6.4.2. Диагностика

Для диагностики пневмоний и выяснения причин их возникновения используют эпизоотологический, клинический, патологоанатомический, лабораторные (вирусологический, бактериологический, серологический и др.) методы исследований, а при необходимости биологическую пробу и генетический анализ.

Эпизоотологическим методом изучают эпизоотический процесс.

Клинический метод позволяет изучить симптомокомплекс заболевания.

Патологоанатомическим методом изучают характер и место локализации воспалительного процесса в органах дыхания.

Биологическая проба позволяет установить инфекционную природу пневмоний, воспроизвести заболевание на здоровых животных.

Генетическим методом (по книгам зоотехнического учета) выясняют связь патологии, в частности, пневмоний с наследственными факторами.

Перечисленные пять методов используют непосредственно в неблагополучных хозяйствах. Полученные данные при их использовании тщательно анализируют и обобщают.

Учитывая, что клинико-эпизоотологические и патологоанатомические изменения при респираторных болезнях свиней сходны, поэтому решающее значение в постановке диагноза имеют лабораторные исследования.

Лабораторными методами уточняют этиологию пневмоний. При этом проводят - отбор и пересылку патологического материала в лабораторию или научно-исследовательское учреждение;

– подготовку патматериала для исследований;

– индикацию возбудителей (антигенов) и ретроспективную диагностику;

– при необходимости морфологические и биохимические исследования крови и гистологические исследования патматериала.

Отбор патологического материала.

В лабораторию направляют патматериал от животных, не подвергавшихся лечению антибактериальными препаратами, взятый в период максимального проявления у них клинических признаков (угнетение, температурная реакция, чихание, кашель, выделение из носовой полости) или от 2-3 убитых с диагностической целью животных.

От больных животных берут: I) ватно-марлевыми тампонами выделения из носовой полости; 2) смывы со слизистой носа путем спринцевания физиологическим раствором или раствором Хенкса; 3) сыворотку крови для ретроспективной диагностики; 4) кровь для морфологических и биохимических исследований.

Тампоны с материалом и смывы со слизистой носа помещают в пробирки с питательной средой (для выращивания микоплазм) для бактериологических исследований и заражения лабораторных животных, и в пенициллиновые флаконы (пробирки) с 2-3 мл питательной среды для культуры клеток или раствора Хенкса, содержащими по 500 - 1000 ЕД/м пенициллина и стрептомицина - для вирусологических исследований.

Кровь в объеме не менее 5 мл берут в стерильные пробирки двукратно с интервалом в 2-3 недели.

От убитых с диагностической целью животных берут участки легких на границе здоровой и пораженной ткани, бронхиальные и средостенные лимфатические узлы, бронхиальную слизь, кусочки паренхиматозных органов.

Патологический материал для лабораторных исследований доставляют в термосе со льдом. При необходимости его консервируют 30% водным раствором глицерина (для бактериологических исследований) или замораживанием (для вирусологических исследований).

Наиболее надежным и универсальным способом сохранения, патологического материала для всех видов диагностических исследований является его замораживание в жидком азоте или твердой углекислоте (сухом льду).

Для гистологических исследований патматериал фиксируют в 10 % растворе нейтрального формалина.

Подготовка патологического материала для исследований.

Подготовку патматериала и исследования, направленные на выделение и идентификацию вирусов, микоплазм, бактерий, хламидий, грибов, осуществляют в соответствии с:

– «Методическими рекомендациями по выделению, культивированию и идентификации микоплазм, ахолеплазм и уреаплазм», (М.,1982);

– «Методами лабораторной диагностики вирусных болезней животных», (М.,1986);

– «Методическими рекомендациями по лабораторной диагностике инфекционных пневмоний свиней, вызываемых микоплазмами, пастереллами и бордетеллами», (Киев-Иена, 1983);

– «Методическими указаниями по лабораторной диагностике пасте-реллезов животных и птиц», (М.,1992);

– «Лабораторными исследованиями в ветеринарии (бактериальные инфекции)», (М.,1986);

– «Методическими указаниями по лабораторной диагностике хлами-диозного аборта овец и коз», (М.,1983);

– «Методическими указаниями по лабораторным исследованиям на пневмококковую (диплококковую) инфекцию животных», (М., 1984);

– «Рекомендациями по выделению гемофильных бактерий, приведенными в монографии М.А. Сидорова, Д.И. Скородумова «Гемофиллезы животных» (М.,1986).

Морфологические и биохимические исследования крови и гистологические исследования патматериала проводят общепринятыми методами.

Из патологического материала предварительно делают посев на питательные среды, готовят три серии мазков-отпечатков и после их фиксации одну серию окрашивают по Граму, вторую - по Романовскому-Гимзе, третью - обрабатывают методом флуоресцирующих антител (МФА), а затем проводят подготовку его для заражения лабораторных животных, микоплазмологических и вирусологических исследований.

Из испытуемого материала готовят суспензию на растворе Хенкса в соотношении 1:10, которую делят на 3 части. Одну часть используют для подкожного или внутрибрюшинного заражения 2-3 белых мышей, морских свинок, кроликов в дозах соответственно 0,2; 0,5 и I мл. Вторую часть суспензии центрифугируют при 4500 об./мин. в течение 15- 20 мин., к надосадочной жидкости добавляют 500 - 1000 ЕД/мл пенициллина и ацетат таллия (конечная концентрация 1:2000), выдерживают 1 час при комнатной температуре в темном месте. В течение этого времени суспензию центрифугируют 10-15 минут при 1500-2000 об./мин. для удаления крупных частиц ткани. Затем ее используют для посева на питательную среду для выращивания микоплазм. Для контроля бактериальной контаминации материала параллельно делают посев на МПБ, МПА и среду Китта-Тароцци. Третью часть суспензии замораживают, затем размораживают и центрифугируют при 1500-2000 об./мин. в течение 15-20 мин (при исследовании на болезнь Ауески суспензию центрифугируют 20-30 мин. при 3000 об./мин., а на хламидиоз ее отстаивают в течение 2 часов). К надосадочной жидкости добавляют по 500 ЕД/мл пенициллина и стрептомицина (при исследовании на хламидиоз только 500 ЕД/мл стрептомицина), выдерживают ее 1 час при 4°С и используют для заражения лабораторных животных, куриных эмбрионов и культур клеток.

Из осадка центрифугата готовят мазки для исследования МФА прямым или непрямым вариантом.