Определение фактора VII с использованием хромогенного субстрата

Фактор VII является слабой амидазой и не способен гидролизовать синтетические субстра­ты в плазме. Поэтому определение фактора VII проводится с помощью сопряженных реакций (рис. 106).

Фактор VII в пробе активируется тканевым фактором, фосфолипидами и ионами Са²⁺. Обра­зующийся комплекс ф.VII-ТФ-ФЛ-Са²⁺ активи­рует фактор X, активную форму которого опре­деляют тест-системой, аналогичной Pefachrome®. В то же время следует учитывать, что метод со-

пряженных реакций в случае определения факто­ра VII характеризуется существенным усилением сигнала, так как фактор VIIa приводит к актива­ции не одного, а нескольких десятков молекул фактора X.

Соотношение коагуляционного и хромогенно­го методов. Коагуляционный метод не всегда позволяет достаточно точно оценить активность фактора VII в плазме. Это связано с тем, что тка­невыми тромбопластинами активируется только часть фактора VII. Кроме того, разные тромбо-

Рис. 106. Принцип определения содержания фактора VII с использованием хромогенного субстрата. ТФ - тканевой фактор

Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ

пластины обладают разным активирующим эф­фектом, хотя полной активации фактора VII в пробе не удается достичь ни одним из тромбоп-ластинов. Еще одной причиной ошибок может быть способность ф.VII к нестимулированной и холодовой активации.

По-видимому, при оценке активности факто­ра VII с использованием хромогенных субстра­тов выявляется большее количество этого факто­ра, чем при использовании клоттинговых тестов. Клоттинговые тесты практически не выявляют

повышения фактора VII, а технология с хромо-генными субстратами способна определить его повышенное содержание в плазме. Исходя из того, что повышение фактора VII в плазме уве­личивает риск тромбоэмболической болезни, а лечение стероидами, беременность, сахарный ди­абет, состояние после инфаркта миокарда и ги-пертриглицеридемия сопровождаются повыше­нием активности фактора VII, методы с хромо-генными субстратами необходимо внедрять, что­бы оценивать риск тромбозов.

Определение протромбина (фактора II) с использованием хромогенного субстрата

. -■ --■ -------- ......

Протромбин достаточно надежно определя­ется коагуляционным методом. Однако опреде­ление протромбина с использованием хромоген­ного субстрата относительно хорошо стандарти­зовано. Кроме того, измерительный диапазон существенно расширяется при скрининге пациен­тов с протромбиновой мутацией G20210A, при которой увеличен риск тромбоэмболии. Про­тромбин активируется металлопротеазой экари-ном (фермент яда эфы многочешуйчатой) до ме-зотромбина - производное, которое не блокиру­ется гепарином и комплексом антитромбин-гепа­рин, но способно гидролизовать хромогенный субстрат (рис. 107) и свертывать не только обык­новенный фибриноген, но и некоторые тромбин-резистентные его производные (РКМФ).

PIVKA-протромбин активируется экарином, поэтому этот хромогенный тест может дать ложно-

завышенные результаты по активности протромби­на у пациентов, принимающих непрямые антикоа­гулянты или страдающих дефицитом витамина К. Примечание. PIVKA - Proteins Induced by Vita­min К Absence or Antagonists - протеины, синте­зируемые печенью при отсутствии витамина К или в присутствии его антагонистов (непрямых анти­коагулянтов). PIVKA не способны участвовать в процессе свертывания крови (см. раздел «Лечение антикоагулянтами непрямого действия».

Рис. 107. Принцип определения протромбина с исполь­зованием хромогенного субстрата