМК), РЭС - ретикулоэндотелиальная система

Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ

Таблица 34

Маркеры активации гемостаза

Изменение некоторых показателей активации гемостаза при патологии

Таблица 35

Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ

Обеспечение качества лабораторной оценки системы гемостаза

Контроль качества в коагулологии является центральным элементом обеспечения эффектив­ности диагностических исследований. Помимо непосредственного контроля за самой аналити­ческой процедурой, необходимо стандартизо­вать и контролировать взятие и подготовку об­разцов на преаналитическом этапе. Оценка по­лученных данных должна проводиться с учетом состояния пациента, используемых им лекар­ственных препаратов, особенностей подготовки образца на преаналитическом этапе, методики выполнения анализа, используемых инструмен­тов и реактивов. О высокой степени качества и

диагностической эффективности лабораторных исследований можно говорить лишь тогда, ког­да под контролем находится весь процесс от на­значения исследования и взятия биологическо­го материала до получения достоверного резуль­тата. Решающим фактором правильности вы­полнения исследования является проведение все­объемлющего внутрилабораторного контроля качества всех выполняемых тестов. Оптималь­ная система контроля предполагает оценку ка­чества лабораторных исследований на внутри-лабораторном, федеральном и международном уровнях.

Стандартные образцы (калибраторы)

Калибраторы требуются для многих тестов. Часто для практических целей используется све­жая сливная плазма от нескольких (не менее 5, же­лательно более 20) здоровых доноров (пулирован-ная плазма, или пул-плазма). Основой применения пул-плазмы является представление о том, что при смешивании плазмы значительного количества здоровых доноров (в импортных пулах смешива­ется плазма десятков и сотен тысяч здоровых до­норов) активность практически всех факторов ге­мостаза становится средней для данной популяции и принимается за 100%, или 1 Ед/мл.

Тем не менее возможны колебания активнос­ти различных факторов в пул-плазмах, собран­ных в разных регионах. Это связано с нескольки­ми факторами:

• имеются генетически детерминированные особенности активности различных факторов в данной популяции людей;

• при использовании пула плазмы, набранной от ограниченного количества доноров (20 и менее), однонаправленные изменения актив­ ности фактора у нескольких из них могут вли­ ять на результирующую активность фактора в пуле.

Эти факторы обуславливают необходимость федерального и международного контроля актив­ности различных факторов в пуле. Приготовле­ние пулированной плазмы для коагулологической

диагностики требует соблюдения некоторых ус­ловий:

• необходимо собрать плазму от достаточного количества доноров в течение ограниченно­ го времени;

• пул-плазму необходимо тщательно переме­ шать до однородной массы;

• рационально хранить ее небольшими порци­ ями;

• температура хранения должна быть не выше -40 °С.

Все это часто делает невозможным приготов­ление пул-плазмы в клинико-диагностической лаборатории. Однако у приготовленной на мес­те плазмы есть одно преимущество: активность факторов в ней соответствует средней для попу­ляции, проживающей в данном регионе.

Альтернативой пул-плазме являются коммер­ческие контрольные плазмы, которые готовятся на биологической матрице (лучшие из плазмы че­ловека) путем добавления определенных коли­честв факторов от тестированных доноров, или коммерческие пулированные плазмы, при изго­товлении которых смешивается плазма десятков и даже сотен тысяч доноров. Такие плазмы, как правило, проходят строгий международный кон­троль. В продаже имеются не только нормальные контрольные плазмы, но и плазмы, дефицитные по отдельным факторам.

Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ

Обычно на основе калибраторов делается се­рия разведений и строится калибровочная кри­вая. Как правило, для построения калибровочной кривой бывает достаточно 4 разведений. При не­линейной калибровке используют 6 разведений калибратора.

В соответствии с клиническими и аналитичес­кими потребностями предлагаются калибровоч­ные растворы для следующих основных коагуло-логических тестов:

• калибровочная плазма для установления ак­ тивности протромбина, факторов протром- бинового комплекса и всех факторов сверты­ вания, определяемых коагуляционными ме­ тодами;

• калибровочная плазма для колориметричес­ ких методов определения AT, протеина С;

• калибровочная плазма для определения фиб­ риногена хронометрическим или оптичес­ ким методом на основе протромбинового времени;

• калибровочная плазма для определения кон­ центрации нефракционированного и низко­ молекулярного гепарина.

Референтная плазма - централизованно при­готовленная нормальная плазма, критерии и про-

цедура приготовления которой определены в стандарте DIN58939-1.