Автоматизированные коагулометры

Автоматизированные коагулометры суще­ственно улучшили точность и повторяемость ре­зультатов коагуляционных тестов, уменьшили влияние человеческого фактора. В настоящее вре­мя имеется большой выбор различных приборов для исследования гемостаза, начиная от самых простых, в которых автоматизирован лишь про­цесс фиксации момента свертывания крови, до сложных машин, требующих лишь установить отцентрифугированные пробирки в штатив и за­дать программу исследований. В последние годы появляются биохимические анализаторы, в кото­рых предлагаются программы для регистрации коагуляционных тестов методом турбидиметрии по резкому изменению светопропускания в мо­мент свертывания плазмы. Все это значительно расширило возможности оценки гемостаза в кли­нико-диагностических лабораториях. В то же вре­мя исследование гемостаза по-прежнему предъяв­ляет высокие требования к преаналитическому этапу, качеству подготовки проб, квалификации лаборантов, проводящих исследования.

В последние несколько лет в аналитическом подходе к оценке гемостаза, в том числе и из-за внедрения автоматизации, существенно повыше­ны требования к стандартизации. Стандартиза­ция рассматривается как спектр приемов иссле­дования гемостаза, обеспечивающий воспроизво­димые в разных лабораториях результаты за счет применения разовых систем взятия крови, аттес­тованных методов, реактивов, приборной базы, международных стандартов при калибровке, про­ведения внутрилабораторного контроля качества, участия во внешнем и международном контроле качества и др. Наиболее ярким примером такого подхода является переход от определения нестан-

дартизованного протромбинового индекса к оп­ределению международного нормализованного отношения (MHO) при использовании аттесто­ванного по международным стандартам тромбоп-ластина (см. ниже). Однако многие коагуляцион-ные методы плохо поддаются стандартизации, в том числе такой широко распространенный тест, как активированное частичное тромбопластино-вое время (АЧТВ).

В основе регистрации момента выпадения сгустка в коагулометрах используются несколь­ко принципов: механический, турбидиметричес-кий, оптико-механический. Каждый из них име­ет свои преимущества и недостатки, которые важ­но знать при интерпретации результатов иссле­дований (см. ниже).

Ограничения коагуляционных методов:

• Ограниченное время регистрации. Тест дол­ жен быть проведен в течение примерно 10- 200 с. Это возможно далеко не для всех ана­ лизов.

• Далеко не все компоненты гемостаза можно исследовать по времени образования сгуст­ ка. Компоненты системы фибринолиза, инги­ биторы не оказывают прямого влияния на время свертывания, и их количественная оценка не поддается исследованию клоттин- говым методом.

• Метод чувствителен к различным неспеци­ фическим внешним воздействиям. Напри­ мер, исследование активности ф.VIII клот- тинговым методом невозможно у пациента, получающего терапию гепарином или непря­ мыми антикоагулянтами, хотя ни те ни дру­ гие не оказывают непосредственного влия­ ния на этот фактор.

• Метод малочувствителен для определения повышенной активности компонентов систе­ мы свертывания крови.

• Для ряда тестов сложно создать устойчивые реактивы, удобные для применения в диаг­ ностических лабораториях. Существенной проблемой на этом пути является использо­ вание активаторов плазменных факторов, в частности использование на первом этапе ак­ тиваторов протеолитических реакций. Акти­ ваторы могут быть нефизиологическими, ко­ торые имитируют твердую фазу поверхнос­ ти (каолин, целит), или физиологическими

Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ

(экстракты тканей, очищенные или рекомби-нантные активаторы факторов свертыва­ния). Несколько этапов свертывания требу­ют не только активаторов, но и кофакторов свертывания, фосфолипидов и ионов Са²⁺. Для практических целей применяются сме­си этих веществ, часто с нестабильными бел­ками, которые иногда трудно очистить и ста­билизировать (например, тромбин). В учреж­дениях с высоким научным потенциалом часто применяются активаторы на основе змеиных ядов. Эти натуральные активаторы зачастую превышают по своим характерис­тикам даже высокоочищенные и рекомби-нантные активаторы. Они бывают устойчи­выми к действию ингибиторов и прямых ан­тикоагулянтов, часто не требуют кофакто­ров и ионов Са²⁺. Однако использование та­ких активаторов ограничено высокой сто­имостью и малой доступностью для практи­ческих лабораторий.

Механические коагулометры

Принцип работы механических коагуломет-ров представлен на рис. 83. В одном из вариан­тов кювета с плазмой вращается в наклонном

Рис. 83. Принцип работы механического коагуломет-

ра. Кювета с плазмой расположена под наклоном и вра­щается, шарик стоит на месте, не вращается. В момент свертывания шарик захватывается сгустком; как только шарик уходит от датчика, меняется магнитное поле, при­бор регистрирует момент свертывания плазмы

положении. Металлический шарик в кювете нач­нет вращаться при свертывании плазмы. Момент захвата шарика выпавшим сгустком и начало его вращения вместе с кюветой фиксируется магнит­ным датчиком. При других вариантах регистри­руется прекращение вращения внутри кюветы магнитной мешалки, захват сгустка опускаю­щимся в кювету крючком или иные схемы, ос­нованные на переходе жидкой плазмы в сгусток. Механические коагулометры характеризуются высокой надежностью и простотой в обслужи­вании. Кроме того, они могут работать с цель­ной кровью. Основные проблемы возникают в ситуациях, когда формируется неплотный сгус­ток, например при использовании гепарина. В этих случаях выпадающий фибрин часто не мо­жет сразу увлечь за собой механическое устрой­ство, результаты получаются плохо воспроизво­димыми. Другой проблемой является формиро­вание на шарике, мешалке или других устрой­ствах, погруженных в кювету, белковых конгло­мератов, которые мешают регистрации.