Динамический анализ функции тромбоцитов

Новым подходом в лабораторной диагности­ке является имитирование тромбоцитарного гемо­стаза на приборе PFA-100® (фирма «Dade Behring», Германия). В PFA-100 в измерительном картрид­же цитратная кровь пропускается через капилляр диаметром 150 мкм, моделирующий микрососуд, покрытый пленкой из коллагена/адреналина или коллагена/АДФ (рис. 73-74). Это сопровождается образованием тромбоцитарной пробки, что оце­нивается по перфузионному давлению. Останов­ка перфузии фиксируется как «время окклюзии сосуда». Метод позволяет эффективно с высокой чувствительностью и специфичностью выявлять дефицит фактора Виллебранда, функциональные нарушения тромбоцитов, вызванные аспирином, наследственные и приобретенные нарушения ад­гезии и агрегации тромбоцитов. С применением

2 Агонистов (индукторов агрегации) возможно се­лективное выделение аспириновых тромбоцитопа-тий. По типу измерения pfa-100 является дина­мическим агрегометром.

На практике трудно наработать материал с первичным нарушением гемостаза, чтобы уста­новить референтные значения теста, так как боль­ных с однородными нарушениями достаточно мало. При тромбоцитопатиях, вызванных дли­тельным приемом антитромбоцитарных препара­тов, очень много различных вариантов измене­ний первичного гемостаза. Тем не менее метод по­зволяет выявлять ранние признаки нарушений первичного гемостаза и, по-видимому, имеет большие перспективы для внедрения в коагуло-логические лаборатории и лаборатории экспресс-диагностики.

Рис. 73. Динамический агрегометр PFA-1OO. Он позво­ляет наблюдать in vitro за процессом закупорки сосуда при моделировании этого процесса в специально созданном картридже. Образование тромбоцитарной пробки оцени­вается по перфузионному давлению

Рис. 74. Датчик динамического агрегометра PFA-1OO со­держит капилляр, моделирующий микрососуд. В цельной кро­ви, проходящей по капилляру, активируется образование сгу­стка, На стенках нанесен коллаген и адреналин или АДФ, которые являются первичной причиной запуска гемостаза

Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ

Тромбоцитарные показатели

Число тромбоцитов (Platelets, PL, PLT)

При подсчете на автоматических анализато­рах тромбоциты распознаются по размерам в ди­апазоне 2-20 фл (рис. 75). Автоматические счет­чики позволяют получать достаточно надежные результаты по количеству тромбоцитов. При под­счете тромбоцитов в камере Горяева коэффици­ент вариации составляет 7-15%, тогда как авто­матический подсчет воспроизводится с точностью до 2-4%. Современные анализаторы сигнализи­руют (флагирование на бланке) о выходе количе­ства тромбоцитов за референтные пределы, на­личии агрегатов тромбоцитов, макротромбоци­тов или других элементов, сравнимых по объему с тромбоцитами (микроэритроциты).

Ложное занижение числа тромбоцитов может быть при их агрегации, агглютинации под дей­ствием тромбоцитарных агглютининов и при прилипании тромбоцитов к лейкоцитам (тромбо-цитарный «сателлитизм»). При подсчете на гема­тологических анализаторах в качестве антикоа­гулянта используется ЭДТА. При наличии ауто-антител к тромбоцитам калиевая соль ЭДТА ини­циирует агрегацию тромбоцитов, что проявляет­ся псевдотромбоцитопенией.

Средний объем тромбоцита (MPV)

У здоровых людей MPV равен 6-12 фл и нахо­дится в обратной зависимости от числа тромбо­цитов. Такое соотношение определяет постоянство тромбоцитарной массы в циркулирующей крови. MPV увеличивается с возрастом; отмечено, что у мужчин MPV несколько выше, чем у женщин.

Использование ЭДТА в качестве антикоагу­лянта вызывает изменение формы тромбоцитов от диска к сфере, что приводит к увеличению MPV на 10-12% в течение 2 часов, а затем показатель существенно не меняется. Под действием цитрата натрия MPV может уменьшаться или увеличивать­ся, а при высокой концентрации (1:4) - не изменя­ется со временем. Кроме типа применяемого ан­тикоагулянта и времени от момента взятия пробы до исследования, на MPV оказывает влияние тем­пература окружающей среды. Преходящее увели­чение MPV отмечается у рабочих, контактирую­щих с асфальтовыми испарениями, органически­ми растворителями. MPV - важный диагностичес­кий показатель функции тромбоцитов. Причины изменения MPV представлены в табл. 13.

Таблица 13

Причины изменения MPV

Рис. 75. Гистограмма тромбоцитов, которая изобража­ется при представлении результатов счета клеток крови на гематологических анализаторах, Помимо гистограммы, ге­матологические анализаторы представляют результаты подсчета количества тромбоцитов (PLT), среднего объема тромбоцитов (MPV), дисперсии распределения тромбоци­тов по объему (PDW), тромбоцитокрита (РСТ)

Дисперсия распределения тромбоцитов по объему (PDW)

PDW - показатель, являющийся мерой ге­терогенности размеров (анизоцитоза) тромбо-

Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ

мов тромбоцитов или произведением среднего объема тромбоцитов на их число:

цитов. Величина PDW в среднем составляет 10-15%.

Как артефакт, ложнозавышенное увеличение PDW может быть связано с присутствием микро-цитов, шизоцитов, микроагрегатов тромбоцитов, фрагментов цитоплазмы лейкоцитов.

Этот показатель находится в обратной зави­симости от числа тромбоцитов и их периода жиз­ни. В каждом конкретном случае важна не толь­ко величина PDW, но и ее динамика во времени, а также связь с другими тромбоцитарными по­казателями. Так, увеличение PDW с одновремен­ным снижением MPV свидетельствует о преоб­ладании микротромбоцитов среди общей попу­ляции тромбоцитов (указывает на угнетение тромбоцитопоэза), а сочетание повышенного PDW с увеличением MPV отражает нарастание числа макротромбоцитов (усиление продукции тромбоцитов). Одновременное присутствие фракций макротромбоцитов и микротромбоци­тов ведет к увеличению PDW, но MPV может ос­таваться в пределах нормы. В современных ге­матологических анализаторах отдельными пока­зателями указывается процентное содержание микротромбоцитов (MicroPLT) и макротромбо­цитов (MacroPLT).

PDW может применяться для дифференци­альной диагностики. Так, увеличение PDW свы­ше 10,5% было обнаружено у 50% больных эссен-циальной тромбоцитемией, у 21% пациентов с ре­активным тромбоцитозом и лишь у 14% здоро­вых людей.