Определение фактора Виллебранда (vWf)

Определение vWF проводится в основном для:

• диагностики и последующего мониторинга врожденной или приобретенной болезни Вил­ лебранда;

• диагностики тромбофилии;

• дифференциальной диагностики гемофилии А. Имеется несколько методических подходов

для диагностики болезни Виллебранда. Один из алгоритмов диагностики болезни Виллебранда представлен в табл. 25.

Концентрация vWF определяется методами иммунотурбидиметрии, ELISA, «ракетным» элек­трофорезом. Связывающая способность фактора Виллебранда с коллагеном определяется в мик-

роплашках, покрытых коллагеном, методом ELISA. Результат выражается как % от нормы. Состав субъединиц определяется электрофорезом в геле агарозы или иммуноблотом. Функциональ­ная активность определяется методом агглюти­нации фиксированных или отмытых тромбоци­тов или агрегации в богатой тромбоцитами плаз­ме при индукции ристомицином (Ристоцетин®). Метод с хромогенными субстратами в настоящее время рекомендуется использовать только как ориентировочный.

Алгоритмы дифференциальной диагностики приводятся в разделе, посвященном болезни Вил­лебранда.

Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ

Таблица 25

Алгоритм диагностики болезни Виллебранда

Определение с использованием хромогенного субстрата

Определение фактора X с использованием хромогенного субстрата

Определение фактора X - один из самых распространенных методов с использованием хромогенных субстратов. Это объясняется тем, что по активности фактора Ха в последнее вре­мя все больше и больше контролируют анти-коагулянтный эффект низкомолекулярных ге-паринов (табл. 20). Появились предложения контролировать лечение непрямыми антикоа­гулянтами также с помощью определения фак­тора Ха.

В тесте используют фермент яда гадюки Рас­села, активирующий фактор X (RVV-X - factor X activation enzyme from Russel viper venom), или яда гюрзы обыкновенной - лебетоксовый тест. Ак-

тивный фактор Ха определяют в прямой реакции с хромогенным субстратом, в частности с Pefa-chrome® FXa (фирма «DADE Behring Marburg GmbH», Германия). Принцип метода представ­лен на рис. 104.

Рис. 104. Принцип определения содержания фактора X

с использованием хромогенного субстрата. pNA-пара-нитроанилин. Измерение проводится при длине волны (λ) 405 нм фотометрическим методом

Определение фактора VIII с использованием хромогенного субстрата

Определение фактора VIII основано на том, что количество образующегося фактора Ха в ре­акциях активации плазменного гемостаза про­порционально содержанию фактора VIII в пробе (рис. 105).

Этот тест выполняет не только аналитичес­кую функцию, но и характеризует функциональ­ную активность, так как фактор VIIIa оценива­ется в присутствии физиологических кофакторов фосфолипидов и ионов Са²⁺. Тест может выпол-

няться как на специализированных фотометрах для исследования гемостаза, так и на обычных фотометрах и биохимических анализаторах. Ка­либровочная кривая для этого теста, как прави­ло, имеет линейный участок в широком диапазо­не концентраций фактора VIII.

Исследование с хромогенными субстратами позволяет надежно количественно определять не только дефицит, но и избыток активности ф.VIII. Это позволяет диагностировать и прогнозировать

Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ

Рис. 105. Принцип определения содержания фактора VIII с использованием хромогенного субстрата. ФЛ - фосфо-липиды

развитие патологических тромбозов, поскольку увеличение в плазме активности фактора VIII рас­сматривается как фактор тромбофилии.

Методические и аналитические моменты (об­разование комплекса между фактором VIII и фак­тором Виллебранда (vWF) в дефицитной плазме, разные типы фосфолипидов, использование плаз­мы или концентратов и т. д.) могут приводить к систематическим различиям результатов между коагуляционными методами и методами с хромоген-ными субстратами при определении фактора VIII.

Более того, одна технология может выявлять па­тологию, а другая свидетельствовать о нормаль­ном содержании фактора VIII. Поэтому в насто­ящее время проводятся активные попытки стан­дартизации как коагуляционных, так и хромоген-ных методов определения фактора VIII. До вве­дения стандартизации рекомендуется метод с хро-могенными субстратами использовать толь­ко как ориентировочный и предпочтительно для оценки концентратов фактора VIII, а не с диаг­ностическими целями.